- RT-qPCR با سیستم معکوس بسیار کارآمد تغذیه می شود ترانس کریپتاز

ترانس کریپتاز معکوس (آنزیم RT) آنزیمی است که قادر به تبدیل الگوهای RNA به DNA مکمل (cDNA) است. در تحقیقات زیست شناسی مولکولی، ترانس کریپتاز معکوس به طور گسترده ای مورد استفاده قرار می گیرد، به ویژه که نقشی ضروری در زمینه تشخیص مولکولی ایفا می کند. از طریق فرآیند رونویسی معکوس، ژنوم RNA ویروس ها را می توان به cDNA تبدیل کرد، که سپس با استفاده از تکنیک هایی مانند qPCR می توان آن را تقویت و شناسایی کرد. این ویژگی تشخیص دقیق ویروس های RNA مانند HIV، آنفولانزای A و آنفولانزای B را امکان پذیر می کند.

شکل 1. نمودار شماتیک فرآیند رونویسی معکوس

پیگیری معرف‌های تشخیصی مولکولی RT-qPCR که سریع‌تر، حساس‌تر و آسان‌تر عمل می‌کنند، به روند اصلی توسعه تبدیل شده است. به عنوان یکی از مواد خام کلیدی در فرآیند RT-qPCR، رونوشت معکوس نیاز به سرعت رونویسی معکوس سریعتر، بازده سنتز بالاتر و مقاومت حرارتی بهتر دارد. به منظور به دست آوردن یک ترانس کریپتاز معکوس مناسب تر برای RT-qPCR، Yeasen Hifair را توسعه داده است^TM مجموعه ای از ترانس کریپتازهای معکوس از طریق اصلاح ژنتیکی بر اساس M-MLV، دارای فعالیت RNase H کمتر، پایداری حرارتی بالاتر و قابلیت سنتز مداوم قوی تر.

شکل 2. شماتیک عمل رونویسی معکوس

هیفر™ترانس کریپتازهای معکوس

Yeasen دارای انواع Hifair است^TM ترانس کریپتاز معکوس، و می تواند انواع فرم های محصول، از جمله آنزیم و پیش مخلوط را ارائه دهد، شما می توانید با توجه به نیازهای واقعی انتخاب کنید. جدول زیر ویژگی ها و کاربردهای توصیه شده رونوشت های معکوس Yeasen را فهرست می کند.

جدول 1 دستورالعمل انتخاب از Hifair^™ ترانس کریپتازهای معکوس

نام محصول (شماره محصول )

ویژگی های محصول

برنامه پیشنهادی

هیفر^TM III معکوس ترانس کریپتاز (11111ES)

از نظر حرارتی پایدار (تا 65 درجه سانتیگراد)، مناسب برای قالب های پیچیده

RT-LAMP

هیفر^TM V معکوس

ترانس کریپتاز (11300ES)

سازگاری قوی، سرعت سریع و عملکرد سنتز بالا

یک مرحله ای RT-PCR/qPCR

توجه: تمام آنزیم های ذکر شده در بالا در فرمولاسیون های با غلظت بالا یا غیر گلیسرول موجود هستند.

ما اکنون رونوشت معکوس مورد استفاده در معرف های تشخیصی مولکولی RT-qPCR را برجسته می کنیم: Hifair^TM V رونوشت معکوس. این آنزیم با سازگاری قوی، سرعت سریع و بازده سنتز بالا متمایز است و قادر به تحمل دمای واکنش تا 58 درجه سانتیگراد است. این به ویژه برای توسعه معرف های تشخیصی مولکولی RT-qPCR مناسب است.

نمایش عملکرد Hifair™ V ترانس کریپتاز معکوس

1-قابلیت تحمل دمای واکنش 58 درجه سانتیگراد، برای رونویسی معکوس الگوهای پیچیده RNA مناسب است..

شکل 3. رونوشت معکوس Hifair^TM V Reverse Transcriptase و نام تجاری T* به ترتیب در دمای 55 و 58 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه انکوبه شدند تا فعالیت آنزیم باقیمانده را شناسایی کنند. نتایج نشان داد که Hifair^TM V Reverse Transcriptase هنوز هم می تواند 70٪ فعالیت را پس از انکوباسیون در دمای 58 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه حفظ کند، که بسیار بالاتر از T * با نام تجاری بود.

2. میزان تشخیص RT-qPCR بهتر از سایر برندها بود،و تیمحدوده تشخیص او 1 pg-1 میکروگرم بود.

شکل 4. با استفاده از 1 pg-1 میکروگرم (7 گرادیان) RNA کل سلول های 293T به عنوان الگو، رونویسی معکوس با استفاده از Hifair انجام شد.^TM V یک مرحله ای RT-gDNA هضم SuperMix برای qPCR(Cat#11142)، V*، T*. cDNA به‌دست‌آمده با qPCR مورد تجزیه و تحلیل کمی قرار گرفت. نتایج نشان داد که حساسیت 11142ES می تواند به 1 pg برسد که نسبت به سایر برندها بهتر است.

کتابخانه یاسن جهش یافته رونوشت معکوس

Yeasen به ترویج تکامل ترانس کریپتاز معکوس ادامه می دهد با ویرایشگر Zyme آن^TM پلت فرم تا کنون، ما انواع جهش‌های ترانس کریپتاز معکوس را با عملکرد عالی در کاربردهای مختلف بررسی کرده‌ایم که می‌تواند به طور کامل نیازهای گروه‌های مشتریان مختلف را در زمینه‌های کاربردی متنوع برآورده کند.

جدول 2. را راهنمای انتخاب جهش ترانس کریپتاز معکوس یاسن

محصولات توصیه شده

طبقه بندی محصول	نام محصول	شماره کاتالوگ
سری آنزیمی PCR با کارایی بالا	Hieff UNICON™ Hotstart E-Taq DNA Polymerase، 5 U/μL	10726ES
	Hifair™ V Reverse Transcriptase (200 U/μL)	11300ES
	Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG)، 1 U/μL	14455ES
	مهارکننده RNase موش (40 U/µL)	10603ES
	dNTP Mix (هر کدام 25 میلی‌مولار)	10125ES

مقاله قبلی مقاله بعدی