- پس زمینه
داده های خلاصه شده در این گزارش توسط Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. برای MycAway انجام شده است.TM کیت تشخیص واقعی qPCR مایکوپلاسما (2G) محصول
داده های خلاصه فقط برای مرجع کاربر است و کاربر باید روش مایکوپلاسما را با استفاده از نمونه های خود تأیید کند تا تأیید کند که روش می تواند نیازهای کاربر را برآورده کند. به کلیه آزمایشگاه هایی که از این کیت استفاده می کنند توصیه می شود پارامترهای زیر را تأیید کنند: حد تشخیص، ویژگی و استحکام.
Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd. می تواند گزارش صلاحیت دقیق این کیت را ارائه دهد. اگر کاربر از این گزارش استفاده کند، فقط مناسب بودن (که شامل محدودیت تشخیص و ویژگی است) باید تأیید شود.
محتوای اعتبارسنجی:
| عملکرد | پارامترهای اعتبارسنجی | نتایج اعتبار سنجی |
| حد تشخیص | حد تشخیص فشار مایکوپلاسما | حد تشخیص برای 10 نوع مایکوپلاسمای دارویی: 10 CFU/mL، هر کدام 24 بار با نرخ تشخیص ≥95٪ آزمایش شده است. |
| خاص بودن | تداخل ماتریس نمونه | 9 ماتریس نمونه مختلف و محلول رقت DNA را آزمایش کرد، هیچ مایکوپلاسما شناسایی نشد. |
| واکنش متقابل | 14 سویه و 6 سلول مهندسی رایج مورد استفاده در بیوداروها مورد آزمایش قرار گرفت، هیچ مایکوپلاسما شناسایی نشد. | |
| ماندگاری | پایداری انجماد-ذوب | می تواند 20 چرخه انجماد و ذوب مکرر را بدون تأثیر بر عملکرد کیت تحمل کند. |
| پایداری شتاب حرارتی | تحت شرایط 37 درجه سانتی گراد به مدت 14 روز و 4 درجه سانتی گراد به مدت 30 روز تحت تاثیر قرار نمی گیرد. | |
| سازگاری با ابزار | سازگار با ABI7500، ABI QuantStudio™5، Bio-Rad CFX96، و Roche LightCycler®480. | |
| پوشش | پوشش انواع DNA مایکوپلاسما | مقایسه پایگاه داده با استفاده از توالی‌های rRNA مایکوپلاسما 16S، 183 گونه را در کلاس Mollicutes پوشش می‌دهد. |
- مواد و روش های آزمایشی
2.1 MycAwayTM کیت تشخیص qPCR Real-time مایکوپلاسما (2G)، فروشنده: Yeasen، Cat No.: 40619ES60.
2.2 مول پورTM کیت آماده سازی نمونه DNA باقیمانده مغناطیسی، فروشنده: Yeasen، Cat No.: 18461ES60.
2.3 استانداردهای حساسیت مایکوپلاسما از Minerva Biolabs (MB) خریداری شده است که سویه های آن از مجموعه ملی انواع کشت ها (NCTC) می باشد. استانداردهای حساسیت مایکوپلاسمای غیرفعال هستند و برای تأیید روشی روش تقویت اسید نوکلئیک (روش qPCR/PCR) برای تشخیص مایکوپلاسما استفاده می‌شوند. در مجموع 10 نوع مایکوپلاسما خریداری شده است که شامل الزامات EP 2.6.7 و JP G3 است. اطلاعات استانداردها به شرح زیر است:
| فروشنده | گربه شماره | شماره NCTC | ATCC خیر | نام مواد |
| Minerva Biolabs (MB) | 102-1003 | 10129 | 23838 | 10CFU™ استاندارد حساسیت مایکوپلاسما آرژنینی |
| 102-2003 | 10112 | 23714 | 10CFU™ استاندارد حساسیت مایکوپلاسما اورال | |
| 102-3003 | 10115 | 19610 | 10CFU™ استاندارد حساسیت مایکوپلاسما گالی سپتیکوم | |
| 102-4003 | 10119 | 15531 | 10CFU™ استاندارد حساسیت مایکوپلاسما پنومونیه | |
| 102-5003 | 10124 | 25204 | 10CFU™ استاندارد حساسیت مایکوپلاسما سینوویا | |
| 102-6003 | 10117 | 19989 | 10CFU™ استاندارد حساسیت مایکوپلاسما فرمنتانس | |
| 102-7003 | 10130 | 17981 | 10CFU™ استاندارد حساسیت مایکوپلاسما هیورینیس | |
| 102-8003 | 10116 | 23206 | 10CFU™ استاندارد حساسیت Acholeplasma laidlawii | |
| 102-9003 | 10164 | 27556 | 10CFU™ استاندارد حساسیت اسپیروپلاسما سیتری | |
| 102-11003 | 10113 | 23064 | 10CFU™ استاندارد حساسیت مایکوپلاسما بزاق |
2.4 داده های اصلی: نسخه الکترونیکی در "گزارش تجربی" ثبت شد فایل فرعی فایل والد 'MycAwayTM کیت تشخیص qPCR بلادرنگ مایکوپلاسما (2G).
