توسعه دارو به مدل های حیوانی برای آزمایش اثربخشی نیاز دارد. با بیش از 50 سال توسعه و بهینه سازی، مدل کولیت اولسراتیو (UC) نمک سدیم سولفات دکستران (DSS) در میان مدل های حیوانی مختلف، به طور گسترده برای مطالعه علت و پاتوژنز بیماری التهابی روده (IBD) استفاده می شود.
شکل 1. توسعه مدل کولیت اولسراتیو DSS
1. ویژگی های مدل UC ساخته شده توسط DSS
2. مزایای مدل DSS UC
3. نمونه ساخت مدل DSS UC
4. مدل سازی معیارهای ارزیابی موفقیت
5. پیوند به این منبع
6. مورد موفق برای مدل سازی با Yeasen DSS
7. سوالات متداول
8. سفارش محصول
9. مقالات منتشر شده با معرف های ما
10. با توجه به ریدینگ
1. ویژگی های مدل UC ساخته شده توسط DSS
علائم متعدد حاد یا مزمن UC می تواند القا شود، مانند اسهال، مدفوع موکوس مانند، خون مخفی مدفوع، مدفوع خونی درشت، کاهش وزن، کاهش فعالیت و رنگ ضعیف پوشش، با دوزهای مختلف DSS.
جدول 1 ویژگی های بافتی مدل کولیت DSS
| دسته مدل کولیت DSS | مدل کولیت حاد | مدل کولیت فاز مزمن |
|---|---|---|
| تغییرات بافت شناسی | پرخونی روده بزرگ، ادم، کوتاه شدن، شکنندگی، افزایش نسبت وزن به قد | کولون به طور قابل توجهی کوتاه شده است |
| زخم روده بزرگ با درجات مختلف | ضخیم شدن مخاط، لنفادنوپاتی | |
| ادم مخاطی، از دست دادن سلول جام، تورم و تخریب دخمه | از دست دادن سلول جام، از دست دادن دخمه | |
| درجات مختلف نفوذ سلول های التهابی در مخاط و زیر مخاط، آسیب سلول های اپیتلیال | پولیپ های آدنوماتوز و تغییرات تومور مانند در تعداد کمی از حیوانات |
2. مزایای مدل UC DSS
👍 1. پیاده سازی پروتکل ها آسان است.
👍 2. مدل DSS UC شباهت زیادی به علائم UC انسان با تکرارپذیری بالا دارد.
👍 3. علائم مشخصه مختلفی را می توان با کنترل دوز تجویز شده DSS، که برای مدل DSS UC منحصر به فرد بود، القا کرد.
👍 4. مدل DSS UC را می توان با انواع حیوانات مدل پرکاربرد، مانند موش، موش، گورخرماهی، خوک، مگس میوه و غیره تولید کرد.
👍 5. مدل سرطان مرتبط با کولیت (CAC) ناشی از IBD را می توان با استفاده ترکیبی از آزوکسی متان (AOM) ایجاد کرد.
3. نمونه ساخت مدل DSS UC
3.1 مدل موش(برای جزئیات کلیک کنید)
1) موش BALB/c ماده، 6-8 هفته، 25 گرم.
2) آب آشامیدنی را با 3% DSS استریل کنید و با 0 فیلتر کنید.غشاء 22 میکرومتر؛
3) DSS به مدت 7 روز اجرا شد.
4) التهاب، مانند روده بزرگ ادم و احتقان، پس از رنگ آمیزی HE مشاهده شد.
شکل 2 نتایج رنگ آمیزی HE مقاطع کولیت حاد DSS [1]
3.2 مدل گورخرماهی(برای جزئیات کلیک کنید)
1) جنین گورخرماهی از تخم ریزی طبیعی به دست آمد و تا 1 روز پس از لقاح (dpf) در یک انکوباتور در دمای 28.5 درجه سانتیگراد در آب در حال چرخش (60 میکروگرم / میلی لیتر نمک دریای فوری اقیانوس) پرورش داده شد و با متیلن بلو تا 1 dpf تکمیل شد.
