مواد اولیه رونویسی معکوس Yeasen سنتز cDNA با کیفیت بالا را تسهیل می کند

مواد خام ترانس کریپتاز معکوس Yeasen سنتز cDNA با کیفیت بالا را تسهیل می کند.

ترانس کریپتاز معکوس که به عنوان DNA پلیمراز وابسته به RNA نیز شناخته می شود، یک آنزیم DNA پلیمراز است که RNA تک رشته ای را به DNA رونویسی می کند. عملکرد ترانس کریپتاز معکوس به طور مستقیم بر عملکرد نهایی معرف های تشخیصی مولکولی تأثیر می گذارد. Yeasen در پاسخ به نقاط درد سازندگان معرف های تشخیصی مولکولی، تبدیل جهت را بر روی رونوشت معکوس انجام داده است. ترانس کریپتاز معکوس عملکرد بسیار خوبی دارد و به خوبی مورد استقبال مشتریان قرار می گیرد!

1. وظیفه ترانس کریپتاز معکوس چیست؟
2. چگونه ترانس کریپتاز معکوس را انتخاب کنیم؟
3. چرا رونوشت معکوس Yeasen را انتخاب کنید؟
4. محصولات مرتبط و عملکرد
5. محصولات مرتبط

1. وظیفه ترانس کریپتاز معکوس چیست؟

ترانس کریپتاز معکوس یک DNA پلیمراز وابسته به RNA است. می تواند RNA الگو را رونویسی کند و DNA مکمل (cDNA) را تشکیل دهد. cDNA تک رشته ای با استفاده از DNA پلیمراز به DNA دو رشته ای تبدیل می شود. بنابراین ترانس کریپتازهای معکوس معمولاً برای تعیین کمیت سطح سنتز mRNA در صورت ترکیب با تکنیک واکنش زنجیره ای پلیمراز به نام RT-PCR استفاده می شوند. روش های کمی RT-PCR معمولا در تشخیص بیماری استفاده می شود. بنابراین، رونوشت معکوس نقش مهمی در تحقیقات علمی و کاربرد عملی دارد.

2. چگونه ترانس کریپتاز معکوس را انتخاب کنیم؟

ترانس کریپتازهای معکوس رایج M-MLV و AMV هستند که در میان آنها M-MLV بهتر از AMV است. اما آنزیم‌های معمولی RT دو مکان فعال دارند، یکی فعالیت‌های پلیمراز و دیگری فعالیت ریبونوکلئاز H را انجام می‌دهد. RNase H یک اندونوکلئاز است که قادر به تجزیه بخش RNA خانواده هیبریدهای DNA-RNA است. بنابراین، رونوشت معکوس فاقد فعالیت RNase H برای سنتز cDNA مفید است. علاوه بر این، استفاده از یک نسخه پایدار حرارتی RT برای کاهش تقویت اسید نوکلئیک غیر اختصاصی و به حداقل رساندن تأثیر ساختارهای ثانویه پیچیده مفید است.

3. چرا رونوشت معکوس Yeasen را انتخاب کنید؟

Yeasen اصلاح جهت روی رونوشت معکوس انجام داده است که فعالیت RNase H را حذف می کند و در نتیجه توانایی سنتز cDNA را بهبود می بخشد. استفاده از فناوری تکامل پروتئین برای بهبود پایداری حرارتی رونویسی معکوس.

ترانس کریپتاز معکوس Yeasen نه تنها دارای توانایی سنتز قوی است بلکه توانایی تحمل قوی نیز دارد. علاوه بر این، Yeasen الزامات سختگیرانه ای در مورد کیفیت دارد. این بهترین انتخاب برای ترانس کریپتاز معکوس است.

4. محصولات مرتبط و عملکرد

4.1 مقاوم در برابر دمای بالای 65 درجه سانتیگراد

با استفاده از 500 نانوگرم RNA کل سلول 293T به عنوان یک الگو، رونویسی معکوس در دمای 42-65 درجه سانتی گراد با استفاده از Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase انجام شد. 1 میکرولیتر cDNA را به عنوان الگو برای تقویت ژن TFRC (4.4 کیلوبایت) بگیرید.

Figure 1. Perform reverse transcription at 42°C-65℃

شکل 1. رونویسی معکوس را در دمای 42-65 درجه سانتیگراد انجام دهید

4.2 سازگار با قالب های پیچیده

دمای واکنش 55 درجه سانتی‌گراد می‌تواند رونویسی معکوس الگوهای معمولی و قالب‌های ساختار ثانویه را برآورده کند، و دمای واکنش الگوهای GC بالا را می‌توان به طور مناسب تا 65 درجه سانتی‌گراد افزایش داد.

