Descripción
El gel de poliacrilamida (gel PAGE) se utiliza a menudo en la electroforesis de proteínas para separar las proteínas. Este tipo de gel se compone generalmente de un gel concentrado y un gel de separación. El primero cumple la función de concentrar las muestras de proteínas, mientras que el segundo separa las proteínas de diferentes tamaños según la concentración de monómero de acrilamida y el agente de reticulación N,N-metilenbisacrilamida (metilenacrilamida) utilizado en el gel.
Este kit proporciona una variedad de reactivos necesarios para la preparación rápida de gel PAGE. Los usuarios solo necesitan preparar su propio equipo de preparación de gel para preparar el gel, lo que simplifica enormemente el proceso de preparación del gel. El gel preparado por este kit solo se puede utilizar para la electroforesis en gel PAGE desnaturalizante. Esta especificación puede preparar alrededor de 125 piezas de minigel (calculadas por un gel de 0,75 mm de espesor).
Presupuesto
| Concentración de gel concentrado SDS-PAGE | 4,2% |
| Concentración en gel de separación por SDS-PAGE | 10% |
| Rango de separación (kDa) | 20-80 |
| Sistema de gel | Tris-glicina |
| Concentración de gel concentrado SDS-PAGE | 4,2% |
Componentes
| Componentes No. | Nombre | 20325ES62 (125 mini geles) |
| 20325-A | 10% - tampón de gel de separación | 250 ml |
| 20325-B | Solución de gel de separación al 10 % | 250 ml |
| 20325-C | Tampón de gel concentrado de color al 10 % | 80 ml |
| 20325-D | Solución de gel concentrada al 10% | 80 ml |
| 20325-E | Preparar taza de gel | 3 |
Envío y almacenamiento
El producto se envía con una bolsa de hielo y se puede almacenar a 2℃~8℃ por 1 año.
Instrucciones: Se recomienda no configurar demasiadas piezas de gel a la vez para evitar agregar la solución superior demasiado tarde (se recomiendan 2-3 piezas como máximo)
1. Seleccione la concentración de gel adecuada según el peso molecular de la proteína objetivo (consulte la tabla 1)
2. Proceso de fabricación del gel (tome un trozo de mini gel de 0,75/1,0/1,5 mm como ejemplo)
2.1 Tome un volumen igual de tampón de gel de separación y solución de gel de separación y mézclelos, es decir, tome 2,0/2,7/4,0 ml de las dos soluciones respectivamente.
2.2 Pesar 0,1 g de persulfato de amonio y disolverlo en 1 ml de agua desionizada. El cliente debe adquirir el persulfato de amonio.
2.3 Agregue 35/45/70 μL de APS a la solución mezclada en el paso 1 (la cantidad de APS utilizada se puede reducir a la mitad si la solidificación es demasiado rápida) y mezcle completamente.
2.4 Inyectar la solución del paso 2 en la placa de vidrio para la preparación del gel. Tener en cuenta que el gel concentrado se debe inyectar en el molde de gel dentro de los 2 minutos posteriores a la adición del gel de separación, y el vertido del gel concentrado debe ser lento para evitar que se mezclen el gel concentrado y el gel de separación. Si a la persona le resulta difícil configurarlo, también se puede adaptar para configurar el gel concentrado después de sellarlo con etanol.
2.5 Preparación del gel concentrado: tomar un volumen igual de tampón de gel concentrado y solución de gel concentrada, es decir, tomar 0,5/0,75/1,0 mL de las dos soluciones respectivamente, y luego agregar 10/13/18 μL de APS y mezclar bien.
2.6 Inyéctelo en la placa de vidrio para hacer gel e inserte los dientes del peine (no use fuerza excesiva para insertar los dientes del peine con cuidado).
2.7 Después de que el gel concentrado se solidifique durante 15 minutos, se pueden retirar los dientes del peine y utilizarlos para la electroforesis. Nota: intente utilizar un tampón de electroforesis recién preparado.
Notas
1. Se sugiere que el voltaje durante la electroforesis esté entre 100 y 120 V. Si es necesario acelerar la velocidad de la electroforesis, se puede aumentar a 150 V.
2. Antes de llenar el gel, asegúrese de equilibrar la solución de gel a temperatura ambiente (por ejemplo, mantenerla durante varios minutos) para evitar eficazmente la formación de burbujas en el gel.
3. El cliente debe adquirir el persulfato de amonio por su cuenta. Recomendamos utilizar el producto con el número de catálogo A3678 de Sigma.
4. La cantidad de solución de persulfato de amonio es solo de referencia y la cantidad real se puede aumentar o disminuir según los hábitos y la experiencia experimentales personales. Agregar más persulfato de amonio puede acelerar la velocidad de gelificación y viceversa. La velocidad de coagulación del gel PAGE está estrechamente relacionada con la temperatura y la cantidad de persulfato de amonio.
5. Se ha añadido una cantidad adecuada de sustitutos de TEMED a este producto. Si es necesario acelerar aún más la velocidad de gelificación, se puede añadir una cantidad adecuada de TEMED según sea necesario antes de dispensarlo.
6. Existe una correlación positiva significativa entre la solidificación del gel y la temperatura. En las mismas condiciones, cuanto mayor sea la temperatura, más rápida será la velocidad de solidificación.
7. El gel concentrado de color puede producir una pequeña cantidad de precipitación durante el almacenamiento, lo cual es un fenómeno normal. No dude en usarlo.
8. El APS se almacenó a -20℃Para mayor comodidad, el APS que se ha abierto y está en uso se puede almacenar en 4℃.
9. Utilice el EPI necesario, como bata de laboratorio y guantes, para garantizar su salud y seguridad.！
10. ¡Solo para uso en investigación!
Tabla 1 Rango de separación de referencia del gel SDS-PAGE con diferentes concentraciones
| Concentración en gel SDS-PAGE | Rango de separación (kDa) |
| 8% | 30-200 |
| 10% | 20-80 |
| 12,5% | 15-60 |
| 15% | 10-45 |
Documentos:
Hoja de datos de seguridad
Manuales
Citas y referencias:
[1] Su G, Wang W, Zhao X, et al. La regulación transcripcional multicapa dependiente de la arquitectura potenciadora organiza la diferenciación temprana de linaje de las células madre embrionarias inducida por la señalización de AR. Nucleic Acids Res. 2021;49(20):11575-11595. doi:10.1093/nar/gkab1001(IF:16.971)
[2] Li M, Niu Y, Tian L, et al. El astragalósido IV alivia la senescencia de los macrófagos y la pérdida ósea inducida por d-galactosa en ratones a través de la vía STING/NF-κB. Int Immunopharmacol. 2024;129:111588. doi:10.1016/j.intimp.2024.111588(IF:5.6)
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[4] Zang C, Liu H, Ju C, et al. El extracto de Gardenia jasminoides J. Ellis alivió el daño de la materia blanca al promover la diferenciación de las células precursoras de oligodendrocitos mediante la supresión de la neuroinflamación. Food Funct. 2022;13(4):2131-2141. Publicado el 21 de febrero de 2022. doi:10.1039/d1fo02127c(IF:5.396)
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