نمای کلی

DNA باقیمانده سلول میزبان یک ناخالصی مرتبط با فرآیند است که در تولید بیولوژیک نقش دارد، که نه تنها اثربخشی بیولوژیک ها را کاهش می دهد، بلکه ممکن است نگرانی های ایمنی مانند عفونی بودن یا تومورزایی را ایجاد کند. بنابراین، سازمان‌های نظارتی در کشورهای مختلف محدودیت‌هایی را برای مقدار DNA باقی‌مانده در بیولوژیک اعمال کرده‌اند.

دستورالعمل‌های کنونی WHO و FDA، DNA باقی‌مانده را در محصولات نهایی با حداکثر 10 نانوگرم در دوز توصیه می‌کنند، و FDA همچنین بیان می‌کند که DNA باقی‌مانده در DNA سلول میزبان بیولوژیک‌ها نباید بیشتر از 100 pg/دوز باشد. اصول کلی فارماکوپه اروپایی تصریح می کند که اکثر محدودیت های DNA باقیمانده محصولات بیولوژیکی نباید بیش از 10 نانوگرم در دوز باشد، اما محدودیت DNA باقیمانده واکسن های فردی دقیق تر است، به عنوان مثال، DNA باقی مانده در واکسن غیرفعال شده در برابر هپاتیت A نباید بیشتر از DNA باشد. واکسن علیه هپاتیت B نباید بیش از 10 pg/دوز باشد. نسخه 2020 فارماکوپه چینی، قسمت III، تصریح می کند که باقیمانده DNA در آماده سازی های بیولوژیکی تولید شده بر روی یک ماتریکس سلولی نباید از 100 pg/دوز تجاوز کند، و باقی مانده DNA در واکسن های تولید شده بر روی ماتریکس باکتریایی یا قارچی نباید از 10 نانوگرم در دوز تجاوز کند.

علاوه بر این، برای روش‌های تعیین باقیمانده DNA اگزوژن، فارماکوپه‌های ملی نیز توصیه‌های راهنمایی ارائه می‌دهند. نسخه 2017 USP40-NF35 Provision عمومی 1130 فارماکوپه ایالات متحده 3 روش را برای تعیین باقیمانده های DNA اگزوژن توصیف می کند که عبارتند از هیبریداسیون پروب DNA، روش آستانه و روش کمی PCR در زمان واقعی. فارماکوپه اروپایی روشهای PCR کمی و ایمونوآنزیمی را در زمان واقعی پیشنهاد می کند که 2 روش تحلیلی حساس برای تعیین کمیت DNA باقیمانده در سلولهای میزبان هستند. نسخه چینی فارماکوپه 2020 از سه قانون کلی 3407 همچنین تصریح می کند که روش های تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان عبارتند از هیبریداسیون پروب DNA، رنگ آمیزی فلورسانس و PCR کمی.

در میان آنها، روش qPCR دارای حساسیت، ویژگی توالی و دقت بسیار بالایی است که می تواند ابزار تشخیص قابل اعتمادی برای صنعت بیوداروسازی در تحقیقات فرآیند و کنترل کیفیت محصولات نهایی ارائه دهد و اکنون به روش تشخیص ترجیحی برای هر تولید کننده محصول بیولوژیکی تبدیل شده است.

بیوتکنولوژی Yeasen کیت های تشخیص DNA باقیمانده

بر اساس اصل پروب فلورسنت qPCR، Yeasen مجموعه ای از کیت های سریع و تخصصی تشخیص DNA باقیمانده سلول میزبان، از جمله CHO، HEK293، E.coli، Vero، Human، MDCK، Hansenula polymorpha، Pichia pastoris و غیره را توسعه داده است. این کیت ها تشخیص تخصصی و سریع بقایای DNA در محصولات میانی، نیمه تمام و نهایی را در طول توسعه و تولید مواد بیولوژیکی مانند داروهای آنتی بادی، محصولات سلولی و ژن درمانی، داروهای پروتئین نوترکیب و واکسن ها فراهم می کنند.

ویژگی

حساسیت بالا: بر اساس روش پروب فلورسنت qPCR با LLOD کمتر از 0 توسعه یافته است.05fg/μL;

دقت بالا: بازیابی اسپکینگ نمونه در محدوده 70% تا 130%؛

ویژگی بالا: عدم واکنش متقابل با DNA نامربوط، کاهش مثبت کاذب در تشخیص.

رعایت مقررات: به طور کامل مطابق با Chp، USP، ICHQ2 (R1) و سایر الزامات، عملکرد مطابق با استانداردهای نظارتی چینی و خارجی تایید شده است.

همکاری با حسابرسی: تولید محصول مطابق با استانداردهای سیستم کیفیت ISO13485، با اسناد ممیزی کامل است.

تضمین کیفیت: مواد خام کیت ها همه به طور مستقل توسعه یافته اند و مخلوط qPCR و سایر محصولات آنزیمی در یک کارخانه آنزیم بسیار تمیز تولید می شوند.