2) پس از 1 dpf، از محیط کشت جنین E3 بدون متیلن بلو برای کشت تا 3 dpf استفاده کنید.
3) محلول ذخیره سازی 10% DSS را با محیط E3 آماده کنید.
4) DSS را با محیط کشت تا حداکثر دوز غیر کشنده رقیق کنید (مرجع غلظت DSS: 0.5%).
5) گورخرماهی با 0.5% DSS از dpf 3 تا dpf 6 تیمار شد و شاخص ها مشاهده شد.
شکل 3 DSS باعث ایجاد یک پاسخ التهابی در کبد گورخرماهی می شود [2]
3.3 مدل خوک(برای جزئیات کلیک کنید)
1) خوکچه های یورکشایر در سنین 4-5 روز؛
2) دوز DSS: 1.25 گرم / کیلوگرم، مصرف خوراکی به مدت 5 روز.
3) افزایش نرخ جذب D-مانیتول مشاهده شد.
شکل 4 غلظت D-مانیتول ناشی از DSS در خوک‌ها بیشتر از گروه کنترل بود. [3]
3.4 مدل مگس سرکه(برای جزئیات کلیک کنید)
1) مگس سرکه، ماده، 5-10 روز؛
2) تغذیه متوسط با محلول ساکارز 5 درصد حاوی 3 درصد DSS و 25 میکروگرم بر میلی لیتر تهیه شد بلئومایسین؛
3) مگس سرکه در دمای 29 درجه سانتیگراد به مدت سه روز با تغییر روزانه بطری کشت کشت داده شد.
4) DSS تکثیر سلول های پیش ساز ISC را القا کرد و اثر کشنده ای بر مگس سرکه داشت.
شکل 5 DSS باعث تکثیر سلول های پیش ساز ISC در مگس سرکه می شود [4].
3.5 سرطان مرتبط با کولیت(برای جزئیات کلیک کنید)
1) موش BALB/c، نر، 7 هفته؛
2) در روز 1 موش ها را وزن کرده و علامت گذاری کنید. تزریق داخل صفاقی محلول AOM mg/kg 10 به موش ها.
3) منبع آشامیدنی قفس موش را با آب پر کنید. 7-10 میلی لیتر آب برای هر موش در روز محاسبه کنید. تغذیه به مدت یک هفته.
4) آب آشامیدنی را با 2.5% DSS به مدت یک هفته جایگزین کنید.
5) به مدت دو هفته با آب آشامیدنی معمولی تغذیه کنید.
6) مراحل 3-4 را برای 3 بار تکرار کنید.
![Fig.6 Schematic diagram of CAC induced by AOM/DSS [5] .](https://seas.ysbuy.com/file/32626/24d9-166605804688444368.jpg?imageView2/2/format/webp/q/100)
شکل 6 نمودار شماتیک CAC القا شده توسط AOM/DSS [5] .
4. مدل سازی معیارهای ارزیابی موفقیت
4.1 شاخص فعالیت بیماری (نمره DAI)
مدل با پارامترهای متعددی از جمله وزن بدن، ویسکوزیته مدفوع و خون مخفی ارزیابی شد که از طریق آن DAI کلی تولید می‌شود.
جدول 2 قوانین امتیازدهی DAI
| نمره | درصد کاهش وزن | قوام مدفوع | خون مخفی مدفوع |
|---|---|---|---|
| 0 | 0 | عادی | منفی |
| 1 | 1-5٪ | مدفوع نرم | آبی روشن |
| 2 | 5-10٪ | مدفوع مخاطی | آبی |
| 3 | 10-20٪ | مدفوع شل | آبی تیره |
| 4 | > 20% | \ | مدفوع خونی ناخالص |
4.2 امتیاز تغییر بافت شناسی
امتیازات برای شاخص های فوق بر اساس تغییرات بافت شناسی به استثنای تشکیل غدد لنفاوی برای مدل کولیت حاد داده شد. معرف رنگ آمیزی HE مورد استفاده Cat#60524ES60 است.
