Descripción
La T4 RNA Ligasa 1, también conocida como T4 RNA ligasa, es una enzima dependiente de ATP que cataliza la formación de un enlace fosfodiéster entre el extremo 5'-P y el extremo 3'-OH del ARN monocatenario (ssRNA), ADN monocatenario (ssDNA) o moléculas mononucleotídicas. La T4 RNA Ligasa 1 puede realizar la ligación entre moléculas de ssRNA (de manera más eficiente), entre ssDNA y ssRNA (con menor eficiencia), y también se puede utilizar para la ligación entre moléculas de ssDNA (con muy baja eficiencia). Es adecuada para la ligación de moléculas de ssRNA y para la unión de adaptadores 5' en la construcción de bibliotecas de miRNA para NGS.
Figura 1. Mecanismo de acción de la ARN ligasa T4 1
Características
Cataliza la formación de un enlace fosfodiéster entre el extremo 5'-P y el extremo 3'-OH del ARN monocatenario (ssRNA), ADN monocatenario (ssDNA) o moléculas de mononucleótidos.
Aplicaciones
Clonación de ARN
Adaptadores 5' en la construcción de bibliotecas de miRNA para NGS
Preparación de ARN circular
Presupuesto
| Definición de unidad | Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para convertir 1 nanomol de 5 -[32P] rA16 en una forma resistente a la fosfatasa en 30 minutos a 37odo |
| Fuente | Proteína recombinante expresada por Escherichia coli se deriva del bacteriófago T4 |
| Condiciones de reacción | 10×Tampón de reacción T4 RL1: 500 mM Tris-HCl (pH 7,5 a 25odo), 100 mM de MgCl22, 20 mM DTT; Incubación óptima a 37odo |
| Condiciones de inactivación | Calefacción a 65odo durante 15 minutos o hervir durante 2 minutos puede inactivar la T4 ARN ligasa 1. Alternativamente, agregar una concentración final de 50 mM de EDTA a pH 8,0 puede terminar la reacción de la T4 ARN ligasa 1. |
Componentes
| Componentes No. | Nombre | 14651ES80 | 14651ES90 |
| 14651-A | Ligasa 1 de ARN T4 (10 U/μL) | 500 μl | |
| 14651-B | 10×Tampón de reacción T4 RL1 | 200 μl | 1 ml |
Envío y almacenamiento
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Documentos:
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Manuales
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