Descripción
El reactivo de escisión específico de uracilo (conocido como USER) es un cóctel enzimático que consta de uracilo ADN glicosilasa (UDG) y endonucleasa VIII (Endo VIII). Es capaz de generar espacios de un solo nucleótido específicamente en las ubicaciones de uracilo. UDG facilita la escisión de la base de uracilo, lo que da como resultado la formación de un sitio AP (sitio apurínico/apirimidínico) mientras se mantiene la integridad de la cadena principal de azúcar-fosfato de fosfodiéster. La actividad endonucleasa de Endo VIII escinde el enlace fosfodiésterds en ambos 3" y 5" extremos del sitio apurínico, liberando así el azúcar desoxirribosa que carece de base.
Características
Sin nucleasas ni ARNasas residuales
Alta eficiencia de escisión
Aplicaciones
Construcción de bibliotecas específicas de cadenas de ARN
Clonación mediada por escisión específica de uracilo (USER-LIC)
Ensamblaje de ADN, como el ensamblaje de monómeros TALE
Construcción en serie de múltiples bibliotecas de ADNc a partir de células individuales
Presupuesto
| Concentración | 1 U/µL |
| Unidad DDefinición | Uno La unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para cortar un oligonucleótido bicatenario de 34 meros que contiene una única base de uracilo en un espacio de 10 μm.yo sistema de reacción a 37°C durante 15 minutos, lo que corresponde a la escisión de 10 pmol del sustrato. |
| Inactivación doondiciones | 75℃, 10 mín. |
Componentes
| Componente No. | Nombre | 14537ES50 | 14537ES72 |
| 14537-A | Reactivo de escisión específico de uracilo (1 (U/μL) | 50 μl | 250 μL |
| 14537-B | 10×Reactivo de escisión específico de uracilo Tampón de reacción | 1.25 ml | 1.25 ml |
Envío y almacenamiento
Los productos deben almacenarse en:25℃ ~ -15℃ para 1 año.
Cifras
Figura 1. Comparación de los efectos de la escisión
Nota: Se extirparon 10 pmol de ADN bicatenario que contenía dUTP utilizando la enzima USER de Yeasen y un producto comparable del Proveedor A. Los resultados de la electroforesis en gel de agarosa mostraron que los efectos de extirpación de la enzima USER de Yeasen fueron consistentes con los del Proveedor A.
Cifra2Comparación de recuentos de colonias para clonación USER-LIC
Nota: Se ligó un fragmento de ADN de 600 pb utilizando la enzima USER de Yeasen y un producto comparable del Proveedor A para construir un vector, que luego se transformó en E. coli y se cultivó. Se observó el número de colonias en la placa de cultivo y los resultados indicaron que la eficiencia de clonación de USER-LIC utilizando la enzima USER de Yeasen fue superior a la del Proveedor A.
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