جدول 3 امتیاز تغییرات بافتی
| زخم زخم |
زخم (ها)
| اپی تغییرات التهابی | نفوذ التهابی |
گره(های) لنفاوی
|
|---|---|---|---|---|
| 0 | 0 | عادی | هیچ کدام | هیچ کدام |
| 1 | 1 | از دست دادن سلول های جام | نفوذ رمزی | 1 |
| 2 | 2 | از دست دادن سلول های جام | نفوذ مخاط عضلانی | 2 |
| 3 | 3 | حذف رمز | انفیلتراسیون عمومی مخاط عضلانی، ضخیم شدن مخاط | 3 |
| 4 | > 3 | از دست دادن گسترده کریپت یا بازسازی پولیپوید | تهاجم زیر مخاطی | > |
4.3 کولون طول
طول کولون کوتاه شده یک فنوتیپ آشکار برای مدل کولیت مزمن بود، در حالی که تغییرات مشابهی را می توان در روز 8 برای مدل کولیت حاد تشخیص داد.
4.4 خلاصه
آزمایش های اولیه برای استفاده از مدل حیوانی DSS UC با کنترل مناسب توصیه می شود. 8-10 حیوان در هر گروه حداقل نیاز است. DAI معیاری برای ارزیابی نتایج یک مطالعه اولیه است.
5. پیوند به این منبع
[1] Xiaona Gao، و همکاران. مجله بیوشیمی تغذیه 83 (2020) 108438.
[2] جینگ ما، و همکاران. آبزی پروری و شیلات (2021) 548-557.
[3] Connie J. Kim، و همکاران. مجله بیوشیمی تغذیه 21 (2010) 468-475.
[4] Fangfang Ren و همکاران PNAS.2010.107 (49) 21064-21069.
[5] Jia-Rong Huang، et al.Frontiers in Pharmacology.2020.11:586885.
6. مورد موفق برای مدل سازی با Yeasen DSS
مدل های کولیت حاد موفق با Yeasen تولید می شوند DSS (Cat#60316ES، MW: 36000~50000) در 7 روز با فنوتیپ برجسته همانطور که در جدول زیر نشان داده شده است.
جدول 4 ساخت انواع مدل های آنتریت با DSS
| مدل | نمونه های مدل سازی | طرح مدلسازی | نتایج مدلسازی | از ارزیابی استفاده کنید |
|---|---|---|---|---|
| کولیت حاد | موش BALB/c ماده، 6-8 هفته، 25 گرم | 3 تا 5 درصد DSS به مدت 7 روز متوالی آزادانه می نوشید | روز 5 ظاهر شد، طول روده بزرگ کوتاه شد، رنگ آمیزی HE، و التهاب آشکار بود. | سرعت قالب گیری سریع و زمان کوتاه است. مطابق با ویژگی های مدل کولیت حاد |
| موش C57BL/6، نر، 8 هفته، 20 گرم | 3-5% DSS با گاواژ، تجویز مداوم | روز 5 رخ می دهد، کوتاه شدن روده بزرگ، کاهش وزن، وجود خون در مدفوع، اسهال | سرعت قالب بالا و مدت زمان کوتاه. مطابق با ویژگی های مدل کولیت حاد | |
| کولیت مزمن | ماوس C57BL/6، نر، 8 هفته، 22 گرم | 1-2٪ DSS با گاواژ، تجویز مداوم | روز 40 ظاهر می شود، کوتاه شدن روده بزرگ، کاهش وزن، خون در مدفوع، اسهال | سرعت قالب گیری بالا. مطابق با ویژگی های مدل کولیت مزمن |
| سرطان روده بزرگ | ماوس C57BL/6، نر، 8 هفته، 21 گرم | 1%-2% DSS بصورت آزاد به مدت 5 روز و به مدت 3 هفته | 14 هفته با کوتاه شدن طول کولون، کاهش وزن، رنگ آمیزی HE و التهاب آشکار | سرعت قالب گیری بالا. مطابق با ویژگی های مدل سرطان کولون |
7. سوالات متداول
صرف نظر از مدل کولیت حاد DSS یا مدل کولیت مزمن DSS، شدت و موفقیت آنتریت به گونه‌های موش (زمینه‌های ژنتیکی مختلف)، غلظت DSS و چرخه دوز مرتبط است.
