Descripción
El reactivo de transfección universal Hieff Trans™ es un reactivo de transfección de liposomas multipropósito, conveniente y eficiente desarrollado en base a la última nanotecnología. Es adecuado para la transfección de ADN, ARN y oligonucleótidos, incluidas las células primarias. Las células difíciles de transfectar, incluidas las neuronas, tienen una alta eficiencia de transfección. Su fórmula única permite que se agregue directamente al medio, y la presencia de suero no afecta la eficiencia de transfección, lo que reduce el daño a las células causado por la eliminación del suero. No es necesario eliminar el complejo de reactivo de transfección de ácido nucleico o reemplazarlo con medio fresco después de la transfección, y el medio fresco también se puede reemplazar después de 4 a 6 horas de acuerdo con el estado nutricional de las células.
Componentes del producto
| Número de componente | Componentes | N.º de gato/tamaño | ||
| 40808ES02 | 40808ES03 | 40808ES03 | ||
| 40808-A | Universal-A | 0,5 ml | 1 ml | 5 x 1 ml |
| 40808-B | Universal-B | 0,5 ml | 1 ml | 5 x 1 ml |
Envío y almacenamiento
El producto se envía con paquetes de hielo y se puede almacenar a una temperatura de entre 2 y 8 ℃ durante un año. ¡No lo congele!
Precauciones
1) Durante la operación de transfección, es mejor que la confluencia celular alcance el 70%-90%, y la densidad de siembra específica se determina de acuerdo con la situación de las células.
2) La preparación de complejos de transfección requiere la dilución del ADN y los reactivos de transfección en un medio sin suero.
3) No se pueden agregar antibióticos al medio durante la transfección.
4) El uso de ADN o ARN de alta pureza ayuda a obtener una mayor eficiencia de transfección, y la endotoxina en los plásmidos es el enemigo de la transfección.
5) Conservar entre 2-8ºC, teniendo cuidado de no abrir la tapa repetidamente durante mucho tiempo.
6) La concentración de ácido nucleico y el volumen de reactivo deben optimizarse para el primer uso para obtener la máxima eficiencia de transfección.
7) ¡Este producto es sólo para fines de investigación científica!
Instrucciones
Transfección de ADN
[Nota] La cantidad de reactivo de transfección utilizado se ve afectada por el tipo de célula y otras condiciones experimentales. Se recomienda establecer un gradiente para optimizar la cantidad óptima de uso la primera vez.
1) Las células se siembran y la confluencia celular debe ser del 70%-90% en el momento de la transfección.
2) Diluya la solución Universal-B con el medio Opti-MEM según la siguiente tabla y mezcle suavemente.
3) Diluya el ADN con medio Opti-MEM para obtener una premezcla de ADN, luego agregue la solución Universal-A y mezcle suavemente para obtener ADN diluido.
4) Agregue el ADN diluido a la solución Universal-B diluida (proporción 1:1).
5) Incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos.
6) Añade el complejo de ADN-liposoma a las células gota a gota y mezcla suavemente.
7) Incubar a 37°C, 5% CO2 en incubadora durante 48-96 h hasta el análisis de expresión genética.
Transfección de ARNi
El procedimiento para la transfección de ARNi es el mismo que para la transfección de ADN, excepto que no es necesario agregar la solución Universal-A (paso 3) al diluir el ARNi.
Tabla 1 Cantidad de transfección en diferentes recipientes de cultivo celular (solo como referencia)
| Recipientes para cultivo celular | 96 pocillos | 24 pocillos | 6 pozos | |
| Células adherentes | 1-4×104 | 0,5-2×105 | 0,25-1×106 | |
| Diluya la solución Universal-B con el medio Opti-MEM según la siguiente tabla y mezcle suavemente. | Medio Opti-MEM | 5 μL | 25 μL | 125 μl |
| Universal-B | 0,2 μL | 1 μl | 5 μL | |
| Diluya el ADN con medio Opti-MEM para obtener una premezcla de ADN, luego agregue la solución Universal-A y mezcle suavemente para obtener ADN diluido. | Medio Opti-MEM | 5 μL | 25 μL | 125 μl |
| ADN (0,5–5 μg/μL) | 0,1 μg | 0,5 μg | 2,5 μg | |
| Universal-A (2 μL/μg de ADN) | 0,2 μL | 1 μl | 5 μL | |
| Añade el ADN diluido a la solución Universal-B diluida (proporción 1:1). | Solución de ADN diluida | 5 μL | 25 μL | 125 μl |
| Universal-B | 5 μL | 25 μL | 125 μl | |
| Incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos. | ||||
| Complejo de liposomas y ADN | Componentes (cada pocillo) | 96 pocillos | 24 pocillos | 6 pozos |
| Opti-MEM | 10 μl | 50 μl | 250 μL | |
| ADN (0,5–5 μg/μL) | 0,1 μg | 0.5 μg | 2,5 μg | |
| Universal-B | 0,2 μL | 1 μl | 5 μL | |
| Universal-A | 0,2 μL | 1 μl | 5 μL | |
| Añade el complejo de ADN-liposoma a las células gota a gota y mezcla suavemente. | Complejo de liposomas y ADN | 10 μl | 50 μl | 250 μL |
[Nota] La cantidad utilizada en la tabla es solo de referencia. La cantidad específica de ADN y solución Universal-B utilizada debe optimizarse según el tipo de célula y otras condiciones experimentales. Se recomienda mantener la proporción entre 1:0,5 y 1:5.
(1) P: ¿Puede haber suero presente al preparar el complejo de reactivos de transfección de ácidos nucleicos?
R: La presencia de suero afectará la formación de liposomas. Se recomienda utilizar un medio sin suero (generalmente medio MEM) al preparar complejos de reactivos de transfección de ácidos nucleicos.
(2) P: ¿Se puede congelar el reactivo de transfección?
R: Este reactivo debe almacenarse a 2-8 °C y se debe evitar la apertura repetida y prolongada de la tapa, ya que la apertura prolongada de la tapa provocará la oxidación de los liposomas y afectará la eficiencia de la transfección.
(3) P: ¿A qué debo prestar atención al utilizar el reactivo de transfección universal Hieff Trans™?
R: 1) Durante la operación de transfección, es mejor que la confluencia celular alcance el 70%-90%, y la densidad de siembra específica se determina según la situación de las células.
2) La preparación de complejos de transfección requiere la dilución del ADN y los reactivos de transfección en un medio sin suero.
3) No se pueden agregar antibióticos al medio durante la transfección.
4) El uso de ADN o ARN de alta pureza ayuda a obtener una mayor eficiencia de transfección, y la endotoxina en los plásmidos es el enemigo de la transfección.
5) Conservar entre 2-8ºC, teniendo cuidado de no abrir la tapa repetidamente durante mucho tiempo.
6) La concentración de ácido nucleico y el volumen de reactivo deben optimizarse para el primer uso para obtener la mayor eficiencia de transfección.
(4) P: ¿Es necesario finalizarlo después de la transfección?
R: No es necesario. No es necesario eliminar el complejo de reactivo de transfección de ácido nucleico ni reemplazarlo con medio nuevo después de la transfección. El medio nuevo también se puede reemplazar después de 4 a 6 horas según el estado nutricional de las células.
(5) P: ¿Se puede utilizar el reactivo de transfección para la transfección del empaquetamiento del vector viral?
A: Sí.La eficiencia del empaquetamiento del vector viral no está necesariamente relacionada con la eficiencia de la transfección, sino también con la selección de plásmidos de empaquetamiento y la proporción entre plásmidos.
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Consulta
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Preguntas frecuentes
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