El Magnético Residual ADN Muestra Kit de preparación es adecuado para el pretratamiento de residual ADN en varios biológico Muestras. Puede maximizar la separación y purificación de trazas de ADN residual de células huésped en muestras mediante el uso de perlas magnéticas únicas y un proceso de purificación cuidadosamente seleccionado. sistema de buffer optimizado.

El magnético Kit de preparación de muestras de ADN residual Se puede utilizar con una variedad de ADN residual de células huésped. Kits de detección, incluido el kit de detección de residuos de ADN de células huésped CHO (Cat#41301ES), Kit de detección de residuos de ADN de células huésped HEK293 (Cat#41302ES), Kit de detección de residuos de ADN de células huésped Vero (Cat.#41303ES), y kit de detección de residuos de ADN de células huésped de E. coli (Cat#41304ES).

Componentes del producto

Envío y almacenamiento

1. La Parte I se envía con una bolsa de hielo a 4 °C durante 1 año o -20°C para almacenamiento a largo plazo.

2. La Parte II se envía a temperatura ambiente y se almacena durante 1 año a temperatura ambiente.

3. La Parte III se envía en hielo seco y se almacena a -20 °C. por 1 año.

4. Después de recibir la mercancía, verifique si los tres componentes de la Parte I, Parte II y Parte III están completos y guárdelos inmediatamente a la temperatura de almacenamiento correspondiente.

Precauciones

1. Lea atentamente el manual de instrucciones antes de utilizar el dispositivo y úselo en estricta conformidad con él. Se recomienda que el procesamiento de las muestras se realice en una mesa de trabajo limpia o en una cabina de seguridad biológica.

2. Preste atención para observar si hay precipitación o turbidez de la solución almacenada a temperatura ambiente (especialmente cuando la temperatura ambiente es baja, como en invierno), puede tomar un baño de agua a 37 ° C hasta que la solución esté transparente para evitar afectar el efecto de uso.

3. Es posible que queden perlas magnéticas residuales durante la elución, así que trate de evitar aspirarlas al extraer muestras.

4. Cambie las puntas con frecuencia para evitar la contaminación cruzada al utilizar este producto.

5. Para su seguridad y salud, utilice equipo de protección personal (EPP), como batas de laboratorio y guantes desechables, cuando trabaje con este producto.

6. ¡Este producto es SÓLO para uso en investigación!

Preparación previa

1. Equipo proporcionado por uno mismo: agitador vórtex, baño de agua o baño de metal, centrífuga, rejilla de separación magnética, extractor automático de ácidos nucleicos Hangzhou Aosheng Auto-Pure32A u otras marcas de extractor de ácidos nucleicos totalmente automático.

2. Consumibles autosuministrados: 10 μL-1000 μL puntas de filtro de baja adsorción, tubos de centrífuga de baja adsorción de 1,5 ml, tubos de PCR o placas de 96 pocillos y tapas de tubos o membranas correspondientes.

3. Reactivos de preparación propia: etanol absoluto (grado analítico), tampón PBS 1× (pH 7,4, libre de iones Mg y Ca), agua ultrapura.

4. Para el primer uso, añada etanol anhidro del volumen indicado en la etiqueta o en las instrucciones a los frascos de Solución de Lavado A* y Solución de Lavado B*, Mezcle bien antes de usar y marque bien los ingredientes. Tape bien la botella después de usarla para mantener el nivel de etanol en la botella.

Extracción manual de ADN residual

1. Procesamiento de muestras

1.1 Si la muestra contiene un contenido de ADN relativamente alto, como una vacuna, dilúyala en una proporción adecuada con tampón PBS 1× (pH 7).4, libre de iones Mg y Ca) y luego extraer (la dilución de la muestra es para hacer que el valor de detección esté dentro del rango lineal de la curva estándar y luego garantizar la precisión de la detección. y generalmente se puede considerar una dilución de 100 veces).

1.2 Si la muestra a ensayar es un polvo seco, diluirlo a 10 mg/mL o 100 mg/mL con agua ultrapura Antes de usar.

1.3 Si la muestra tiene una matriz compleja, se debe realizar un experimento de adición y recuperación estándar para determinar la dilución adecuada.

2. Agregue 100 μL de muestra a un tubo de 1,5 mL. Luego agregue 100 μL de tampón de lisis, 10 μL de proteinasa K, agite y mezcle durante 10 segundos.

[Notas]: Agregue 10 μL de proteinasa K si la concentración de la muestra de proteína es de 0 a 100 mg/mL, y agregue 20 μL de proteinasa K si la concentración de la muestra de proteína es de 100 a 200 mg/mL.

3. Incubar a 60°C por 20 minutos.

4. Luego agrega 400 μl de la solución de unión, 9 μL de glucógeno y 6 μL de sal de potasio Poli A, y agitar y mezclar bien.

5. Agregue 20 μL de perlas magnéticas, agite y mezcle bien, y deje reposar durante 10 minutos. Agite y mezcle durante 10 segundos. cada 3 minutos.

[Notas]: Las perlas magnéticas deben agitarse antes de su uso para garantizar que se resuspendan por completo. Después de agregar muestras 4 o 5 veces a la vez, se recomienda volver a mezclar.

7. Centrifugue brevemente para que la solución baje y coloque el tubo de centrífuga en el soporte magnético durante 1 o 2 minutos. Una vez que las perlas magnéticas se hayan absorbido por completo, retire el líquido con cuidado.

8. Añadir 500 μL de solución de lavado A (verifique si se ha agregado etanol absoluto antes de usar), agite o agite para mezclar para garantizar que las perlas magnéticas se dispersen y que no haya perlas magnéticas agregadas en la pared del tubo de centrífuga.

9. Centrifugar brevemente y colocar el tubo de centrífuga en una rejilla magnética durante 1 o 2 minutos. Una vez que las perlas magnéticas se hayan absorbido por completo, retirar el líquido con cuidado.

10. Añadir 500 μL de solución de lavado B (verifique si se ha añadido etanol absoluto antes de usar), Agite o agite para mezclar para garantizar que las perlas magnéticas se dispersen y que no se acumule ninguna en la pared del tubo de centrífuga.

11. Centrifugar brevemente y colocar el tubo de centrífuga en una rejilla magnética durante 1 o 2 minutos. Una vez que las perlas magnéticas se hayan absorbido por completo, retirar el líquido con cuidado.

12. Para garantizar que se elimine la mayor cantidad posible de líquido residual, centrifugue el tubo durante 10 segundos. rápidamente, colóquelo en un soporte magnético y utilice una pipeta de 10 μL para aspirar el líquido residual.

13. Abra la tapa del tubo y déjelo a temperatura ambiente durante 3 minutos. hasta que el etanol se haya evaporado por completo. Si no aparecen reflejos ni grietas en la superficie de las perlas magnéticas, esto indicará que el etanol se ha evaporado por completo.

14. Retirar el tubo del soporte magnético, añadir 50-100 μL de eluato precalentado a 65 °C, agitar y mezclar bien. Luego centrifugar brevemente, incubar a 65 °C durante 5 minutos, agitar y mezclar una vez cada 2-3 minutos.

15. Centrifugar nuevamente brevemente y colocar el tubo de centrífuga sobre un soporte magnético durante 2 minutos. Una vez que las perlas magnéticas se hayan absorbido por completo, transferir con cuidado la solución de ADN a un nuevo tubo de centrífuga y almacenarlo a -20 °C o a -80 °C para un almacenamiento a largo plazo.