برنامه

تشخیص ناخالصی باقیمانده سلول آنتی بادی DrugsHost
تشخیص ناخالصی باقیمانده سلول میزبان واکسن
داروهای پروتئین نوترکیب تشخیص ناخالصی باقیمانده سلول میزبان

داروهای ژن درمانی تشخیص ناخالصی باقیمانده سلول میزبان

مشخصات

برنامه تست و اعتبار سنجی		استانداردها یا الزامات مرجع	ناوته
1. استانداردهای کیت (استانداردهای مرجع)		مقایسه با استانداردهای ملی یا استانداردهای تهیه شده
2. Lنزدیک آرعصبانیت	محدوده منحنی استاندارد	به وضعیت دستی یا واقعی مراجعه کنید (به عنوان مثال 30fg/μL~300pg/μL）
	آر²	≥0.98 (Kits PsYeasen≥0.99）	الزامات HCD در فارماکوپه چینی 2020 نسخه 3407 مقررات عمومی
	شیب	-3.1~-3.8 (Kits PsYeasen -3.1~-3.6）	الزامات HCD در فارماکوپه چینی 2020 نسخه 3407 مقررات عمومی
	راندمان تقویت	90٪ ~ 110٪ ((Ps شیب متناظر -3.1~-3.6، الزامات در صنعت)
3. الفدقت	انحراف از DNA استاندارد ملی	＜15%
3. الفدقت	نرخ بازیابی spiking نمونه	50٪ ~ 150٪ (الزامات در صنعت 70 تا 130 درصد)	الزامات HCD در فارماکوپه چینی 2020 نسخه 3407 مقررات عمومی
4. پاصلاح	قابل تکرار	رزومه 15%
4. پاصلاح	دقت متوسط	رزومه 15%
5. اسزیبایی		عدم تداخل با DNA اگزوژن
6. Lتقلید از کمیت		سطح fg/μL
7. اسجدول	انجماد و ذوب مکرر	10 بارها
	پایداری شتاب	2 ~ 8 ℃ 30 روز، 37 ℃ 14 روز
	مدت اعتبار	نگهداری -20 درجه سانتیگراد به مدت 2 سال

ارقام

حساسیت بالا: LLOQ کمتر از 0.3 fg/µL، LLOD کمتر از 0.05 fg/µL.

1. محدوده خطی کیت تشخیص DNA باقیمانده سلول میزبان CHO (3G) 3fg/μL~300pg/μL، R بود.²= 1، راندمان تقویت 99.29٪ بود و CV ارزش تشخیص هر غلظت <15٪ بود.

شکل 1. نمودار کالیبراسیون CHO DNA (3G) (سمت چپ) و نگاشت خطی منحنی تقویت (راست)

2. CHO DNA (3G) را در پایین‌ترین نقطه غلظت آهنگ استاندارد شده در 3fg/uL و غلظت‌های کمتر، 10 تکرار در هر غلظت شناسایی کنید. نتایج نشان داد که در غلظت‌های 0.3 fg/uL و بالاتر، CV <20٪ بود، به‌عنوان مثال، حد کمی‌سازی کیت سنجش DNA سلول میزبان CHO (3G) 0.3 fg/uL بود.

3. DNA CHO (3G) را در غلظت 0.3 fg/μL و کمتر در حد کمیت (LOQ) 20 تکرار در هر غلظت تشخیص دهید. نتایج نشان داد که نرخ تشخیص 20 چاه تکراری در غلظت‌های 0.05fg/μL و بالاتر ≥19 بود (یعنی نرخ تشخیص ≥95%)، یعنی حد تشخیص کیت تشخیص باقی‌مانده DNA سلول میزبان CHO (3G) می‌تواند به 0.05fg/μL برسد.

شکل 3. نتایج سنجش qPCR 0.05fg/μL CHO DNA (3G)

ویژگی بالا: عدم واکنش متقابل با سایر DNA سلول میزبان.

ارزیابی تداخل DNA ژنومی گونه‌های موش با میل ترکیبی بالا به DNA CHO (3G) و همچنین DNA ژنومی سلول‌هایی که معمولاً در تولید بیولوژیک به معرف تشخیص DNA CHO استفاده می‌شوند، منحنی‌های تکثیر گروه تداخل و گروه کنترل همپوشانی داشتند و هیچ تداخلی مشاهده نشد (نمودارهای زیر تداخل داده‌های E29،3، استفاده را نشان می‌دهند. DNA ژنومی به معرف تشخیص DNA CHO).

شکل 4.نتایج آزمایش‌های تداخل با کیت CHO DNA (3G).

اطلاعات محصول

دسته بندی	شماره مورد	نام محصول	مشخصات
نمونه پیش درمان	18461ES	کیت آماده سازی نمونه DNA باقیمانده مغناطیسی MolPure®	25T/100T
نمونه پیش درمان	18467ES	کیت آماده سازی نمونه MolPure® Mag48 FN	3×16T/6×16T
ابزار استخراج اسید نوکلئیک	80511ES	استخراج کننده اسید نوکلئیک خودکار 48 کانالی	48 شار
تشخیص DNA باقیمانده	41307ES	کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان Vero (2G)	50T/100T
	41308ES	کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان E.coli (2G)	50T/100T
	41310ES	کیت تشخیص DNA باقی مانده SV40LTA&E1A	50T/100T
	41317ES	کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان Hansenula polymorpha	50T/100T
	41319ES	کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان MDCK	50T/100T
	41323ES	کیت تشخیص باقیمانده DNA پلاسمید	50T/100T
	41324ES	کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان S. cerevisiae	50T/100T
	41325ES	کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان انسان	50T/100T
	41328ES	کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان Pichia pastoris	50T/100T
	41330ES	کیت تشخیص باقیمانده DNA Sf9 و Baculovirus	50T/100T
	41331ES	کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان HEK293 (3G)	50T/100T
	41332ES	کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان CHO (3G)	50T/100T

مقاله قبلی مقاله بعدی