در فرآیند کشت سلولی، هضم سلولی اغلب مورد نیاز است، بنابراین تریپسین مورد استفاده برای هضم سلول ها برای کشت سلول ضروری است و همچنین بسیار مهم است که بر وضعیت رشد سلول ها تأثیر می گذارد.

تریپسین را می توان به طور کلی به دو نوع تقسیم کرد، یکی تریپسین نوترکیب و دیگری تریپسین غیر نوترکیب.

• تریپسین غیر نوترکیب از استخراج حیوانی با منشأ حیوانی به دست می آید و همچنین استفاده سنتی از تریپسین است که معمولاً در دستگاه گوارش حیوانات یافت می شود و مستقیماً از بافت پانکراس گاو یا خوک استخراج می شود.
• تریپسین نوترکیب با استفاده از فناوری نوترکیب ژنتیکی تولید می شود و منشا حیوانی ندارد.

معرفی محصول و کاربرد

تریپسین غیر نوترکیب (مشتق شده از حیوان)

ویژگی های محصول：

تریپسین غیر نوترکیب (همچنین به عنوان تریپسین شناخته می شود) یک آنزیم پروتئولیتیک سرین است که از لوزالمعده گاو، گوسفند و خوک استخراج می شود، که می تواند به طور خاص پایانه کربوکسیل لیزین و آرژنین با بار مثبت را بشکند، با کریستالیزاسیون چندگانه خالص شود، و بیشتر با منشاء کروماتوگرافی حیوانی تهیه شود.

از آنجایی که آنزیم های لوزالمعده می توانند بر روی پروتئین های غشایی و پروتئین های موجود در ماتریکس خارج سلولی مانند کادهرین، اینتگرین و غیره عمل کنند، امروزه معمولاً برای جداسازی بافت ها و سلول های تک لایه استفاده می شوند. اگرچه تریپسین می‌تواند پروتئولیز بین سلول‌ها را به سلول‌های مجزا هیدرولیز کند، واکنش بافت‌ها یا سلول‌های مختلف به تریپسین متفاوت است و فعالیت سلول‌های پراکنده نیز به غلظت تریپسین، دما و زمان واکنش مرتبط است و توانایی تریپسین برای پراکندگی سلول‌ها در شرایط pH 9-7 و دمای 37 درجه سانتی‌گراد قوی‌ترین است. افزودن EDTA به محلول تریپسین به عنوان یک عامل کیلیت، کلسیم و منیزیم را به یک ساختار شش دندانه متصل می کند، که می تواند چسبندگی سلولی را تضعیف کند و جذب پیوندهای پپتیدی هدفمند هیدرولیز شده توسط تریپسین را افزایش دهد.

کاربرد اصلی تریپسین در روزهای اولیه در زمینه بیودارویی تولید انسولین بود و به زودی در سایر زمینه های کشت سلولی نیز مورد استفاده قرار گرفت. آنزیم های پانکراس حیوانی معمولاً در کشت سرم استفاده می شوند و ترکیب و غلظت تریپسین اضافه شده به سلول های مختلف متفاوت است.

برنامه های کاربردی

1. تولید انسولین و واکسن های غیر فعال؛
2. جداسازی و کشت سلول های بافتی؛
3. استفاده بالینی و جراحی؛
4. کمک های فرآوری در صنایع غذایی؛

تریپسین نوترکیب (بدون منشاء حیوانی)

ویژگی های محصول

تریپسین نوترکیب آنزیمی است که با استفاده از فناوری مهندسی ژنتیک تولید می‌شود که دارای مزایای پایداری خوب، خلوص بالا و بدون منشأ حیوانی است. در فرآیند تولید بیوداروهای مدرن، استفاده از مواد خام حاوی منشاء حیوانی ممکن است منابع ویروسی بالقوه ای را که باعث بیماری های مشترک بین انسان و دام می شوند وارد محصول کند، مانند BSE بیماری جنون گاوی، ویروس تب برفکی و غیره، به منظور کاهش منبع آلودگی، تریپسین از طریق فناوری مهندسی ژنتیک سنتز می شود، که ممکن است خطر ابتلا به ویروس سنتی را حل کند. تریپسین

تریپسین نوترکیب عمدتاً نوترکیب است که توسط سیستم E. coli یا مخمر نوترکیب بیان می شود و با کروماتوگرافی چند مرحله ای بدون آلودگی هتروزیمی مانند کیموتریپسین خالص می شود. تریپسین نوترکیب دارای همان خواص تریپسین استخراج شده طبیعی است، با یک توالی اسید آمینه همولوگ با توالی تریپسین خوک، که به طور خاص گروه های کربوکسیل موجود در باقی مانده های لیزین و آرژنین را در زنجیره پلی پپتیدی می شکافد.به دلیل آلودگی غیر حیوانی و خلوص بالا، کاربردهای گسترده ای در توسعه دارویی، تحقیقات بیوشیمیایی، پروتئومیکس و سایر زمینه ها دارد.

