El kit de sustrato quimioluminiscente ECL mejorado está diseñado para detectar anticuerpos y antígenos asociados marcados directa o indirectamente con peroxidasa de rábano picante (HRP). El principio del kit de sustrato quimioluminiscente ECL mejorado es que, las proteínas o los ácidos nucleicos se transfirieron a la membrana impresa después de la electroforesis, y las proteínas objetivo en la membrana se unieron mediante anticuerpo primario y anticuerpo secundario marcados con HRP, o los ácidos nucleicos en la membrana se unieron directa o indirectamente mediante sondas marcadas con HRP. Después de lavar la membrana, la solución de trabajo ECL preparada por el producto se utilizó para incubar la membrana a temperatura ambiente durante varios minutos. La membrana impresa se envolvió con film plástico y se fijó al casete de exposición a rayos X. Luego, la película de rayos X se presiona sobre la membrana en un cuarto oscuro y se expone durante varios segundos a varias horas. Después del revelado y la fijación, las bandas de proteínas o ácidos nucleicos se pueden mostrar claramente en la película de rayos X.

Este kit tiene un sistema de sustrato luminiscente único, que reduce el fondo de exposición mientras que la introducción de un nuevo oxidante mejora en gran medida la estabilidad del kit, lo que le permite ser estable a temperatura ambiente durante hasta un año. Además de los rayos X, el escaneo CCD fluorescente también se puede utilizar directamente, principalmente para la detección de WB y el sistema de detección inmunológica por quimioluminiscencia.

Características

Gracias a su alta sensibilidad y a su alta relación señal-ruido, puede detectar antígenos de grado medio.

Brilla rápidamente y con fuerza, la banda de película impresa se puede observar bajo una lámpara fluorescente.

Especialmente adecuado para detectar la abundancia del objetivo son las muestras de proteínas convencionales más altas.

Nuevo oxidante, estable a temperatura ambiente hasta un año.

Aplicaciones

Quimioluminiscencia ELISA

Western blot (transferencia Western)

Dot Blot-ADN/ARN

Southern blot-ADN

Northern blot-ARN

Presupuesto

Componentes

Envío y almacenamiento

El producto se envía a temperatura ambiente y se puede almacenar a temperatura ambiente durante un año. Si no se utiliza durante un tiempo prolongado, se recomienda almacenarlo a 2℃~8℃ para ampliar el período de validez.

Notas: ¡36222-A debe almacenarse lejos de la luz!

Instrucciones (por ejemplo, película de rayos X)

1. Electroforesis de rutina, membrana de transferencia, anticuerpo marcado con HRP o sonda de ácido nucleico marcada con HRP, incubación y lavado de membrana.

Notas: La solución luminiscente ECL es el sustrato de color de HRP, por lo que el sistema de detección debe basarse en un anticuerpo marcado con enzima HRP o una sonda de ácido nucleico.

2. Al mismo tiempo que se lava la membrana por última vez, se preparó una solución de trabajo luminiscente fresca (100-200 μL de solución de trabajo luminiscente/cm2 de membrana): tomar el mismo volumen de Reactivo A y B, mezclar bien para usar más tarde.

Notas: Para tomar el reactivo A y el reactivo B, se deben utilizar puntas diferentes. Se recomienda utilizar el fluido de trabajo inmediatamente. Puede seguir utilizándose después de unas horas a temperatura ambiente, pero la sensibilidad se reduce ligeramente.

3. Utilice pinzas planas para extraer la membrana, colóquela sobre papel de filtro para drenar la loción, no deje que la membrana se seque por completo. Sumerja completamente la membrana en la solución de trabajo luminiscente, en suficiente contacto con el fluido de trabajo luminiscente. Incube a temperatura ambiente durante 1-2 minutos y prepárela para la exposición de la tableta inmediatamente.

4. Tome la membrana con unas pinzas y colóquela sobre papel de filtro para drenar el fluido de trabajo luminiscente. Pero no lave el fluido luminiscente.

5. Coloque un trozo de film plástico más grande que la membrana sobre la superficie interna de la película oscura de rayos X. Coloque la membrana impresa sobre el film plástico, doble el film plástico completamente alrededor de la membrana impresa y retire la burbuja de gas y el pliegue, para poder cortar el borde sobrante del film plástico. Use papel de filtro para absorber el exceso de fluido de trabajo luminoso. Fije el film plástico que cubre la membrana impresa en la película oscura con cinta adhesiva, con la banda de proteína hacia arriba.

6. Se tomó un trozo de película de rayos X del cuarto oscuro y se colocó sobre la membrana envuelta. Se presionó la película y se expuso durante 30 segundos a 2 minutos. Luego se reveló y se fijó.

Notas: El tiempo de exposición debe ajustarse según la intensidad de la exposición.Si el fondo es demasiado alto, utilice dos películas de rayos X al mismo tiempo.

Otros métodos de exposición

Si se utiliza la fotografía CCD: la membrana se puede colocar en el fluido de trabajo, después de la puesta en marcha según las instrucciones de uso, retirar la película, tomar fotografías. Además, los parámetros de medición de la máquina se pueden ajustar según la situación para mejorar la relación señal-ruido.

Notas

1. Se deben evitar las burbujas durante la transferencia, el sellado y la incubación de la membrana. Además, el uso de guantes evitará dejar huellas dactilares en la membrana y la mantendrá limpia.

2. La exposición prolongada o el exceso de proteínas harán que el fondo se profundice y que el cambio de intensidad de las bandas pierda la relación lineal. La subexposición hará que las bandas se vean borrosas.

3. Algunos envoltorios de plástico pueden atenuar la fluorescencia al envolver la membrana impresa. Se debe seleccionar un envoltorio de plástico de alta calidad.

4. Evite colocar varias membranas en la misma caja de lavado de membranas, ya que la adsorción mutua o la fricción pueden provocar un fondo profundo.

5. La posición y el tamaño de las bandas en la película se pueden determinar con precisión utilizando marcadores de proteínas preteñidos visibles y etiquetas de exposición mediante autorradiografía fluorescente.

6. Utilice un sistema de biotina-avidina y evite utilizar cierre de leche, que puede provocar que el fondo sea demasiado alto.

7. Las partículas de óxido metálico pueden provocar manchas granulares en la membrana. Evite utilizar tijeras y pinzas oxidadas. Utilice pinzas planas de plástico.

8. La azida de sodio (NaN3) puede inhibir la actividad de HRP, si se desea recuperar la sonda o el anticuerpo marcado con HRP se debe evitar el uso de NaN3, si es necesario, no más del 0,01%.

9. Este producto no tiene toxicidad especial, según el tratamiento químico común.

10. Utilice el EPP necesario, como bata de laboratorio y guantes, para garantizar su salud y seguridad.！

11. ¡Solo para uso en investigación!

Documentos:

Hoja de datos de seguridad

36222-A-MSDS-CN20250110

36222-B-MSDS-CN20250110

Manuales

36222_Manual_HB221212_ES

Citas y referencias:

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