هنگام استفاده از آنزیم های سنتی با کیفیت بالا برای PCR، اجتناب ناپذیر است که با برخی مسائل خاردار مواجه شوید. به عنوان مثال، وفاداری ممکن است کافی نباشد و حتی پس از تعیین توالی قطعات تقویت شده، منجر به جهش یا حذف در پایه های هدف شود. زمان تقویت نیز نسبتا طولانی است. گاهی اوقات، تقویت یک قطعه 5 کیلوبایتی می تواند نزدیک به 2 ساعت طول بکشد. اکنون، XiaoYi یک PCR سریع و با وفاداری بالا را برای حل مشکلات شما معرفی می کند! -- Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (PCR Premix فوق العاده سریع با کیفیت بالا).
را 2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (با رنگ) حاوی یک نشانگر الکتروفورز از پیش اضافه شده است که به محصولات PCR اجازه می دهد مستقیماً برای الکتروفورز استفاده شوند. محصولات تقویت شده دارای انتهای صاف هستند. این ترکیب آنزیمی با وفاداری بالا مزایای سریع، ساده، بسیار حساس، بسیار خاص و پایدار را ارائه می دهد. در سیستم واکنش فقط باید پرایمرها و قالب ها اضافه شوند. علاوه بر این، محصول همچنین حاوی یک محافظ خاص است که تضمین می کند که پیش مخلوط PCR با وفاداری بالا حتی پس از انجماد و ذوب مکرر فعالیت پایداری را حفظ می کند.
ویژگی های محصول
- بالا وفاداری: کم عدم تطابق نرخ، با الف پایه عدم تطابق نسبت از 231/300000 در بالا GC مستعد جهش دنباله ها
- سریع تقویت سرعت: پسوند نرخ به عنوان سریع به عنوان 5 ثانیه در هر kb
- عریض قابلیت کاربرد: توانا از پوشش دادن ژن ها با 20-80٪ GC محتوا، تحمل می کند موش لیزات و 20% خون؛
- خوب ثبات: می تواند باشد ذخیره شده است در 37 درجه سانتی گراد برای 7 روز بدون تاثیر گذار محصول عملکرد؛
- سریع و راحت: به سادگی اضافه کردن آغازگرها و قالب برای تقویت، می آید با در حال بارگذاری رنگ برای مستقیم الکتروفورز
نمایش عملکرد محصول
وفاداری بالا، میزان عدم تطابق پایین
با استفاده از ژنوم گونه های مختلف به عنوان الگو، شش قطعه غنی از GC که به شدت مستعد جهش/از دست دادن پایه هستند برای تکثیر انتخاب شدند. محصولات PCR مربوطه در وکتورها کلون شدند و 100 کلون منفرد برای هر توالی برای تعیین توالی انتخاب شدند تا عدم تطابق / جهش پایه را تأیید کنند. نتایج نشان داد که ترکیب اصلی PCR سریع با وفاداری بالا (10164ES) نسبت به معرف‌های برند داخلی و بین‌المللی دارای نرخ بالاتری از عدم تطابق/جهش پایه بود.
زمان تمدید می تواند تا 5 ثانیه برسد/kb
با استفاده از پیش مخلوط آنزیمی سریع و با وفاداری بالا (10164ES) و محصول T، قطعات طولی مختلف (0.4-10 کیلوبایت) از 100 نانوگرم الگوی DNA ژنومی انسانی با سرعت گسترش 5 ثانیه بر کیلوبایت، با زمان گسترش مورد نیاز 5 ثانیه بر کیلوبایت تکثیر شدند. نتایج نشان داد که پیش مخلوط آنزیمی سریع با وفاداری بالا (10164ES) می‌تواند قطعات را در 10 کیلوبایت با نرخ گسترش 5 ثانیه بر کیلوبایت تقویت کند.
می تواند قطعات ژنی با محتوای GC متفاوت را تقویت کند
استفاده از پیش مخلوط آنزیمی سریع و با وفاداری بالا (10164ES) برای تکثیر قطعات ژنی با محتوای GC 23-76٪ از الگوهای DNA ژنومی انسان، با زمان گسترش تنظیم شده در 5 ثانیه بر کیلوبایت. نتایج نشان داد که محصول دارای ویژگی تقویت خوبی بوده و قادر به تقویت قطعات با محتوای GC مختلف است.
قادر به تکثیر قطعات ژنی با محتوای GC متفاوت است
استفاده از پیش مخلوط آنزیمی سریع با وفاداری بالا (10164ES) برای تکثیر قطعات با طول های مختلف از نمونه های مختلف، با زمان افزایش 5-10 ثانیه در هر کیلوباز. نتایج نشان می دهد که این محصول ویژگی تقویت عالی را نشان می دهد و با تقویت قطعات مختلف از قالب های مختلف سازگار است.