تریپسین نوترکیب اصلی موجود در بازار یک تریپسین خوک نوترکیب است که در اشریشیا کلی یا مخمر با استفاده از فناوری نوترکیب DNA بیان می شود و توالی اسید آمینه آن کاملاً با تریپسین خوک مطابقت دارد، با فعالیت و ویژگی مشابه تریپسین طبیعی. از 223 اسید آمینه تشکیل شده و حاوی 6 جفت پیوند دی سولفیدی است. این آنزیم حاوی دو شکل فعال تریپسین است: α-تریپسین و β-تریپسین. فعالیت آن توسط مهارکننده های سرین پروتئاز مانند PMSF و TLCK، شلاتورهای یون فلزی مانند EDTA و ... مهار می شود.تریپسین نوترکیب در کشت بدون سرم استفاده می شود و مانند تریپسین سلول های مختلف با اجزا و غلظت های مختلف تریپسین اضافه می شود.

برنامه های کاربردی

1. تولید واکسن و انسولین نوترکیب؛
2. آماده سازی نمونه های بافت برای تجزیه و تحلیل سلولی.
3. سلول درمانی ایمنی؛
4. تولید بیودارویی؛
5. تحقیق توالی پروتئین، ساختار و omics

مقایسه دقیق محصولات

محصولات	تریپسین غیر نوترکیب (مشتق شده از حیوان)	تریپسین نوترکیب (بدون منشاء حیوانی)
مورد	40123ES (فنل قرمز(-)، EDTA(+)) 40124ES (فنل قرمز(-)، EDTA(-)) 40126ES (فنل قرمز(+)،EDTA(-)) 40127ES (فنل قرمز(+)،EDTA(+))	40512ES 20416ES (MS-SAFE)
منبع	از پانکراس گاو، خوک و گوسفند گرفته شده است	کلی باسیلوس (40512ES) Pichia pastoris (20416ES)
امنیت	آلودگی با عوامل بیماری زا بالقوه	بدون آلودگی ویروسی اگزوژن
خلوص	بیش از 90 درصد محلول تریپسین 1:250 ناخالصی است	خلوص بالا (β-تریپسین ≥ 70% α-تریپسین ≤20٪)
نوع سلول گوارشی	پیوسته ترین خطوط سلولی به شدت چسبنده	پیوسته ترین خطوط سلولی به شدت چسبنده
محدودیت کیموتریپسین	در هر 2500 واحد تریپسین بیش از 50 واحد کیموتریپسین وجود ندارد.	بدون میروزیناز و سایر آلودگی های آنزیمی ناخالصی
فعالیت خاص	≥2500 واحد USP/mg پروتئین	≥3800 واحد USP/mg پروتئین
اثر گوارشی	بی ثباتی	هضم قوی و مقدار کم آنزیم
نرخ خود برش	برش و تولید قطعات خود برش آسان است که بر نتایج تجزیه و تحلیل طیف سنجی جرمی تأثیر می گذارد.	برش و تولید قطعات خود برش آسان است که بر نتایج تجزیه و تحلیل طیف سنجی جرمی تأثیر می گذارد.
مایع حل شده	محلول HBSS با یا بدون Ca2+، Mg2+	محلول HBSS با یا بدون Ca2+ و Mg2+ (40512ES). 1 میلی‌مولار HCL (20416ES)
بقای سلولی	عادی	عادی
اینکه آیا انجماد و ذوب مورد نیاز است یا خیر	بله	بله

علاوه بر رایج ترین تریپسین مورد استفاده در هضم سلولی، بسیاری از انواع دیگر محصولات آنزیمی گوارشی نیز وجود دارد که می توان از آنها استفاده کرد، مانند موارد زیر.

درباره زمینه کاربرد کلاژناز

کلاژناز یک اندونوکلئاز پپتیداز است که می‌تواند به طور خاص توالی Pro-X-Gly-Pro را تشخیص دهد و پیوند پپتیدی بین اسید آمینه خنثی (X) و گلیسین (Gly) را در توالی قطع کند، کلاژناز تنها پروتئازی است که می‌تواند فیبرهای کلاژن طبیعی را با یک ساختار سه‌رشته‌ای، پروتئین‌های هیدروچارکی و دیگر پروتئین‌های فوق‌العاده موثر تجزیه کند. لیپیدهای موجود در ماتریکس خارج سلولی بافت همبند و بافت اپیتلیال، این محصول را برای هضم بافت بسیار مناسب می کند.

