UltraNuclease, también conocida como endonucleasa no restrictiva, nucleasa de amplio espectro, es una endonucleasa no específica derivada de Serratia Marcescen, que hidroliza los enlaces fosfodiéster internos entre cualquier nucleótido en los ácidos nucleicos para producir oligonucleótidos 5'-monofosfato de 2-5 bases de longitud. Puede degradar ADN y ARN en varias formas (bicatenario, monocatenario, lineal, circular, nativo o desnaturalizado) en una amplia gama de condiciones (urea 6 M, guanidina HCl 0,1 M, 0,4 % Triton X-100, 0,1 % SDS, EDTA 1 mM, PMSF 1 mM) y se utiliza ampliamente para eliminar ácidos nucleicos de productos biológicos. UltraNuclease también se puede eliminar posteriormente mediante los métodos correspondientes.

Este kit utiliza el principio del ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas de sándwich de doble anticuerpo (ELISA sándwich) para detectar los residuos de UltraNuclease desnaturalizado y no desnaturalizado. Primero, recubre la microplaca con un anticuerpo policlonal de conejo anti-UltraNuclease para formar un anticuerpo en fase sólida. En segundo lugar, agrega el estándar UltraNuclease y la muestra de prueba a la microplaca de anticuerpos en fase sólida, luego agrega el anticuerpo policlonal Anti-UltraNuclease marcado con biotina y, finalmente, agrega estreptavidina marcada con peroxidasa de rábano picante (SA-HRP) para formar un complejo anticuerpo + antígeno + anticuerpo-Biotina + SA-HRP. Posteriormente, se agregó sustrato TMB al complejo para observar la reacción de color después de lavar el complejo. TMB se convierte en azul bajo la catálisis de la enzima HRP y finalmente se convierte en amarillo en presencia de ácido, y el tono de color se correlaciona positivamente con la cantidad de UltraNuclease en la muestra.

El rango de cuantificación de detección de este kit es de 0,047-3 ng/mL; el límite de detección inferior es de 23,5 pg/mL.

Característica

• Altamente sensible: detecta tan sólo 23 pg/ml de residuos de UltraNucleasa en muestras biológicas finales y en proceso.
• Garantiza la precisión: los residuos de UltraNuclease se pueden detectar con precisión con una recuperación del 80% al 110%.
• Especificidad: se puede utilizar conjuntamente con YEASEN UltraNuclease y se pueden detectar con precisión los residuos.
• Estable: la diferencia entre lotes es baja y las propiedades del kit no se ven afectadas a temperaturas inferiores a 37 ℃ durante 6 días.
• Fácil recolección de señales: utilizando el sistema Biotina-Estreptavidina, la señal se puede ampliar de forma estable.
• Kit completo: todos los componentes clave se proporcionan en el kit, por lo que su uso resulta rentable.

Solicitud

• Prueba de UltraNucleasa Residual en productos biológicos

Especificación

Componentes

Envío y almacenamiento

El kit ELISA UltraNuclease se envía con una bolsa de hielo y se puede almacenar a una temperatura entre 2 °C y 8 ​​°C. El producto sin abrir tiene una validez de un año. Una vez abierto el reactivo, su validez es de medio año. Nunca congele este producto.

Almacenamiento de los reactivos preparados:

1. El tampón de lavado diluido y el tampón de dilución se pueden almacenar a una temperatura entre 2 °C y 8 ​​°C durante 1 semana.

2. El estándar 36701-C es líquido y se almacena a una temperatura de entre 2 °C y 8 ​​°C durante 1 año.

3. El anticuerpo de detección preparado y el tampón de detención se pueden almacenar a una temperatura entre 2 °C y 8 ​​°C durante 1 mes.

Cifras

• Demostración de especificidad

Figuras 1. La especificidad del kit UltraNuclease ELISA se muestra en la figura anterior.

Se estimaron 8 muestras imitadoras para la reacción no específica con los anticuerpos del kit. No hubo diferencia significativa entre las 8 muestras y la muestra negativa. （*: Diferencia significativa con respecto a la muestra negativa; NS: No hay diferencia significativa con respecto a la muestra negativa）

• Pantalla de precisión

A)

B)

Figuras 2. La precisión de la prueba ELISA UCF.ME™ UltraNuclease se evaluó como se indica arriba. esquema.

Se analizaron 6 duplicados en cada concentración de la curva estándar y todos los CV% fueron inferiores al 5% (Figura 2A). 3 analistas realizaron el experimento ELISA UCF.ME™ UltraNuclease y los CV% fueron inferiores al 15% (Figura 2B).

• Validación de precisión

A)

B)

Figuras 3. La precisión de UCF.ME™ La prueba ELISA UltraNuclease fue ensayado según el siguiente esquema.

UltraNuclease se añadió a soluciones de lisis celular de 5 μg/mL (HEK293, E. coli, CHO y Vero) de forma independiente con una concentración final de 1,5 ng/mL. La precisión en diferentes muestras de células demostró ser excelente en comparación con otros proveedores (Figura 3A). UltraNuclease se añadió a una muestra real (proporcionada por el cliente) y se diluyó en serie 2 veces de 3 ng/mL a 0,093 ng/mL. La recuperación de la adición estuvo entre el 80 % y el 110 % (Figura 3B).