El ARN bicatenario (dsRNA) surge como subproducto durante la transcripción in vitro del ARNm. Este subproducto posee propiedades inmunogénicas dentro del cuerpo humano, capaz de provocar una respuesta inmune, disminuyendo en consecuencia los niveles de ARNm. Esto hace que el dsRNA sea una impureza de proceso problemática que requiere una eliminación exhaustiva y un control estricto de su presencia residual.

Para abordar esta preocupación, el kit de detección ELISA de ARN bicatenario (dsRNA) emplea los principios experimentales de un inmunoensayo ligado a enzimas (ELISA) de tipo sándwich de doble anticuerpo para la cuantificación del dsRNA residual. El kit no sólo se puede utilizar en la detección de dsRNA regulares, sino también en la detección de peudo UTP, N1-Me-peudo UTP. y dsRNA modificados con 5-OMe-UTP.

El procedimiento consiste en añadir tanto un estándar como la muestra de prueba a una placa de enzimas (denominada 36717-A) recubierta previamente con anticuerpos anti-dsRNA. Posteriormente, se añaden anticuerpos de detección de dsRNA marcados con biotina (36717-F) en forma diluida. Finalmente, se introduce estreptavidina-HRP (SA-HRP) (36717-G) para crear un complejo que comprende anticuerpos, antígenos, biotina y SA-HRP.

Tras el lavado de la placa, la adición de la solución cromogénica TMB (36717-K) inicia el desarrollo del color. Bajo la influencia de la catálisis de la enzima HRP, el TMB sufre una transformación de incoloro a azul, que luego se detiene mediante la aplicación de la solución de parada (36717-L). Finalmente, esta transformación da como resultado un tono amarillo, cuya intensidad se correlaciona positivamente con la cantidad de dsRNA identificado en la muestra.

Este kit tiene una finalidad versátil, ya que permite optimizar el proceso de purificación de productos biológicos, controlar impurezas durante etapas intermedias y realizar pruebas de liberación para la evaluación del producto final.

PAGproducto Validación Informe

Componentes

Envío y almacenamiento

El kit se envía con una bolsa de hielo y se puede almacenar a una temperatura entre 2 °C y 8 ​​°C. El producto sin abrir tiene una validez de un año. Una vez abierto el reactivo, su validez es de medio año. Nunca congele este producto.

Instrucciones

1. Preparación antes del experimento

1) Materiales experimentales que no se proporcionan en este kit pero que son necesarios para el experimento:

a. Puntas libres de ARNasa;

b. Tubo de centrífuga libre de ARNasa;

c. Papel libre de polvo;

d. Placa de pretratamiento de muestra libre de ARNasa;

e. Agua desionizada o agua bidestilada.

2) Instrumentos y equipos necesarios pero no proporcionados:

a. Lector de microplacas multifuncional (incluye modo de detección de longitud de onda dual, que cubre 450 nm y 650 nm; capaz de utilizar 450 nm como longitud de onda de detección y 650 nm como longitud de onda de referencia);

b. Lavadora de placas totalmente automática, mezclador vórtex, mezclador de temperatura constante, centrífuga;

c. Micropipetas de precisión y micropipetas multicanal de diferentes especificaciones;

d. Temporizador, refrigerador a 4℃;

e. Agitador de microplacas.

2. Análisis de resultados

a. Si el valor de DO de la muestra a analizar excede el valor de DO en el punto más alto de la curva estándar, la muestra debe diluirse y medirse nuevamente.

b. Procedimiento de desarrollo de la curva: Cree una curva estándar trazando las concentraciones estándar en el eje x y los valores de absorbancia estándar calibrados correspondientes en el eje y. Varias herramientas de dibujo y software estadístico pueden ayudar en la generación de curvas estándar y la determinación de concentraciones de muestra desconocidas. Es recomendable emplear un método de ajuste de cuatro o cinco parámetros para este experimento.Por último, calcule la cantidad residual de dsRNA en la muestra consultando la curva estándar y considerando el factor de dilución de la muestra.

c. La curva estándar proporcionada es un ejemplo ilustrativo (solo para fines de referencia). El contenido real de la muestra debe determinarse utilizando una curva estándar generada específicamente para el mismo estándar experimental.

3. Diagrama de flujo del experimento

Figura 5 Diagrama de flujo del experimento

4. Rendimiento del producto

El rendimiento de este kit ha sido evaluado en su totalidad. Para obtener más detalles, comuníquese con el personal técnico para obtener el informe de verificación de rendimiento correspondiente.

5. Notas

1. Lea atentamente este manual de instrucciones antes de utilizar este kit.
2. Utilice este producto dentro del período de validez y está prohibido mezclar reactivos relacionados de diferentes lotes.
3. Todos los reactivos deben volver a temperatura ambiente antes de su uso.
4. Para su seguridad y salud, utilice bata de laboratorio y guantes desechables.
5. Este producto es sólo para fines de investigación científica.
   
   

   Documentos:

   Hoja de datos de seguridad

   Manual