Descripción
La transcriptasa inversa súper Hifair™ es una transcriptasa inversa de próxima generación, cual era enortediseñado De M-MLV. Esta enzima carece de actividad de ARNasa H y presenta una estabilidad térmica significativamente mejorada, tolerando temperaturas de reacción de hasta 70 °C. Es muy adecuada para la transcripción inversa eficiente de moldes de ARN con estructuras secundarias complejas.
Aplicaciones
Este producto es apto para experimentos de RT-PCR, RT-qPCR, RT-LAMP, secuenciación de ARN y síntesis de ADNc. La temperatura de la reacción de transcripción inversa puede alcanzar hasta 70 °C.
Definición de unidad
Una unidad (U) de actividad enzimática se define como la cantidad de enzima necesaria para incorporar 1 nmol de dTTP en material insoluble en ácido en 10 minutos a 37 °C, utilizando Poly(A).Oligo(dT) como cebador-plantilla.
Componente
| Componente | Nombre | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | Hifair™ Supertranscriptasa inversa (200 U/μL) | 50 μL | 250 μL |
Condiciones de almacenamiento
Conservar entre -25˚C y -15˚C durante un máximo de 18 meses.
Instrucciones de uso
Procedimiento de síntesis de ADNc de primera cadena
1. Desnaturalización del ARN (paso opcional)
1. La desnaturalización del ARN ayuda a abrir estructuras secundarias, mejorando significativamente el rendimiento de ADNc de primera cadena.
| Componente | Volumen |
| ddH2O libre de ARNasa | hasta 13 μL |
| Oligo(dT)18 (50 μM) o cebadores aleatorios (50 μM) o cebadores específicos de genes (2 μM) | 1 μL |
| ARN molde | ARN total: 10 pg - 5 μg o ARNm: 10 pg - 500 ng |
· Calentar a 65°C durante 5 minutos, luego enfriar rápidamente en hielo durante 2 minutos.
· Centrifugue brevemente para recoger el líquido de reacción y agregue la mezcla de reacción de transcripción inversa como se muestra a continuación.
2. Configuración de la reacción de transcripción inversa (sistema de 20 μL)
| Componente | Volumen |
| Mezcla de reacción del paso anterior | 13 μL |
| Tampón de reacción 5× | 4 μL |
| Mezcla de dNTP (10 mM) | 1 μL |
| Transcriptasa inversa Hifair® Super (200 U/μL) | 1 μL |
| Inhibidor de la ARNasa (40 U/μL) | 1 μL |
3. Configuración del programa de transcripción inversa
| Temperatura | Tiempo |
| 25°C* | 5 minutos |
| 50-70°C | 15-30 minutos |
| 85°C** | 5 minutos |
*Si se utilizan cebadores aleatorios, incubar a 25 °C durante 5 minutos. Si se utilizan Oligo(dT)18 o cebadores específicos de genes, este paso puede omitirse.
El calentamiento a 85 °C durante 5 minutos inactiva la transcriptasa inversa y puede ajustarse según sea necesario.
El producto de transcripción inversa se puede utilizar inmediatamente para reacciones de PCR o qPCR posteriores, almacenar a corto plazo a -20 °C o para almacenamiento a largo plazo a -80 °C después de dividirlo en alícuotas para evitar ciclos de congelación y descongelación.
Precauciones
1. Mantenga el entorno de laboratorio limpio; use guantes y mascarillas limpios. Asegúrese de que todos los consumibles experimentales estén libres de ARNasa para evitar la contaminación.
2. Realice todas las operaciones en hielo para evitar la degradación del ARN.
3. Utilice muestras de ARN de alta calidad para garantizar una transcripción inversa eficiente.
4. Este producto es solo para uso en investigación.
5. Para su seguridad y salud, use bata de laboratorio y guantes desechables mientras manipula el producto.
Documentos:
Pago y seguridad
Su información de pago se procesa de forma segura. No almacenamos detalles de la tarjeta de crédito ni tenemos acceso a la información de su tarjeta de crédito.
Consulta
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Preguntas frecuentes
El producto es solo para fines de investigación y no está destinado a uso terapéutico o diagnóstico en humanos o animales. Los productos y el contenido están protegidos por patentes, marcas comerciales y derechos de autor propiedad de Yeasen Biotechnology. Los símbolos de marca comercial indican el país de origen, no necesariamente el registro en todas las regiones.
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