1. کلاژناز I. که معمولاً به عنوان آماده سازی سلول های اپیتلیال، سلول های کبد، ریه، چربی و بافت آدرنال استفاده می شود.
2. کلاژناز II، که برای تهیه سلول های مشتق از بافت مانند قلب، استخوان، ماهیچه، کبد، تیروئید و غضروف استفاده می شود.
3. کلاژناز III که معمولاً در تهیه سلول های پستانی استفاده می شود.
4. کلاژناز IV، که معمولاً برای تهیه سلول‌های جزایر پانکراس یا برای آزمایش‌های آماده‌سازی سلولی که یکپارچگی گیرنده باید حفظ شود، استفاده می‌شود.
5. کلاژناز V. مناسب برای جداسازی سلول های جزایر پانکراس و سلول های بافت همبند.

درباره زمینه کاربرد تریپسین مرکب

Accutase یک هضم سلولی است که حاوی فعالیت پروتئولیتیک و کلاژناز است و جایگزین مناسبی برای هضم های تریپسین-EDTA برای هضم سلول ها از عروق کشت بافت معمولی و عروق کشت چسبنده است. آکوتاز برای جداسازی بافت و جداسازی سلول مناسب است، زیرا سلول های جدا شده آنتی ژن های سطحی دست نخورده را حفظ می کنند و حاوی هیچ گونه اجزای مشتق شده از حیوان یا باکتری نیستند، که می تواند الزامات آزمایش های بعدی مانند برچسب گذاری سطح سلول، تجزیه و تحلیل رشد ویروس، فلوسیتومتری و سنجش های مربوط به بیوراکتور را برآورده کند.

مناطق مورد استفاده برای جایگزین های آنزیم پانکراس

محصولات آنزیمی PerfCell Tryzyme Express بسیار خالص هستند، آسیب سلولی کمی دارند، هضم ملایمی دارند و می‌توانند به‌طور پایدار در دمای اتاق ذخیره شوند، و آن‌ها را به یک آنزیم گوارشی ایده‌آل برای کشت‌های مختلف سلولی تبدیل می‌کند. این نوع محصول برای غیرفعال سازی نیازی به استفاده از مهارکننده های تریپسین ندارد و منشا حیوانی ندارد که برای برخی از آزمایشات سلولی چسبنده رشد بدون سرم سازگارتر است.

در مورد منطقه کاربردی از dispase

دیسپاز II دیسپاز II، یک متالوپروتئیناز غیر اختصاصی، معمولاً در زیست شناسی سلولی برای جداسازی سلول های منفرد از بافت ها یا اندام های مختلف استفاده می شود و در کشت های سلولی بعدی، مانند جداسازی سلول های اولیه، عبور سلولی و غیره استفاده می شود و همچنین می تواند برای از بین بردن تجمع سلولی که در طول کشت سلولی رخ می دهد، استفاده شود. در مقایسه با سایر پروتئازهایی که معمولاً در زیست شناسی سلولی استفاده می شوند (به عنوان مثال، تریپسین، کلاژناز، پروناز و غیره)، این آنزیم دارای مزایای زیر است:

1. آنزیم های هضم سریع، موثر و ملایم سلولی، با آسیب کمی به سلول ها، و می توانند یکپارچگی غشای سلولی را حفظ کنند.
2. مشتق شده از باکتری ها، بدون مایکوپلاسما یا سایر آلودگی های ویروسی حیوانی.
3. پایداری قوی، تحت تأثیر دما، pH و اجزای سرم قرار نمی گیرد.
4. می توان از آن برای جداسازی انواع مختلف بافت ها و سلول ها استفاده کرد.

توصیه های محصول مرتبط

شماره کاتالوگ	نام محصول	اندازه
40123ES60	PerfCel™l Trypsin-EDTA (0.25%)، فنل قرمز	100 میلی لیتر
40124ES60	PerfCell™ تریپسین - بدون EDTA (0.25٪)، بدون فنل قرمز	100 میلی لیتر
40126ES60	PerfCell™ تریپسین (0.25%)، فنل قرمز	100 میلی لیتر
40127ES60	PerfCell™ Trypsin-EDTA (0.25%)، فنل قرمز	100 میلی لیتر
40101ES25	تریپسین 1:250 (پودر)	25 گرم
40512ES10/60	تریپسین نوترکیب (پودر) PerfCell™	10 میلی گرم / 100 میلی گرم
20416ES60	تریپسین نوترکیب (MS-SAFE)	100 میکروگرم
40134ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 میلی لیتر
40135ES60	PerfCell Tryzyme™Express	100 میلی لیتر
40506ES60	تهمت زدن	100 میلی لیتر
40104ES60/80	Dispase II	100 میلی گرم در 1 گرم