- کیت سنجش Yeasen TUNEL فلورسانس زیباتری را نشان می دهد
اتصال Fluorescein-dUTP به DNA nicked توسط TdT ترانسفراز یکی از رایج ترین روش ها برای تشخیص آپوپتوز است، به عنوان مثال کیت مرگ سلولی درجا از Roche بر این اصل استوار است. فعالیت ترانسفراز TdT در محصول به طور مستقیم بر کارایی برچسب گذاری تأثیر می گذارد. Yeasen Biologicals، بر اساس تولید آنزیم، تلاش می‌کند تا محصولات باکیفیت مبتنی بر آنزیم‌ها را توسعه دهد و سه آزمایش تونل با برچسب فلورسین (Alexa Fluor 640، Alexa Fluor 488 و FITC) را راه‌اندازی کرده است تا نیازهای کیفیت بالای مشتریان خود را برآورده کند.
در حال حاضر بیش از 120 گروه تحقیقاتی از این محصول استفاده می کنند و مقالات انگلیسی زیادی را در مجلات معتبری مانند Theranostics و EMBO Molecular Medicine منتشر کرده اند.
مکانیسم تشخیص
در مرحله آخر آپوپتوز، شکستگی دو رشته ای DNA کروموزومی یا شکستگی های تک رشته ای، تعداد زیادی انتهای 3-OH چسبنده ایجاد می کند و تحت عمل انتقال پایانی دئوکسی ریبونوکلئوتید (TdT)، dUTP نشاندار شده با فلوئورسئین/آنزیم به 3-نشانه متصل می شود، بنابراین می توان انتهای DNA را از طریق 3 ترمینال تشخیص داد. فلورسانس، که به عنوان برچسب گذاری انتهای نیکل با واسطه ترانسفراز ترمینال دئوکسی ریبونوکلئوتیدی نامیده می شود.
شکل 1: نمودار شماتیک برچسب گذاری Nick End با واسطه ترمینال-دئوکسی نوکلئوتیدیل ترانسفراز (TUNEL)
ویژگی های محصول
- طیف گسترده ای از کاربرد
می تواند برای مقاطع بافت پارافین جاسازی شده، بخش های بافت منجمد، سلول های کشت شده و سلول های جدا شده از بافت ها استفاده شود.
- حساسیت تشخیص بالا
مقدار بسیار کمی از سلول های آپوپتوز قابل تشخیص است.
- تداخل پس زمینه کم
نسبت سیگنال به نویز بالا
- تطبیق پذیری مشاهده
مشاهده میکروسکوپ فلورسانس، تشخیص جریان.
ارائه داده ها
1- آزمایش تونل پیش چربی موش (3T3-L).
شکل 2: تشخیص آپوپتوز پیش آدیپوسیت 3T3-L موش. ردیف اول نشان دهنده کنترل منفی و ردیف دوم نشان دهنده کنترل مثبت است. معرف تشخیص: Cat No. 40306 TUNEL Apoptosis Detection Kit (FITC)
2، تشخیص تونل نمونه های بخش پارافین
شکل 3: LY3009120 به تنهایی یا در ترکیب با Vemurafenib و Obatoclax به طور موثر سرطان تیروئید را در مدل تومور پیوند زیر جلدی به تاخیر انداخت. IF=8.8. نوع نمونه: بافت تومور جاسازی شده با پارافین (برگرفته از موش برهنه). معرف تشخیص: Cat No. 40307 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 488).
3، تشخیص تونل خزیدن سلول
شکل 4: اثر سولفات روی بر آپوپتوز سلول های اندوتلیال در زیر گروه های مختلف. نوع نمونه: HUVEC (سلول های اندوتلیال ورید ناف انسان). معرف تشخیص: Cat No. 40308 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 640)
4- فلوسیتومتری برای تشخیص آپوپتوز
شکل 5: درمان PA می تواند به طور موثری وقوع آپوپتوز را در طول برنامه ریزی مجدد کاهش دهد. IF=3.7. نوع نمونه: سلول های iPS. معرف تشخیص: Cat No. 40307 TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 488).
