Descripción
Ribonucleasa R (RNasa R) de E. coli, es una exorribonucleasa 3′→5′ dependiente de magnesio que poder digiere todos los ARN lineales, pero no digiere estructuras de ARN circulares o en forma de lazo. La mayoría de los ARN celulares serán digeridos completamente por la ARNasa R, con la excepción de los ARNt, el ARN 5S y los lazos intrónicos. La ARNasa R se utiliza para el enriquecimiento de los ARN circulares en muestras biológicas, la identificación de secuencias de lazos intrónicos, la identificación de ARN circulares exónicos y el estudio del splicing alternativo.
Características
Eficacia y calidad garantizadas con certificación ISO 13485.
Disponible en configuraciones a granel o personalizadas.
Descompone eficazmente el ARN lineal, al tiempo que preserva los bucles de lazo y los ARN circulares.
La digestión selectiva de ARN lineales mejora el aislamiento de ARN circulares para la producción de proteínas o la construcción de bibliotecas de ADNc intrónicas.
Ofreciendo ARNasa R de grado GMP
Especificaciones
| Fuente | Un recombinante E. coli cepa portadora del gen ARNasa R de E. coli |
| Temperatura óptima | 37℃ |
| Búfer de almacenamiento | 50 mM de Tris-HCl, 100 mM de NaCl, 0,1 mM de EDTA, 0,1 % de Tritón® X-100, 1 mM de DTT, 50% glicerol, pH 7,5 a 25℃ |
| Definición de unidad | Una unidad convierte 1 μg de poli-r(A) en nucleótidos solubles en ácido en 10 minutos a 37 °C en 20 mM de Tris-HCl (pH 8,0), 100 mM de KCl y 0,1 mM de MgCl.2. |
Solicitud
La ARNasa R es un componente fundamental en la síntesis de ARN circular (circARN). El circARN es prometedor para mejorar la estabilidad y bioestabilidad farmacéutica. Con sus estructuras cerradas covalentemente, los circARN resisten las exonucleasas de ARN. [1,2] La ARNasa R encuentra una amplia aplicación en varios estudios, incluidos el empalme alternativo, la producción de ADNc de intrones y el aislamiento de intermediarios de empalme y lazos.
Componentes
| Componentes No. | Nombre | 14615ES25 | 14615ES72 | 14606ES80 |
| 14615 | ARNasa R (grado GMP, 20 U/μL) | 25 μL | 250 μL | 1 ml |
Almacenamiento
Este producto debe almacenarse a una temperatura entre -25 y -15 °C durante 2 años.
Instrucciones
Prepare el siguiente sistema de reacción en un tubo de microcentrífuga estéril.
| componente | Volumen |
| Tampón de reacción 10×RNasa R | 2 microlitros |
| Muestra de ARN | 1 microgramos |
| ARNasa R (20 U/μL) | 2-4 U |
| DdH libre de ARNasa2Oh | Hasta 20 microlitros |
Incubar a 37 ℃ durante 10 - 30 minutos.
Cifras
Figura 1: Las moléculas de ARN lineal pueden ser digeridas por la ARNasa R de Yeasen.
Figura 2: El CircRNA no puede ser digerido por la ARNasa R de Yeasen.
Notas
- La actividad de la ARNasa R requiere 0,1-1,0 mM de Mg2+;
- Con el aumento del ARN, se puede extender el tiempo de reacción y se puede aumentar adecuadamente la cantidad de enzima;
- El contenido de EDTA en muestras de ARN puede afectar la actividad de la ARNasa R.
- Incubar a 70 ℃ durante 10 minutos puede inactivar la enzima.
Referencia
- Qu L, Yi Z, Shen Y, et al. Vacunas circulares de ARN contra el SARS-CoV-2 y variantes emergentes. Célula. 2022;185(10):1728-1744.e16. doi:10.1016/j.cell.2022.03.044
- Chen L, Wang C, Sun H, et al. La caja de herramientas bioinformática para el descubrimiento y análisis de circRNA. Bioinform breve. 2021;22(2):1706-1728. doi:10.1093/bib/bbaa001
Manuales
Manual de ARNasa R de grado GMP
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Consulta
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Preguntas frecuentes
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