Descripción
En los eucariotas, el ARNm sufre modificaciones postranscripcionales, formando una estructura especial en el extremo 5' conocida como estructura de capuchón. Esta estructura desempeña un papel importante en la estabilidad, el transporte y la traducción del ARNm. La enzima de capuchón del virus vaccinia es una enzima eficaz que cataliza la formación de la estructura de capuchón. Consta de dos subunidades, D1 y D12, y tiene actividad de ARN trifosfatasa, actividad de guanililtransferasa y actividad de guanina N7-metiltransferasa. Puede unir la estructura de capuchón de 7-metilguanosina (m7Gppp) al extremo 5' del ARN (m7Gppp5'N).
La enzima de protección del virus vaccinia, en presencia de un tampón de protección (Capping buffer), trifosfato de guanosina (GTP), S-adenosilmetionina (SAM) y otros componentes en concentraciones adecuadas, es capaz de proteger el ARN en una hora garantizando al mismo tiempo la direccionalidad correcta.
Este kit utiliza el principio de un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) de doble anticuerpo en sándwich para detectar la cantidad residual de la enzima caperuza del virus vaccinia. El estándar de la enzima caperuza del virus vaccinia y las muestras de prueba se añaden a una placa de enzimas recubierta previamente con anticuerpos anti-enzima caperuza del virus vaccinia (36709-A), seguido de la adición de un anticuerpo de detección de enzima caperuza marcado con biotina diluido (36709-C) y, finalmente, estreptavidina-HRP (SA-HRP) (36709-D). Esto forma el complejo anticuerpo+antígeno+anticuerpo-Biotina+SA-HRP. Después del lavado, se añade la solución de sustrato TMB (36709-H) para desarrollar el color.
Bajo la catálisis de la enzima HRP, el TMB se transforma de incoloro a azul y, bajo la acción de la solución de parada (36709-I), finalmente se convierte en amarillo. La intensidad del color amarillo se correlaciona positivamente con la cantidad de enzima capping del virus vaccinia detectada en la muestra.
Componentes
| No. | Nombre | 36709ES48 | 36709ES96 |
| 36709-A | Enzima de recubrimiento anti-vacuna recubierta tiras de microtitulación | 48 yo | 96T |
| 36709-B* | Estándar: Enzima de operculación de vaccinia | 1 frasco | 2 frasco |
| 36709-C | Detección Anticuerpo: Biotina-conjugado Anticuerpos | 60 microlitros | 120 microlitros |
| 36709-D | Estreptavidina-HRP | 20 microlitros | 40 microlitros |
| 36709-E | Tampón de dilución 1 | 25 ml | 45 ml |
| 36709-F | Concentración de tampón de lavadotasa (20×) | 25 ml | 50 ml |
| 36709-G | Tampón de dilución 2 | 15 ml | 30 ml |
| 36709-H | Sustrato TMB | 8 ml | 15 ml |
| 36709-I | Detener la solución | 5 ml | 10 ml |
| 36709-J | Sellador de placas | 3 cada uno | 5 cada uno |
*El estándar 36709-B es un polvo liofilizado.
Envío y almacenamiento
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