Figure 2. Suitable for GC-rich templates and secondary structure templates

شکل 2.مناسب برای قالب های غنی از GC و قالب های ساختار ثانویه

4.3 عملکرد برنامه افزودنی عالی

با استفاده از 500ng RNA کل سلول های 293T به عنوان یک الگو و Oligo(dT) به عنوان آغازگر، cDNA با استفاده از Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase سنتز شد. برای تقویت 500 جفت باز از 5' ژن DY1C1N1 (19.9 کیلوبایت) 1 میکرولیتر cDNA را به عنوان الگو در نظر بگیرید. نتایج نشان داد که Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase می تواند cDNA را تا 19.8kb سنتز کند.

Figure 3. Up to 19.8kb cDNA can be synthesized

شکل 3. تا 19.8 کیلوبایت cDNA را می توان سنتز کرد

4.4 سنتز سریع

با استفاده از RNA سلول های 293T به عنوان الگو، رونویسی معکوس طبق رویه استاندارد در راهنما انجام شد و زمان رونویسی معکوس به ترتیب بر اساس 5، 10، 15، 30، 45 و 60 دقیقه تنظیم شد. Hifair™ III Reverse Transcriptase می تواند یک cDNA 6 کیلوبایتی را در عرض 5 دقیقه سنتز کند و ویژگی و بازده آن نسبت به برند V برتر است.

Figure 4. 6kb cDNA can be synthesized within 5 minutes

شکل 4. 6kb cDNA را می توان در عرض 5 دقیقه سنتز کرد

4.5 محدوده خطی گسترده

با استفاده از 5pg-5μg RNA کل سلول های 293T به عنوان یک الگو، cDNA با استفاده از Hifair™ III Reverse Transcriptase سنتز شد. 1 میکرولیتر cDNA به عنوان الگو استفاده شد و qPCR روی چهار ژن انجام شد و نتایج نشان داد که راندمان تکثیر همگی بین 98٪ و 100.10٪ بود. این نشان می دهد که cDNA می تواند به طور موثر در طیف گسترده ای از الگوها سنتز شود.

Figure 5. cDNA can be synthesized efficiently in a wide template range

شکل 5. cDNA را می توان به طور موثر در یک محدوده قالب گسترده سنتز کرد

4.6 کنترل کیفیت دقیق

برای اطمینان از عملکرد پایدار آنزیم معکوس Yeasen، Yeasen به شدت الزامات را در فرآیند تولید برای تثبیت فرآیند تولید و اطمینان از ثبات دسته ای اجرا می کند. در عین حال، بازرسی کیفیت برای شناسایی باقیمانده‌هایی از جمله اگزونوکلئاز، نیکاز، RNase و غیره تقویت می‌شود. اطمینان حاصل کنید که هیچ باقیمانده ای وجود ندارد تا بر آزمایشات پایین دست تأثیری نگذارد.

Figure 6.Residue detection

شکل 6. تشخیص پسماند

5. محصولات مرتبط

محصولات ارائه شده توسط Yeasen به شرح زیر می باشد.

جدول 1. محصولات مرتبط

موقعیت یابی محصول نام محصول SKU
ترانس کریپتاز معکوس Hifair™ Ⅲ Reverse Transcriptase (200 U/μL) (برای استفاده RT-LAMP و RT سریع)(پرس و جو کنید) 11111ES
Hifair™ ترانس کریپتاز معکوس V (U/μL 200) (برای استفاده از RT-qPCR) 11300ES
Hifair™ IV Reverse Transcriptase (200 U/μl) (برای استفاده از NGS) 11112ES
Hifair™ V رونوشت معکوس 11301ES
مهارکننده RNase موشی مهارکننده RNase موش (40 U/µL) 10603ES
مهارکننده RNase موش (200 U/µL، بدون گلیسرول) 10703ES
Hotstart Taq DNA Polymerase Hieff Unicon™ Hotstart Direct Taq DNA Polymerase، 50 U/μL (پرس و جو کنید) 10718ES
Hieff UNICON™ Hotstart E-Taq DNA Polymerase، 5 U/μL 10726ES

در مورد ریدینگ

راهنمای انتخاب ترانس کریپتاز معکوس

YEASEN UDG: "متخصص ضد رسوب" در واکنش های PCR

تحقیق