Descripción
La proteasa SUMO reconoce la proteína de etiqueta SUMO (Small Ubiquitin-like Modifier) completa con 100 aminoácidos y corta eficientemente el SUMO de la proteína de fusión. En comparación con los sitios de reconocimiento de EK y TEV, la proteasa SUMO tiene una alta especificidad debido a su larga secuencia de reconocimiento y mantiene una alta actividad en una amplia gama de sistemas ambientales de reacción, como temperatura (4-30 ℃), pH (5,5-9,5), etc. La proteasa SUMO también tiene una etiqueta His polimerizada, que es conveniente para eliminar la proteasa SUMO y purificar la proteína objetivo mediante cromatografía de afinidad.
Presupuesto
| Cat.No. | 20410ES60 / 20410ES70 / 20410ES80 |
| Tamaño | 100 unidades / 500 unidades / 1000 unidades |
| Actividad enzimática | 1 U/μL |
| Unidad Definición | La cantidad de enzima necesaria para cortar >85% del sustrato de 3 μg en un tampón 1×rTEV (50 mM Tris, pH 8,0, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT) a 30 ℃ durante 1 h se definió como una unidad de actividad. |
| Fuente | Expresado en E. coli |
| Etiqueta | Polimerizado Su etiqueta |
| Pureza de las proteínas | > 90% |
| Peso molecular | 26,55 kDa |
| Almacenamiento Buffer | 25 mM de Tris-HCl, pH 8,0、0,1 % de Igepal (NP-40)、250 mM de NaCl、500 μM de DTT、50% glicerina |
Componentes
Nota:La definición de la actividad enzimática utiliza el tampón de proteasa 10× (-sal). La proteasa SUMO tiene una actividad relativamente alta en Tampón de proteasa 10× (-sal), pero para sustratos inestables, se debe seleccionar el tampón de proteasa 10× (+sal). También proporcionamos el tampón de reacción 20410-B2 con +sal.Elija el buffer correcto para su experimento. 20410-B2:500 mM de Tris-HCl, pH 8,0, 2% de Igepal (NP-40), 1,5 M de NaCl, 10 mM de DTT；20410-B1:500 mM de Tris-HCl, pH 8,0, 2% de Igepal (NP-40), 10 mM de DTT. | ||||||||||||||||||||
Almacenamiento
Este producto debe almacenarse en -85~-65℃ durante 1 año.
Instrucciones
- El siguiente sistema de reacción se formula en el tubo EP:
- Incubar a 30 ℃, extraer 20 μL de la solución de reacción anterior a las 1, 2, 4 y 6 horas en un tubo EP separado. respectivamente.
- Añadir 20 μL de 2×hojas de datos de seguridad Cargue el tampón en el tubo EP y colóquelo a -20 ℃.
- Una vez finalizada la reacción de todas las muestras, se hirvieron durante 5 minutos y se tomaron 30 μL para el análisis SDS-PAGE. Determinar el tiempo de respuesta óptimo.
| Componentes | Volumen (μL) (El sistema de reacción se puede reducir igualmente) |
| Proteína de fusión | 50 μg |
| Tampón de proteasa 10× | 20 microlitros |
| Proteasa SUMO (1 U/μL) | 10 μl |
| DdH2Oh | hasta 200 μL |
Nota: Si la proteína de fusión requiere un tratamiento a baja temperatura, la solución de reacción se puede colocar a 4 ℃ para prolongar el tiempo de reacción y aumentar la cantidad de enzima SUMO para garantizar el efecto de la digestión enzimática.
Mesa 1. SUMO Proteasa actividad de digestión a diferentes temperaturas
| Incubación Tiempo（yo） | Actividad digestiva a diferentes temperaturas (%) | |||
| 4℃ | 16℃ | 25℃ | 30℃ | |
| 0,5 | 48 | 73 | 83 | 88 |
| 1 | 60 | 87 | 90 | 93 |
| 2 | 71 | 94 | 94 | 95 |
| 3 | 74 | 95 | 95 | 95 |
Notas
1. Utilice el EPP necesario, como bata de laboratorio y guantes, para garantizar su salud y seguridad.
2. Este producto es solo para uso de investigación.
Pago y seguridad
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Consulta
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