Descripción
ArCas12a, derivado del sistema CRISPR de Agathobacter rectalis La bacteria Cpf1 es una proteína monomérica que consta de 1263 aminoácidos. Como miembro de la clase II (tipo V) del sistema CRISPR/Cas, ArCas12a funciona únicamente a través de una única proteína efectora y presenta diferencias significativas con respecto a Cas9, como la selección de motivos ricos en T, no requerir ARNcr transactivador, producir extremos pegajosos en las roturas de doble cadena de ADN, participar en el procesamiento del ARN y poseer actividad de nucleasa de ADN.
ArCas12a carece del dominio HNH y puede utilizar de forma independiente su dominio RuvC para reconocer la región PAM rica en timina (T) en el extremo 5' del ácido nucleico diana bajo la guía del ARN CRISPR (ARNcr), iniciando la escisión del ADN diana. Se ha utilizado con éxito para la edición del genoma en muchos mamíferos y plantas. Además, ArCas12a exhibe actividad de escisión trans, capaz de cortar indiscriminadamente ADN monocatenario (ssDNA) no diana en el sistema de reacción.
En comparación con otros LbCas12a/AsCas12a, ArCas12a demuestra una mayor adaptabilidad a la temperatura (25-55odo), lo que lo hace adecuado para aplicaciones de edición del genoma y detección de ácidos nucleicos.
Características
Amplio rango de temperatura de reacción:Exhibe actividad de escisión dentro del rango de temperatura de 25 a 55odo
Residuos de nucleasa bajos:No hay exonucleasa, nickasa o ARNasa residual
Actividad de escisión cis:Escisión altamente eficaz de ADN bicatenario in vitro
Actividad de transescisión:Alta actividad de escisión trans, adecuada para la detección de ácidos nucleicos.
Aplicaciones
Edición genética CRISPR/Cas
Diagnóstico y detección basados en el sistema CRISPR/Cas
Otras aplicaciones de detección combinadas con tecnologías de amplificación isotérmica de ácidos nucleicos (RPA y LAMP), etc.
Presupuesto
| Fuente | El gen Cpf1 de Agathobacter rectalis se expresa a través de expresión recombinante en E. coli |
| Peso molecular | 149 kDa |
| Secuencia PAM | TTTN o TTTV |
| Condiciones de reacción | 50 mM de NaCl, 10 mM de Tris-HCl, 10 mM de MgCl2, pH 7.9 @25odo |
| Concentración | 10 µM |
| Pureza | >95% (Hoja de datos de seguridad (SDS)) |
| Condiciones de inactivación | 85odo, 5-10 minutos |
Componentes
| Componentes No. | Nombre | 14702ES65 | 14702ES80 |
| 14702-A | Nucleasa ArCas12a (10 micrasMETRO) | 100 μl | |
| 14702-B | 10×Tampón de reacción ArCas12a | 1 ml | 1 ml |
Envío y almacenamiento
Este producto debe almacenarse a una temperatura entre -25 y -15 °C.odo por 2 años.
Cifras
Cifra 1. Prueba de la actividad de escisión cis de ArCas12a: M: Marcador; C: Plantilla de ADN bicatenario (dsDNA)
Nota: Bajo la guía de crRNA, puede escindir eficientemente dsDNA (600 pb) para producir dos fragmentos (200 pb + 400 pb).
Cifra 2. Resultados de la prueba de actividad de transescisión de ArCas12a
Nota: Utilizando dsDNA como objetivo, se añadieron ArCas12a, crRNA y una sonda de reportero ssDNA (que contiene un grupo reportero fluorescente) para la escisión in vitro. Una vez que ArCas12a forma un complejo con crRNA y el ADN objetivo, activa la actividad de escisión trans, cortando la sonda de reportero ssDNA y emitiendo fluorescencia.
Documentos:
Hoja de datos de seguridad
14702_Ficha de datos de seguridad_Versión EN20241205.pdf
Manuales
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