Descripción
La endonucleasa VIII es una enzima reparadora del ADN que posee actividad de N-glicosilasa y de AP-liasa. La actividad de N-glicosilasa puede liberar bases de pirimidina dañadas del ADN bicatenario, creando un sitio abásico (AP). La actividad de AP-liasa luego escinde el enlace fosfodiéster en el sitio AP, lo que da como resultado un espacio con un fosfato 5' y un fosfato 3'. Las bases dañadas que la endonucleasa VIII reconoce y extirpa incluyen: urea, 5,6-dihidroxitimina, timina glicol, 5-hidroxi-5-metoxihidantoína, uracilo glicol, 6-hidroxi-5,6-dihidrotimidina y metilhidroxipropanona.
Características
Sin residuos de exonucleasas, endonucleasas o ARNasas
Eliminación de bases dañadas con alta eficiencia
Aplicaciones
Electroforesis en gel de células individuales (ensayo Comet)
Elución alcalina
Desenrollado alcalino
Presupuesto
| Sfuente | E. coli |
| Molecular Yoocho | 29 KDa |
| Concentración | 10 uds./microlitros |
| Unidad DDefinición | Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para escindir 1 pmol de un dúplex de oligonucleótidos de 34 pb que contiene un sitio AP* en 10 µyo Sistema de reacción total con 10 pmol de dúplex de oligonucleótidos marcados con fluorescencia en 1X Endonucleasa VIII RTampón de reacción a 37 °C en 1 hora |
| Inactivación doondiciones | IIncubar a 75°C durante 10 minutos. |
Componentes
| Componentes No. | Nombre | 14536ES80 | 14536ES90 |
| 14536-A | Endonucleasa VIII (10 U/μL) | 500 microlitros | |
| 14536-B | Tampón de reacción de endonucleasa VIII 10 × | 1.5 ml | 1.5 ml |
Envío y almacenamiento
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Cifras
Figura 1. Comparación del efecto de la reparación por escisión de la base
Nota: 20 pmol de oligonucleótidos fueron catalizados por la endonucleasa VIII de Yeasen y el Proveedor A, respectivamente, en un sistema de reacción de 20 µL con la adición de 5~40 U de endonucleasa VIII y actividad enzimática equivalente de UDG (Cat#10303ES), y se incubaron a 37℃ durante 1 hora. Los resultados de la electroforesis en gel de agarosa mostraron que los efectos de escisión de bases de la endonucleasa VIII de Yeasen y del proveedor A fueron consistentes.
Documentos:
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Manuales
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