استناد ادبیات
[1] لی سی، وانگ کیو، گو ایکس، و همکاران. نانوکامپوزیت متخلخل Se@SiO2 مهاجرت و تمایز استخوانی سلول های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان موش را برای تسریع بهبود شکستگی استخوان در مدل موش [J] ترویج می کند.مجله بین المللی نانوپزشکی، 2019، 14: 3845. (IF 4.76)
[2] Miao T، Qian L، Yu F، و همکاران. اثرات محافظتی hydroxysafflor yellow an بر آسیب‌های سلول‌های اندوتلیال شریان کرونر انسانی ناشی از لیپوپروتئین با چگالی کم اکسید شده بالا [J]. توسعه، 2019، 22: 581-589.(IF 6.208)
[3] Wen Y، Liu G، Zhang Y، و همکاران. MicroRNA-205 از طریق تنظیم پایین گیرنده آندروژن [J] با اختلال نعوظ ناشی از دیابت مرتبط است. مجله پزشکی سلولی و مولکولی، 2019، 23(5): 3257-3270.(IF 4.41)
[4] Xu T، Ding W، Ao X، و همکاران. ARC نکروز برنامه ریزی شده و آسیب ایسکمی/خونرسانی مجدد میوکارد را از طریق مهار باز شدن mPTP [J] تنظیم می کند. زیست شناسی ردوکس، 2019، 20: 414-426.(IF 8.37)
[5] Li P، Hao L، Guo YY، و همکاران. کلروکین اتوفاژی را مهار می کند و اختلال عملکرد میتوکندری و آپوپتوز را در نورون های موش هیپوکسیک [J] بدتر می کند. علوم زیستی، 2018، 202: 70-77.(IF 3.40)
[6] چن اچ، گوان بی، چن ایکس، و همکاران. بایکالین اختلالات سد خونی مغزی و دگرگونی هموراژیک را کاهش می‌دهد و پیامد عصبی را در موش‌های سکته مغزی ایسکمیک با درمان تاخیری t-PA بهبود می‌بخشد: درگیری مسیر ONOO--MMP-9 [J]. تحقیقات سکته مغزی ترجمه، 2018، 9 (5): 515-529.(IF 4.87)
[7] Liu Q، Qian Y، Li P، و همکاران. اثرات درمانی ترکیبی میکروسفرهای سولفید مس چند منظوره نشاندار شده با ید 131 در درمان سرطان پستان [J]. Acta Pharmaceutica Sinica B، 2018، 8 (3): 371-380.(IF 6.88)
[8] Han YQ، Ming SL، Wu HT، و همکاران. ناک اوت میوستاتین از طریق افزایش تولید گونه های اکسیژن فعال [J] باعث آپوپتوز در سلول های سرطان دهانه رحم انسان می شود. زیست شناسی ردوکس، 2018، 19: 412-428.(IF 8.37)
[9] Wang S، Xu Y، Weng Y، و همکاران. Astilbin از طریق کاهش استرس اکسیداتیو و التهاب، سمیت کلیوی ناشی از سیس پلاتین را بهبود می بخشد. مواد غذایی و سم شناسی شیمیایی، 2018، 114: 227-236.(IF 3.78)
[10] Liu L، Pang XL، Shang WJ، و همکاران. microRNA-181a بیش از حد بیان شده، اسکلروز گلومرولی و آسیب اپیتلیال لوله‌ای کلیوی را در موش‌های مبتلا به بیماری مزمن کلیوی از طریق تنظیم پایین مسیر TLR/NF-kB با اتصال به CRY1[J] کاهش می‌دهد. پزشکی مولکولی، 2018، 24(1): 49.(IF 3.46)
[11] لی جی، یین کیو، جی اچ، و همکاران. مطالعه ای بر روی غربالگری و اثر ضد توموری پپتید لیگاند اختصاصی CD55 در سلول های سرطان دهانه رحم [J]. طراحی، توسعه و درمان دارو، 2018، 12: 3899.(IF 3.27)
[12] Qian Y، Wang Y، Jia F، و همکاران. نانومیسل های کنترل شده با میکرومحیط تومور با خاصیت AIE برای تقویت درمان سرطان و نظارت بر آپوپتوز [J]. زیست مواد، 2019، 188: 96-106.(IF 9.85)
[13] Li Z، Li D، Li Q، و همکاران. نانوذرات هدایت‌کننده آلبومین مزدوج‌کننده تاج درجا با ایمنی پایین برای شیمی‌درمانی هدف‌گیری تومور [J]. علوم زیست مواد، 2018، 6 (10): 2681-2693.(IF 5.31)
