Descripción
Hieff™ Versatilidad La ligasa de ADN T4 es una variante de la ligasa de ADN T4. Esta enzima es adecuada para catalizar la reacción de ligación entre moléculas cohesivas o de extremos romos. Es un producto de una sola enzima diseñado para conectar fragmentos de ADN y adaptadores durante el proceso de preparación de la biblioteca en la secuenciación de próxima generación (NGS). La enzima Hieff® La versatilidad de la ADN ligasa T4 ha sido ampliamente validada a través de secuenciación de alto rendimiento y exhibe una calidad excepcional.
Característica
- Alta fidelidad
- Termotolerante
Obtenga más información sobre el desarrollo de la versátil ligasa de ADN T4
Presupuesto
| Fuente | E. coli recombinante |
| Búfer de almacenamiento | 50 millones Tris-HC1,100 mM de KCl 1,0,1 EDTA mM, DTT 1 mM, 50 % glicerol, pH 7,5Yo0,2 a 25 ℃ |
| Definición de unidad | En un sistema de reacción de ligadura de 20 μL, la cantidad de enzima necesaria para catalizar la ligadura de más del 50% de los fragmentos de ADN, cuando se hacen reaccionar 6 μg de λDNA-Hind III a 16 °C durante 30 minutos, se define como 1 unidad de actividad (U). |
Componentes
| Componentes | Nombre | 12996ES60 60 ku | 12996ES62 600 KU |
| 12996-A | Hieff® Ligasa de ADN T4 versátil (600 U/µL) | 100 μl | 1000 μL |
| 12996-B | Tampón de ligasa de ADN 10×T4 | 500 μL | 3×1500 μL |
Almacenamiento
Este producto debe almacenarse a -25~-15℃ durante 2 años.
Cifra
Deje un mensaje para solicitar información sobre los datos de comparación de rendimiento entre esta enzima y otras ligasas de ADN T4 termoestables y convencionales de primer nivel.
Notas
1. Por favor trabajar con bata de laboratorio y guantes desechables.，Para su seguridad.
2. Si se produce una pequeña cantidad de precipitación en el tampón, es un fenómeno normal. Invierta y mezcle bien el tampón antes de usarlo.
3. Este producto es solo para uso de investigación.
Protocolo
1. Los kits de preparación de bibliotecas de ADN convencionales actuales que utilizan el método basado en ligadura normalmente no requieren pasos de purificación después de la reparación de extremos y la formación de colas A. Los fragmentos de ADN se someten directamente a la ligadura del adaptador sin purificación. Este kit es compatible con el método convencional Sistemas de reparación de extremos y de unión en A disponibles comercialmente para ligadura de adaptadores sin costura.
Prepare la siguiente reacción en un tubo de microcentrífuga en hielo, mezcle suavemente pipeteando o agitando, centrifugue brevemente e inactive por calor a 20 °C durante 15 minutos.
Tabla 1. Sistema de reacción para la ligadura del adaptador
| Componente | Volumen（microlitros） | Concentración final |
| ADN con cola dA | 60 | 1× |
| Tampón de ligasa de ADN 10×T4 | 10 | 0,1 μM-0.5 micrometros |
| 50% PEG6000 | 12* | 1 -400 ng |
| Adaptador de ADN | 5** |
|
| 3~5*** |
| |
| Agua libre de nucleasas | arriba hasta 100 | - |
【Nota】*La solución de PEG6000 al 50% no está incluida en el kit, deberá prepararla usted mismo.
**Consulte la tabla 2 Para el Cantidad de adaptador.
***La cantidad de ADN ligasa T4 se puede agregar según sea necesario, de 3 a 5 μL.
2. La concentración del adaptador afecta directamente la eficiencia de la ligación y el rendimiento de la biblioteca. El uso excesivo de adaptadores puede resultar en más dímeros adaptadores, mientras que el uso bajo puede afectar la eficiencia de la conexión y la producción de la biblioteca. Tabla 2 enumera la cantidad de adaptador recomendada para diferentes cantidades de ADN de entrada.
Tabla 2. Cantidad de adaptador recomendada para 100 pg-1 μg de ADN de entrada
| Entrada de ADN | Concentración |
| 0,1 en | |
| 1 ng | 0,5 μM |
| 10 ng | 1 μM |
| 25 ng | 2 μM |
| 100 ng ~ 1000 ng | 10 μM |
【Nota】：La cantidad de adaptador Se puede ajustar según los requisitos de la tabla anterior.
Pago y seguridad
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Consulta
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Preguntas frecuentes
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