Descripción
Hola feriadoMT. Listo para usar lyo I Kit RT-qPCR multiplex de un solo paso（UDG más) es un kit de PCR cuantitativa multiplex basado en ARN como plantilla. En el proceso del experimento, la transcripción inversa y la PCR cuantitativa se llevaron a cabo en el mismo tubo, lo que simplificó la operación experimental y redujo el riesgo de contaminación.El El diseño exclusivo de tampón y enzima garantiza que se pueda utilizar en la preparación y el diseño de productos de sistemas de reacción liofilizados RT-qPCR de un solo paso..
En este kit, el ADNc de primera cadena se sintetizó de manera eficiente mediante Hifair resistente al calor.MT. Transcriptasa inversa y amplificada cuantitativamente por UniconMT. ADN polimerasa HotStart Taq. El kit contiene principalmente ADN polimerasa optimizado yotampón iofilizable, mezcla de enzimas, etc. Además, se agregan los factores que pueden inhibir eficazmente la amplificación por PCR no específica y mejorar la eficiencia de amplificación de múltiples reacciones de qPCR, lo que puede garantizar la eficiencia de la amplificación y llevar a cabo hasta múltiples reacciones de amplificación.
Este kit está equipado con yoyoprotector que se puede utilizar para liofilización.
Presupuesto
| Componentes No. | 16645ES60 / 16645ES80 / 16645ES92 |
| Tamaño | 100 T/ 1000 yo / 10000 toneladas |
Componentes
| Nombre | 16645ES60 (100 toneladas) | 16645ES80 (1.000 toneladas) | 16645ES92 (10.000 toneladas) | |
| 16645-A | 4×HifairMT. Tampón de liofilización | 600 μL | 6 ml | 60 ml |
| 16645-B | Hola feriadoMT. Mezcla de lioenzimas | 100 μL | 1 ml | 10 ml |
| 16645-C | Lioprotector | 800 μL | 8 ml | 80 ml |
Almacenamiento
El producto Debe almacenarse a una temperatura de entre -25 °C y -15 °C durante 1 año. Debe evitarse la congelación y descongelación repetidas.
Instrucciones
1. Composición de la reacción:
| Componentes | Volumen ((μL) | Concentración final |
| 4×HifairMT. Tampón de liofilización | 6 | 1× |
| Hola feriadoMT. Mezcla de lioenzimas | 1 | - |
| Lioprotector | 8 | - |
| Mezcla de cebadores (10 μM) | 1 | |
| Mezcla de sondas (10 μM) | 0,5 | 0,05-0,5 μM |
| ARN molde | 5 | - |
| Departamento de Protección Ambiental H2Oh | hasta 25 | - |
Nota:Asegúrese de mezclar bien antes de usar, evite burbujas excesivas causadas por vibraciones violentas.
2. Protocolo de ciclismo optimizado
(1) Procedimiento de amplificación estándar
| Etapa de reacción | Temperatura | Tiempo | Ciclo | |
| 1 | Transcripción inversa | 50°Ca | 1 | |
| 2 | Desnaturalización inicial | 95°C | 5 mín. | 1 |
| 3 | Reacción de amplificación | 95°C |
| 45 ciclos |
| 60°Cb | 30 segundodo |
(2) Programa de amplificación rápida
|
| Etapa de reacción | Temperatura | Tiempo | Ciclo |
| 1 | Transcripción inversa | 50°Ca | 2 mín. | 1 |
| 2 | Desnaturalización inicial | 95°C | 2 segundo | 1 |
| 3 | Reacción de amplificación | 95°C |
| 45 ciclos |
| 60°Cb | 13 segundodo |
Nota:
a) Transcripción inversa: La temperatura puede seleccionarse 42°C o 50°C durante 10-15 minutos.
b) Reacción de amplificación: La temperatura se ajusta según el valor de Tm de los cebadores diseñados.
c) Adquisición de señal de fluorescencia: configure el procedimiento experimental de acuerdo con los requisitos del manual del instrumento.
3. Solicitud equipo
Equipamiento con Rox:ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Rápido, StepOne™, StepOne Plus™
Equipo con Low Rox:ABI 7500, 7500 Rápido, ViiA™7, Estudio cuantitativo™ 3 y 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™
Equipo sin Rox:
Bio-Ray CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000 de Corbett
Roche Ciencia Aplicada LightCycler® 480, LightCycler® 2.0, Lightcycler® 96
Termo Ciclador científico PikoReal; Cefeida Ciclistas inteligentes; Ilumina PCR cuantitativa ecológica
Notas
Utilice el EPP necesario, como bata de laboratorio y guantes, para garantizar su salud y seguridad.
Utilice consumibles libres de ARNasa para El experimento.
Este producto es para investigación utilizar únicamente！
Procedimiento de liofilización
Este kit se puede utilizar directamente para la liofilización, o puede explorar más a fondo los excipientes para diferentes cebadores sobre esta base.El procedimiento de liofilización estándar de este reactivo es el siguiente:
| Proceso | temperatura | establecer hora | duración | Vacío mbar |
| preliofilización | -45℃ | 10 minutos | 60 minutos | —— |
| Etapa inicial de liofilización | -45 ℃ | 10 minutos | 60 minutos | 0,01 mbar |
| -40 ℃ | 10 minutos | 900 minutos | 0,01 mbar | |
| -35 ℃ | 10 minutos | 60 minutos | 0,01 mbar | |
| -30 ℃ | 20 minutos | 60 minutos | 0,01 mbar | |
| -20 ℃ | 20 minutos | 60 minutos | 0,01 mbar | |
| 0 ℃ | 20 minutos | 60 minutos | 0.01 mbar | |
| prueba de acumulación de presión | ||||
| Etapa de secado analítico | 5 ℃ | 10 minutos | 20 minutos | 0,01 mbar |
| 10 ℃ | 10 minutos | 20 minutos | 0,01 mbar | |
| 15 ℃ | 10 minutos | 20 minutos | 0,01 mbar | |
| 20 ℃ | 10 minutos | 20 minutos | 0,01 mbar | |
| 25 ℃ | 10 minutos | 240 minutos | 0,01 mbar | |
| prueba de acumulación de presión | ||||
Pago y seguridad
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Consulta
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Preguntas frecuentes
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