Descripción
La ligasa de ADN del virus PBCV, también conocida como ligasa SplintR, ligasa de ADN del virus PBCV-1 o ligasa de ADN del virus Chlorella, es una ligasa de ADN dependiente de ATP que cataliza de manera eficiente la reacción de ligación de dos cadenas de ADN adyacentes que son complementarias a una cadena de ARN monocatenaria. En estas dos cadenas de ADN adyacentes, la que proporciona el grupo hidroxilo 3' se denomina cadena de ADN aceptora, mientras que la que proporciona el grupo fosfato 5' se denomina cadena de ADN donante. Durante este proceso de ligación, una cadena de ARN complementaria actúa como una "férula" o "andamio" para las dos cadenas de ADN. La actividad de la ligasa de ADN del virus PBCV es mucho mayor que la de la ligasa de ADN T4 tradicional y muestra una fuerte afinidad por los sustratos de ADN con ARN como férula (Km aparente = 1 nM, donde un valor de Km menor indica una afinidad más fuerte). Puede detectar especies de ARN únicas a nivel subnanomolar en mezclas complejas, lo que lo hace adecuado para procesos de enriquecimiento de objetivos en aplicaciones como detección de ARN de alta sensibilidad, secuenciación de próxima generación y diagnóstico molecular.
Características
Sin nucleasa, endonucleasa, ARNasa o fosfatasa residuales
Aplicaciones
Detección de microARN y otros ARN pequeños mediante el método de sonda
Conexión de ADN monocatenario mediante fijación de "pinza" mediante secuencias de ARN complementarias
Utilizando sondas de ADN para lograr la detección de ARN específico
Detección de SNP o splicing alternativo
Análisis de secuenciación RASL
Presupuesto
| Fuente | El gen de la ADN ligasa del PBCV-1 originario del virus Chlorella expresado en E. coli |
| Peso molecular | 34 KD |
| Concentración | 25 U/µL |
| Unidad Definición | Una unidad se define como la cantidad de enzima necesaria para lograr al menos el 50 % de finalización de la ligadura de 2 pmol de sustrato híbrido ADN:ARN marcado con FAM en 15 minutos a 25℃ en 1×Tampón de ligasa PBCV |
| Inactivación doondiciones | 65℃, 20 mín. |
Componentes
| Componente No. | Nombre | 14962ES80 | 14962ES90 |
| 14962-A | Ligasa de ADN del PBCV (25 U/µL) | 50 µL | 200 µL |
| 14962-B | Tampón de ligasa PBCV 10 x | 1 ml | 1 ml |
Envío y almacenamiento
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Documentos:
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Manuales
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