[14] Liu Y، Zhi X، Hou W، و همکاران. سنگدانه‌های خودآرایی نقطه‌های کربنی Gd3+-یونی که با یک حساس‌کننده نور برای تصویربرداری دوگانه فلورسانس/MRI و درمان ضد تومور [J] بارگذاری شده‌اند. مقیاس نانو، 2018، 10(40): 19052-19063.(IF 7.17)
[15] لیو کیو، کیان ی، لی پی، و همکاران. 131 میکروسفرهای دارای سولفید مس با نشاندار I برای درمان تومورهای کبدی از طریق آمبولیزاسیون شریان کبدی [J]. Theranostics، 2018، 8 (3): 785.(اگر 8.12)
سوالات متداول
س: ظاهر برچسب فلورسنت غیر اختصاصی؟
1) خود بافت/سلول ها دارای سطوح بالایی از فعالیت نوکلئاز یا پلیمراز هستند که به راحتی می تواند منجر به ظاهر شدن برچسب های فلورسنت غیر اختصاصی مانند سلول های ماهیچه صاف شود. راه حل این است که بلافاصله پس از مصرف سلول ها یا بافت ها را ثابت کنید و به اندازه کافی ثابت کنید که این آنزیم ها از ایجاد مثبت کاذب جلوگیری کنند.
2) استفاده از فیکساتورهای نامناسب مانند برخی از فیکساتورهای اسیدی منجر به مثبت کاذب می شود. تثبیت کننده پارافورمالدئید خنثی 4 درصد تازه تهیه شده توصیه می شود.
3) فلورسانس غیر اختصاصی نیز ممکن است زمانی رخ دهد که زمان واکنش سنجش TUNEL بیش از حد طولانی باشد و سطح سلول یا بافت را نتوان مرطوب نگه داشت. مراقب باشید زمان واکنش را کنترل کنید و مطمئن شوید که محلول واکنش سنجش TUNEL نمونه را به خوبی پوشش می دهد.
س: پس زمینه فلورسانس خیلی بالاست؟
1) سلول هایی که با سرعت بالایی تقسیم و تکثیر می شوند، با سطوح بالایی از رونویسی، گاهی اوقات شکستگی DNA در هسته را نیز نشان می دهند.
2) قرار گرفتن طولانی مدت در معرض نور تحریک منجر به مثبت کاذب می شود.
س: بازده برچسب گذاری پایین؟
1) تثبیت با اتانول یا متانول منجر به بازده برچسب گذاری پایین می شود.
2) زمان تثبیت بیش از حد طولانی است و در نتیجه سطح اتصال متقابل بسیار زیاد است. توصیه می شود زمان تثبیت را کاهش دهید.
3) بخش بافت بیش از حد ضخیم است که باعث می شود اثر تثبیت رضایت بخش نباشد و بهتر است در 10 میکرومتر کنترل شود.
(4) خاموش کردن فلورسانس: فلورسانس در 10 دقیقه نور معمولی به شدت خاموش می شود. راه حل اجتناب از عملیات سبک است.
جزئیات محصول
| نام محصول | شماره مورد | مشخصات |
| کیت تشخیص آپوپتوز Annexin V-FITC/7-AAD | 40311ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40302ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| کیت تشخیص آپوپتوز Annexin V-PE/7-AAD | 40310ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40303ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| کیت تشخیص آپوپتوز Annexin V-YSFluor™ 488/7-AAD | 40313ES60 | 100T |
| 40305ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40304ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| کیت تشخیص آپوپتوز Annexin V-YSFluor™ 647/7-AAD | 40312ES20/50/60 | 20T/50T/100T |
| 40306ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40307ES20/50/60 | 20T/50T/100T | |
| 40308ES20/50/60 | 20T/50T/100T |