جدول 5 مشکلات رایج مدل سازی کولیت DSS
| مشکلات احتمالی | دلیل احتمالی | راه حل پیشنهادی |
|---|---|---|
| مرگ و میر بالا در موش | غلظت DSS خیلی بالاست | غلظت DSS تجویز شده را کاهش دهید |
| موش‌هایی که علائم آنتریت ندارند یا کم هستند | غلظت DSS خیلی کم است | افزایش غلظت دوز DSS. کاهش فاصله چرخه (10-14 روز) |
| در همان گروه از موش ها، علائم آنتریت بسیار متفاوت است | درب بطری مسدود شده است | بطری نوشیدنی موش را روزانه چک کنید |
8. سفارش محصول:
محصول پرفروش فقط به 1/3 قیمت نیاز دارد M* با همان کارایی، و ما یک انبار بزرگ نگه می داریم.
جدول 6 سفارش محصول
| نام محصول | گربه شماره | اندازه |
| نمک سدیم سولفات دکستران برای مدل سازی کولیت MW: 36000 ~ 50000 | 60316ES25 | 25 گرم |
| 60316ES60 | 100 گرم | |
| 60316ES76 | 500 گرم | |
| 60316ES80 | 1 کیلوگرم |
9. مقالات منتشر شده با معرف های ما:
2022
[1] Mengmeng Xu، Ying Kong، Nannan Chen، و همکاران. شناسایی امضای ژن مرتبط با ایمنی و پیش‌بینی شبکه CeRNA در کولیت اولسراتیو فعال [J].Frontiers in Immunology.2022. 13: 855645. IF=7.561
[2] Lujuan Xing، Lijuan Fu، Songmin Cao، و همکاران. اثر ضد التهابی پپتیدهای مشتق شده از ژلاتین استخوان گاوی در RA ناشی از LPSW264.7 سلول های ماکروفاژها و سولفات دکستران ناشی از سدیم C57BL/6 موش [J]. مواد مغذی 2022، 14، 1479. IF=5.717
[3] وانگ اس، هوانگ جی، قهوهای مایل به زرد KS، و همکاران Isosteviol Sodium کولیت مزمن ناشی از سولفات سدیم دکستران را از طریق تنظیم پروفایل متابولیک، پلاریزاسیون ماکروفاژها و مسیر NF-B [J] بهبود می بخشد. پزشکی اکسیداتیو و طول عمر سلولی. 2022,4636618. IF=5.076
[4]YuangengLi، PingYu، WenwenFu، و همکاران. پلی ساکاریدهای Panax ginseng CA Meyer با مهار مسیر سیگنالینگ التهابی JAK2/STAT1/NLPR3 در موش، IBD ناشی از DSS را کاهش دادند[J].2.20. IF=4.451
[5] Lei-NingChen، TaoJing، Zi-BinLin، و همکاران. پاسخ های متابولیک و رونویسی بیضه موش به کولیت ناشی از سدیم سولفات دکستران [J]. Reproductive Toxicology. 2022، صفحات 35-42. IF=3.143
2021
[1] Li Zhao، Fei Wang، Zhengwei Cai، و همکاران. بهبود پلت فرم استفاده از دارو با هیدروژل مخاط چسب تزریقی برای درمان کولیت اولسراتیو [J]. مجله مهندسی شیمی424(2021)130464.IF=16.744
[2] Lingjun Tong، Haining Hao، Zhe Zhang، و همکاران. وزیکول‌های خارج سلولی مشتق از شیر با تنظیم ایمنی روده و تغییر شکل میکروبیوتای روده، کولیت اولسراتیو را کاهش می‌دهند[J]. Theranostics.2021 11 (17): 8570-8586 IF=11.556
[3] Jingjing Gan، Yuxiao Liu، Lingyu Sun، و همکاران. ذرات نوکلئوتیدی تحویل خوراکی را از میکروسیال‌ها برای درمان بیماری التهابی روده تجویز کردند[J]. مواد کاربردی امروز. 2021 دسامبر؛ 25:101231. IF=10.041
[4] JialiDong، YuanLi، HuiwenXiao، و همکاران. میکروبیوتای دهان بر اثربخشی و پیش آگهی رادیوتراپی برای سرطان کولورکتال در مدل‌های موش تأثیر می‌گذارد [J]. Cell report.2021، 109886.