2.5 روش ها: مواد و روش های عملیاتی مورد استفاده برای آزمایش اساساً توسط شرکت Yeasen Biotechnology (Shanghai) تولید یا تنظیم شده است که برای مدت طولانی ارزیابی و تأیید شده است، توسعه و ساخت کیت از سیستم ISO 13485 پیروی می کند.
- محتویات و نتایج صلاحیت
3.1 حد تشخیص (LOD)
استخراج اسید نوکلئیک و همچنین تشخیص سویه استاندارد 10 CFU/mL مایکوپلاسما طبق دستورالعمل سویه استاندارد و همچنین دستورالعمل کیت استخراج و تشخیص انجام شد. در مجموع 24 سنجش برای سویه استاندارد 10 CFU/mL مایکوپلاسما به دست آمد. نمونه های NCS (نمونه کنترل منفی) و NTC (بدون کنترل الگو) به طور همزمان در هر آزمایش مورد آزمایش قرار گرفتند.
نتایج نشان داد که نتایج NCS و NTC رضایت‌بخش بود، و همه 24 نمونه CFU/mL 10 مثبت بودند و نیاز به داشتن حداقل 23 نتیجه مثبت از 24 آزمایش را برآورده کردند.
| خیر | نام مواد | غلظت مایع باکتریایی |
| 1 | مایکوپلاسما آرژنینی | 10 CFU/ml |
| 2 | مایکوپلاسما اورال | 10 CFU/ml |
| 3 | مایکوپلاسما گالی سپتیکوم | 10 CFU/ml |
| 4 | مایکوپلاسما پنومونیه | 10 CFU/ml |
| 5 | مایکوپلاسما سینوویا | 10 CFU/ml |
| 6 | مایکوپلاسما فرمنتانس | 10 CFU/ml |
| 7 | مایکوپلاسما هیورینیس | 10 CFU/ml |
| 8 | آکوله پلاسما laidlawii | 10 CFU/ml |
| 9 | اسپیروپلاسما سیتری | 10 CFU/ml |
| 10 | مایکوپلاسما بزاق | 10 CFU/ml |
جدول 1 اطلاعات در مورد سویه های معتبر
| 10 CFU/ml | آزمایش 1 | آزمایش 2 | آزمایش 3 |
| نرخ تشخیص | 8/8 | 8/8 | 8/8 |
| مجموع | 24/24 | ||
جدول 2 نتایج حد تشخیص
3.2 ویژگی
3.2.1 محدوده آزمایش مایکوپلاسما
توالی های پروب پرایمر در کیت با ژنوم 16S rRNA در پایگاه داده مقایسه شد. از طریق تجزیه و تحلیل بیوانفورماتیک، به دست آمد که MycAwayTM کیت تشخیص مایکوپلاسما qPCR (روش پروب) از NextSense Biologicals می تواند حداقل 183 گونه از Zooxanthellae شامل 120 مایکوپلاسما، 9 اورهاپلاسما، 33 اسپیروپلاسما و 7 کلسترانگیلا و غیره را پوشش دهد.
3.2.2 تداخل ماتریس نمونه
9 زیرلایه (Dulbecco's MEM، Ham's F-10 Medium، M-199 Medium، Ham's F-12K Kaign's، RPMI-1640 Medium، McCoy's 5A، Ham's F-12K Kaign's+1.0mM/L Glutamine +1.0mM/L Glutamine M15ZLE, LTA-VIT.05 میلی‌مولار ال-گلوتامین، محیط استاندارد DMEM-گلوکز پایین) به عنوان نمونه برای تأیید تداخل ماتریس نمونه استفاده می‌شود، نتایج نشان داد که محیط هیچ تداخلی با معرف‌های کیت ندارد.
3.2.3 محدوده تشخیص فلکسی باکتری
استخراج و تشخیص مایکوپلاسمای غیرفعال (Mycoplasma arginini، Mycoplasma orale، Mycoplasma gallisepticum، Mycoplasma Pneumoniae، Mycoplasma Synoviae، Mycoplasma Fermentans، Mycoplasma hyorhinis، Acholeplasma laidlawii، SpiroplasmaL0Cinovia) به همراه تست نمونه NCS و NTC مورد نیاز است.
نتایج نشان داد که NCS و NTC شناسایی نشدند و نتایج منفی بود. همه 10 گونه مایکوپلاسما شناسایی و نتایج مثبت بود.
