La ARNasa HII es una enzima interna de ribonucleasa obtenida de la Pyrococcus abyssi y expresado de forma recombinante en E. coliReconoce la doble cadena ADN-rN-ADN/ADN, cortando en el sitio donde los ribonucleótidos se incorporan al ADN. Sin embargo, su actividad en ARN monocatenario es muy baja y no muestra actividad de corte en dsADN o ssADN. La ARNasa HII corta en el sitio de un solo residuo de ribonucleótido del extremo 5', produciendo un grupo fosfato 5' y un extremo hidroxilo 3' después del corte. Esta enzima ARNasa HII tiene una actividad óptima a 70~75 °C, es activa entre 50 °C y 75 °C, pero tiene una actividad muy baja a temperatura ambiente. El producto es altamente termoestable, con casi ninguna pérdida de actividad después de la incubación a 95 °C durante 45 minutos, y es compatible con varios sistemas de reacción de PCR.

Presupuesto

Componentes

Almacenamiento

Este producto debe almacenarse a una temperatura entre -25 y -15 °C. por 2 años.

Aplicación del producto

1. Detección mediante LAMP con sondas de alta sensibilidad.
2. PCR dependiente de ARNasa HII (rhPCR).
3. Eliminación de ribonucleótidos no coincidentes formados durante la reacción en cadena de la polimerasa.
4. Degradación de la porción de ARN de los fragmentos de Okazaki.

Notas

1. Este producto es solo para uso de investigación.
2. Por favor trabaje con bata de laboratorio y guantes desechables, para su seguridad.

Cifras

1. E. coli residuo de ADN genómico < 0,5 copias/100 U

Detección de E. coli Los residuos de ADN genómico en diferentes lotes de ARNasa HII mostraron que el residuo de ADN genómico del huésped de la ARNasa HII de YEASEN está muy por debajo de 0,5 copias/100 U.

Fig 4. Detección de E. coli residuo de ADN genómico

2. Prueba de resistencia al calor a 95 °C

Después de calentar la ARNasa HII a 95 °C durante 0 a 45 minutos, se analizó la actividad enzimática de la ARNasa HII. Los resultados indicaron que casi no hubo pérdida de actividad enzimática en la ARNasa HII de YEASEN incluso después de 45 minutos de calentamiento.

Fig. 5. Prueba de resistencia al calor a 95 °C

3. Sin exonucleasa, enzima de corte ni residuo de ARNasa (dosis de 1 U)

Al incubar 1 U de diferentes lotes de ARNasa HII con sus respectivos sustratos ADN/ARN a 37 °C durante 4 horas, los resultados de la electroforesis en gel de agarosa indicaron que no había exonucleasa, enzima de mellado ni residuo de ARNasa en la ARNasa HII.

Fig. 6. Detección de exonucleasa, enzima de corte y residuo de ARNasa.

Documentos:

Manuales