Las perlas de concanavalina A (ConA) son microesferas de polímero superparamagnético que se han acoplado covalentemente con concanavalina A. (una lectina vegetal que se une a la manosa/glucosa aislada de las semillas de plantas de cereales) en su superficie. Estas perlas poseer varios características notables, incluyendo monodispersidad y fuerte reactividad magnética. Cuando Ca²⁺ y Mg²⁺ Cuando hay iones presentes, las perlas magnéticas ConA pueden separar y purificar de manera eficiente y rápida varias biomoléculas como polisacáridos, glicoproteínas y glicolípidos al utilizar la afinidad entre la globulina A ConA y los grupos terminales α-D-manosa y α-D-glucosa.

Las perlas magnéticas ConA ofrecen un método conveniente para separar o fijar células, lo que garantiza una pérdida mínima de células durante los pasos de lavado posteriores. Además, se pueden utilizar para la recolección y fijación de núcleos. Además, estas perlas son útiles en técnicas innovadoras como CUT & Run y ​​CUT & Tag, que son enfoques revolucionarios utilizados en experimentos de ChIP-seq.

En resumen, las perlas magnéticas ConA son herramientas poderosas para la purificación eficiente de biomoléculas, la separación y fijación conveniente de células, la recolección de núcleos y la aplicación en técnicas experimentales de vanguardia.

Presupuesto

Caracteristicas

Figuras y tablas

Tabla 1. Las perlas de ConA de Yeasen tienen una alta tasa de captura. Se ha verificado que la cantidad de concanavalina A (ConA) utilizada en proporción a las microesferas garantiza la máxima capacidad de unión y evita la agregación excesiva de perlas magnéticas después de la unión celular en experimentos CUT&Tag. Por ejemplo, el uso de 10 μL de perlas recubiertas de ConA puede unir una cantidad de células equivalente a los niveles de E7, con una eficiencia de unión que supera el 98%.

Figura 1. Las perlas de ConA de Yeasen muestran una alta dispersividad. En el proceso de etiquetado de las perlas, se eligió un sellador no biológico para garantizar un cierre eficiente sin verse afectado por las variaciones entre lotes. Esto garantiza un sellado excelente de las perlas magnéticas, preservando su alta monodispersidad durante el almacenamiento de las perlas recubiertas de ConA, lo que es beneficioso para la unión eficiente a las moléculas de carbohidratos en experimentos posteriores.

Figura 2. Distribución de señales de cromatina CUT&Tag utilizando perlas Yeasen Con A.

Almacenamiento

Este producto debe almacenarse entre 2 y 8 °C durante 2 años.

Instrucciones

Las siguientes operaciones toman como ejemplo la purificación de glicoproteínas o el aislamiento de células. CORTAR Y ETIQUETAR experimentos , consulte Yeasen Cat# 12598ES para conocer el protocolo.

1. Preparación de buffers

1) Suministrado por el cliente

1. Materiales necesarios no incluidos: soporte magnético, tubos Eppendorf, tubos PCR, soportes magnéticos, termocicladores etc.
2. Equilibrar el Rosario a temperatura ambiente durante al menos 30 minutos. Resuspenda completamente las perlas agitando o agitando el frasco.

1. Manipulación de muestras（ Tomando como ejemplo las células de mamíferos ）

1. Preparar células de mamíferos (1,0×10 ⁴~1.0×10 ⁵ células), centrifugar (4℃, 600×g, 3~5 min) y secar con cuidado desechar el sobrenadante.
2. Agregue 140 μL de tampón de unión, mezcle bien y resuspenda las células, centrifugue y recolecte (4 ℃, 600 × g, 3 ~ 5 min), con cuidado. desechar el sobrenadante.
3. Agregue 90 μL de tampón de unión, mezcle bien y resuspenda las células.
   Precaución: Se pueden obtener células de mamíferos fuertemente adheridas mediante digestión parcial con una enzima como la tripsina. En el caso de tejidos animales, células vegetales o células fúngicas, la obtención de células dispersas o protoplastos suele requerir tratamientos especiales adaptados a sus características específicas.

1. Preparar perlas ConA

1. Pipetee suavemente las perlas de ConA hasta que estén completamente suspendidas, coloque 10 μL de la suspensión de perlas en un tubo de centrífuga nuevo de 200 μL.
2. Agregue 40 μL de tampón de unión, mezcle bien y deje reposar en el soporte magnético durante 1 minuto y deseche el sobrenadante después de que las perlas magnéticas se adsorban a la pared lateral del tubo de centrífuga.
3. Agregue 10 μL de tampón de unión, mezcle bien y resuspenda las perlas de ConA.

1. Encuadernación de muestras

1. Agregue la muestra de células preparada a las perlas pretratadas, pipetee suavemente las perlas resuspendidas y luego incube en un mezclador invertido (temperatura ambiente 30 minutos o 4 ℃ durante la noche).
2. Colóquese sobre un soporte magnético durante 1 minuto, espere hasta que las perlas magnéticas se adsorban en la pared lateral del tubo de centrífuga y deseche con cuidado el sobrenadante.
3. Agregar 500 μL de tampón de elución para el complejo de perlas de células-ConA y Pipetear suavemente hasta resuspender las perlas, luego Colóquese sobre un soporte magnético durante 1 minuto, espere hasta que las perlas magnéticas se adsorban en la pared lateral del tubo de centrífuga y deseche con cuidado el sobrenadante.
4. Repita el paso 3) tres o cuatro veces más.

1. Elución

1. Para las glicoproteínas, agregue 50~250 μL de tampón de elución, pipetee suavemente las perlas resuspendidas y luego incube en un mezclador invertido (a temperatura ambiente durante 10~30 minutos). Después de la mezcla invertida, deje reposar en un soporte magnético durante 1 minuto, recoja el sobrenadante en un nuevo tubo de 1,5 mL para realizar la electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS o la inmunotransferencia.
2. Para células, no es necesario eluir.

Notas

1. Equilibrar el ConA Perlas a temperatura ambiente Antes de usar.
2. Evite la congelación, de lo contrario se degradará el material de las perlas o se perderá la actividad.
3. La ConA requiere la presencia de iones Ca2+ y Mn2+ para estar activa, por lo que se deben evitar los reactivos que contengan EDTA u otros quelantes de iones metálicos durante el experimento.
4. Cuando se incuban con células, las perlas de ConA pueden agregarse, lo cual es normal y no afecta el uso normal de las perlas magnéticas.
5. Este producto es solo para uso de investigación.
6. Por favor, trabaje con bata de laboratorio y guantes desechables, para su seguridad.

Manual