توجه: 1. DNA ژنومی موش 1 کیلوبایت; 2. DNA ژنومی موش 2 کیلوبایت; 3. DNA ژنومی موش 6 کیلوبایت; 4. DNA ژنومی ذرت 1 کیلوبایت; 5. DNA ژنومی برنج 2 kb-A; 6. DNA ژنومی برنج 2 kb-B; 7. cDNA سلول 293 انسان 1 kb; 8. cDNA سلول 293 انسان 2 kb; 9. cDNA سلول 293 انسان 3 kb; 10. cDNA سلول 293 انسان 12 kb; 11. E. coli براث 8 kb; 12. E. coli broth 16 kb; 13. DNA ژنومی برنج 10 kb-A; 14. DNA ژنومی برنج 10 kb-B; 15. DNA ژنومی برنج 10 kb-C; 16. DNA ژنومی برنج 20 kb-A; 17. DNA ژنومی برنج 20 kb-B; 18. تقویت مستقیم خون انسان 3 کیلوبایت.
نرخ تشخیص بالا تقویت الگو در گونه های مختلف
با استفاده از پیش مخلوط آنزیمی سریع با وفاداری بالا (10164ES)، قطعات مختلف محتوای GC در محدوده 0.5-10 کیلوبایت در آرابیدوپسیس، کلزا و سیب زمینی با زمان گسترش 5 ثانیه بر کیلوبایت تکثیر شدند. نتایج نشان داد که پیش مخلوط آنزیمی با وفاداری بالا (10164ES) می تواند تقویت موفقیت آمیز را تضمین کند.
با استفاده از پیش مخلوط آنزیمی سریع و با وفاداری بالا (10164ES)، توالی های تصادفی (به طور تصادفی انتخاب شده) از آرابیدوپسیس، کلزا، مگس میوه، Caenorhabditis elegans، و گورخرماهی، با اندازه قطعات در محدوده 0.5-10 کیلو بایت و پوشش 20-80٪ GC تکثیر شدند. زمان تمدید 5 ثانیه بر کیلوبایت تعیین شد. نتایج نشان داد که پیش مخلوط آنزیمی سریع و با وفاداری بالا (10164ES) نرخ تشخیص بالایی دارد.
ثبات خوب
با استفاده از پیش مخلوط آنزیمی با وفاداری بالا (10164ES) که با شتاب حرارتی به ترتیب در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 3 روز و 7 روز ذخیره شده است، برای تکثیر قطعات DNA 3 کیلوبایتی و 5 کیلوبایتی از 100 نانوگرم DNA ژنومی انسانی، با زمان افزایشی تنظیم شده در 5 ثانیه در کیلوبایت. نتایج نشان می دهد که محصول از ثبات خوبی برخوردار است.
بازخورد آزمایشی مشتری
حیوان gDNA-120bp-50%GC
ارزیابی مشتری: فرآیند PCR سریع است، باندها مناسب هستند و می توانند مستقیماً در الکتروفورز ژل آگارز بارگذاری شوند. باندهای برند N به سمت بالا بایاس می شوند که ممکن است به دلیل تأثیر بافر خودش باشد و از آنجایی که بافر بارگیری اضافه نشده است، این محصول می تواند جایگزین آنزیم با وفاداری بالا در پروتکل آزمایشی فعلی من شود.
گیاه cDNA-729bp-45.13% GC
ارزیابی مشتری: در مقایسه با برند T، باندهای شبیه سازی واضح تر و یکنواخت تر هستند و کل فرآیند PCR سریعتر است. هنگام اجرای ژل نیازی به افزودن رنگ اضافی نیست که بسیار راحت و صرفه جویی در زمان است.
میکروبی gDNA-1158، 1953bp-58.8٪، 52.9٪ GC
ارزیابی مشتری: در مقایسه با برند V، تأثیر آن قابل مقایسه است، اما شخصاً آن را حتی بهتر می‌دانم.
گیاه cDNA-2000bp-40%GC
ارزیابی مشتری: اثر بسیار خوب است و نوار واضح است.
راهنمای انتخاب PCR با دقت بالا
| موقعیت یابی محصول | نام محصول | گربه# |
| 5s/kb، وفاداری و سرعت را تضمین می کند (با رنگ) | 10164ES | |
| 5 ثانیه بر کیلوبایت، وفاداری و سرعت را تضمین می کند (بدون رنگ) | 2× Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix | 10163ES |
| 83×Taq، نرخ تشخیص بالا (با رنگ) | 2×Hieff Canace™ پلاس PCR Master Mix (با رنگ) | 10154ES |
| 83×Taq تک آنزیم + بافر جدا | 10153ES |