[5] هائو H ژانگ X، تانگ L، لیو Q، و همکاران. Q7 در مورد میکروبیوتای روده و کولیت اولسراتیو در موش [J].Frontiers in Immunology.2021.777147. IF=7.561
[6]Yaohua Fan، Yanqun Fan، Kunfeng Liu، et al.Edible Bird's Nest با بازگرداندن تعادل سلولی Th17/Treg[J].Frontiers در فارماکولوژی، کولیت اولسراتیو ناشی از سدیم سولفات دکستران را در موش‌های C57BL/6J بهبود می‌بخشد. IF=7.561
2020
[1]Li, Y., Dong, J., Xiao, H., Zhang, S., Wang, B., Cui, M., & Fan, S. اسید والریک مشتق شده از روده در برابر صدمات ناشی از تشعشع محافظت می کند. میکروب های روده،. 2020 0.1-18.IF=10.245
[2] Jia-Rong Huang، Sheng-Te Wang، Meng-Ning Wei، و همکاران. Piperlongumine کولیت موش و سرطان کولورکتال مرتبط با کولیت را کاهش می دهد [J].Frontiers in Pharmacology.2020.586885. IF=7.561
[3] Gao X، Fan W، Tan L، و همکاران. ایزوفلاون های سویا با هدف قرار دادن مسیرهای التهابی ERα/NLRP3 [J] کولیت تجربی را بهبود می بخشد. مجله بیوشیمی تغذیه، 2020، 83. IF=6.048
قبل از 2020
[1] Oehlers SH، Flores MV، Hall CJ، Crosier KE، Crosier PS. رتینوئیک اسید تولید مخاط روده را سرکوب می کند و انتروکولیت تجربی را تشدید می کند. Dis Model Mech. 2012 ژوئیه؛ 5 (4): 457-67. IF=4.973
[2] Kim CJ، Kovacs-Nolan JA، Yang C، Archbold T، Fan MZ، Mine Y. ال-تریپتوفان عملکرد درمانی را در مدل خوکی کولیت ناشی از سولفات سدیم دکستران (DSS) نشان می‌دهد. جی نوتر بیوشیم. 2010 ژوئن؛ 21 (6): 468-75. IF=6.048
[3] Karpowicz, P., Perez, J. & Perrimon, N.,. مسیر سرکوبگر تومور هیپو، بازسازی سلول های بنیادی روده را تنظیم می کند. توسعه (کمبریج، انگلستان)، 2010،137(24)، pp.4135-4145. IF=6.868
[4] فن اچ، چن دبلیو، ژو جی، و همکاران. توسندانین کولیت ناشی از سدیم سولفات دکستران را با مهار پلاریزاسیون ماکروفاژ M1 و تنظیم NLRP3 inflammasome و سیگنالینگ Nrf2/HO-1 [J] کاهش می دهد. ایمونوفارماکولوژی بین المللی، 2019، 76: 105909. IF=3.943
با توجه به ریدینگ
ایجاد مدل سرطان مرتبط با کولیت ناشی از آزوکسی متان (AOM) و دکستران سولفات سدیم (DSS)
پروتکل کولیت اولسراتیو مدل سازی گورخرماهی با استفاده از سولفات سدیم دکستران (DSS)
پروتکل مدل سازی کولیت اولسراتیو مگس سرکه با استفاده از دکستران سدیم سولفات (DSS)
پروتکل کولیت اولسراتیو مدل سازی خوکچه با استفاده از دکستران سدیم سولفات (DSS)