3.2.4 واکنش متقاطع
برای 14 سویه غیر منعطف از جمله کلستریدیوم (Clostridium perfringens، Clostridium acetobutylicum)، لاکتوباسیلوس (لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس)، استرپتوکوک (Streptococcus mutans، Streptococcus pneumoniae)، تعدادی دیگر از میکروارگ‌های باکتریایی رایج (استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس، اسینتوباکتر بومانی، انتروباکتر آئروژنز، میکروکوکوس گارسینیا، سودوموناس آئروژینوزا، سودومونال باکتریوم لکوسفالا، سالمونلا انتریکا انتریتیدیس زیر گونه انتریکا، باسیلوس سابتلیس، باسیلوس، باسیلوس و باسیلوس سابسیلوس. باسیلوس سرئوس) و شش سلول مهندسی شده (HEK293، 293T، Vero، CHO، E.coli، SF9) برای تشخیص مایکوپلاسما با استفاده از MolPure استفاده شد.TM روش مهره مغناطیسی برای کیت پیش پردازش نمونه DNA باقیمانده (بطری ها) و MycAwayTM کیت تشخیص مایکوپلاسما qPCR (روش پروب) (2G)، و هر آزمایش به طور همزمان با آزمایش نمونه PCS، NCS و NTC انجام شد.
نتایج نشان داد که نتایج PCS، NCS و NTC رضایت‌بخش بودند. نمونه های آزمایش منفی بود و هیچ واکنش متقابلی رخ نداد.
3.3 استحکام
3.3.1 پایداری انجماد و ذوب
کیت تست مایکوپلاسما تحت آزمایش‌های انجماد-ذوب در شرایط -25-~-15 درجه سانتیگراد قرار گرفت و نتایج نشان داد که کیت قادر است 20 بار انجماد و ذوب مکرر را تحمل کند و عملکرد آن تحت تأثیر قرار نگرفت.
3.3.2 پایداری تسریع شده
کیت تشخیص مایکوپلاسما به ترتیب در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 14 روز و در دمای 4 درجه سانتیگراد به مدت 30 روز شتاب حرارتی داده شد و نتایج نشان داد که عملکرد محصول تحت تأثیر قرار نگرفت.
3.3.3 قابلیت کاربرد ابزار
برای کیت تشخیص مایکوپلاسما، غلظت‌های مختلف کنترل مثبت و DNA مایکوپلاسما پنومونیه در کیت به‌عنوان نمونه برای آزمایش استفاده شد و آزمایش‌ها بر روی چهار برند و مدل مختلف به‌ترتیب Thermo Scientific ABI7500، Thermo Scientific ABI Q5، Shanghai Hongshi SLAN-980S، و Roche انجام شد.آزمایش‌ها بر روی ابزار qPCR چهار برند و مدل مختلف، Shanghai Hongshi SLAN-96S و Roche LightCycler®480 انجام شد.
نتایج نشان داد که نمونه‌های مورد آزمایش بر روی ابزارهای qPCR مدل‌های سازنده مختلف شناسایی شدند و نتایج کنترل منفی واجد شرایط بودند و عملکرد کیت تحت تأثیر قرار نگرفت.
- 4.مرجع
4.1 روش معاینه مایکوپلاسما <3301>. فارماکوپه چینی، بخش سوم [S]. پکن: انتشارات علم و فناوری چین، 2020: 542-543.
4.2 دستورالعمل برای اعتبار سنجی روش های تحلیلی <9101>. فارماکوپه چینی، بخش سوم [S]. پکن: انتشارات علم و فناوری چین، 2020: 682.
4.3 دستورالعمل برای اعتبار سنجی روش های جایگزین برای آزمایش میکروبیولوژیکی داروها <9201>. فارماکوپه چینی، بخش سوم [S]. پکن: انتشارات علم و فناوری چین، 2020: 684.
4.4 مایکوپلاسما. فارماکوپه اروپایی [S]. نسخه 10، 2020: بخش 2.6.7، 194-199.
4.5 آزمایش مایکوپلاسما برای بسترهای سلولی مورد استفاده برای تولید محصولات بیوتکنولوژیک/بیولوژیکی <G3-14-170>. فارماکوپه ژاپنی [S]. چاپ هجدهم، 2021: 2678-2682.
4.6 Erica J. Fratz-Berilla, Phillip Angart, Ryan J.Graham, et al. تأثیرات بر ویژگی‌های کیفیت محصول آنتی‌بادی‌های مونوکلونال تولید شده در کشت‌های بیوراکتور سلولی CHO در طول رویدادهای آلودگی عمدی مایکوپلاسما. بیوتکنولوژی و مهندسی زیستی. 2020؛ 117 (9): 2802-2815.
4.7 دیمیتری وی. ولوخوف، لوری جی گراهام، کرت بروسون، ولادیمیر ای چیژیکوف. آزمایش مایکوپلاسما از بسترهای سلولی و بیولوژیک: بررسی تکنیک های غیر میکروبیولوژیکی جایگزین. پروب های سلولی مول. 2011 آوریل و ژوئن؛ 25 (2-3): 69-77.
4.8 AL Ingebritson، CP Gibbs، C. Tong، GB Srinivas. یک روش تشخیص PCR برای آزمایش آلودگی مایکوپلاسما در واکسن‌های دامپزشکی و محصولات بیولوژیکی Lett در میکروبیولوژی کاربردی. 2015 فوریه؛ 60 (2): 174-180.
اطلاعات سفارش
| توضیحات | شماره قطعه |
| 18461ES | |
| کیت تشخیص مایکوپلاسما qPCR MycAway™ (2G) | 40619ES |