La proteína A natural es una proteína de la superficie de la pared celular que se encuentra en Staphylococcus aureus, es similar a la proteína G aislada de la género GRAMO o do Streptococcus, se unen mayoría mamífero IgG por interactuando ante todo con el Fc región de inmunoglobulina (Ig), pero difieren en su especificidad de unión. Se puede utilizar para la separación y purificación de una variedad de anticuerpos (anticuerpos monoclonales y anticuerpos policlonales). La proteína A y la proteína G difieren en sus propiedades de unión a diferentes subclases de inmunoglobulina (consulte el Apéndice 1 para obtener más detalles).
Este producto utiliza proteína A modificada genéticamente, que no solo mantiene sus propiedades de afinidad de Ig, sino que también elimina el dominio de unión no principal de la proteína natural para reducir la unión no específica. La resina de agarosa SuRi rProtein A, que es un gel de agarosa altamente reticulado como matriz y proteína A recombinante resistente a los álcalis modificada como ligando, tiene una alta estabilidad fisicoquímica. Se pueden obtener anticuerpos de alta pureza a partir de muestras de ascitis, suero y medio de cultivo mediante cromatografía de afinidad de un solo paso con este producto, que es cómodo de usar y ampliamente utilizado.

Componentes

Presupuesto

Envío y Almacenamiento

Los productos se envían con bolsa de hielo.   Se puede almacenar de forma estable a entre 2 y 8 ℃. por 5 años.

Instrucciones

1. Preparación del tampón

Se recomienda lo siguiente: Los tampones se deben filtrar con una membrana de filtro de 0,22 μm o 0,45 μm antes de su uso. Tampón de equilibrio/unión/lavado: 0,15 M NaCl, 20 mM Na2 HPO4, pH 7,0

Tampón de elución: glicina 0,1 M, pH 3,0

Tampón neutralizante: 1 MTris-HCl, pH 8.5

2. Preparación de muestras

Asegurar eso el muestra solución tiene el adecuado iónico fortaleza y pH antes cargando el columna, cualquiera por diluyendo la muestra de suero, ascitis o solución de cultivo celular con un tampón de unión/lavado, o diálisis de la muestra con un tampón de unión/lavado.

3. Empaquetamiento de columnas

Cargue la proteína SuRi r A Resina de Agarosa en una columna cromatográfica adecuada, teniendo cuidado de evitar burbujas.

4. Purificación de muestras

1) Equilibrio: La columna cromatográfica es equilibrado con un vinculante Buffer de 5 veces el columna volumen, entonces eso El embalaje está en el mismo sistema de amortiguación que la proteína objetivo y desempeña el papel de proteger la proteína.

2) Muestra cargando: El muestra era cargado a el bien equilibrado rProteína A Agarosa Resina a asegurar lleno contacto entre la proteína objetivo y la resina, mejorar la recuperación tasa de la proteína objetivo y recoger el efluente para ser probado

3) Lavado: Lavar con 10-15 veces el columna volumen del lavado Buffer, eliminar el impureza proteína a menos que adsorbido específicamente, recoge la solución de lavado.

4) Elución: Elución con 5-10 veces columna volumen del elución Buffer, recolectar eluyente, eso es, el objetivo proteína componente.

5) Limpieza CIP y preservación: Generalmente usar 0,1-0,5 METRO NaOH mayor de 3CV, y el contacto tiempo es 15 mín.; Entonces Enjuagar con solución de equilibrio de 5 CV hasta neutralidad. Por último, es equilibrado con un 20% etanol de 5 veces la columna volumen, y entonces almacenado  en 20%  etanol  de el  mismo  volumen  en  4°C  a  prevenir  el  embalaje  de  ser contaminado por bacterias.

5. Detección por SDS-PAGE

El muestras obtenido en el purificación proceso (incluido original muestras, efluente componentes, lavado y Los componentes de elución, etc.) se detectaron mediante SDS-PAGE para determinar el efecto de purificación.

Notas

1. No refrigerar el producto.
2. La resina de agarosa rProteinAA debe agitarse completamente varias veces antes de su uso, para que la resina de agarosa se mezcle de manera uniforme.
3. Durante todas las operaciones, la muestra debe operarse a 4 °C o en hielo.
4. Para su seguridad y salud, utilice bata de laboratorio y guantes desechables durante la operación.
5. Sólo para uso de investigación.

Tabla adjunta 1: Resumen de la capacidad de uniónf proteínas A y G a Ig en diferentes especies

Proteína SuRi Una agarosa Resina