در سال های اخیر، توسعه و استفاده از فناوری mRNA همچنان توجه را به خود جلب کرده است. داروهای mRNA شامل تلقیح mRNA است که پروتئین های آنتی ژن را در بدن انسان کد می کند. آنها با استفاده از مواد ژنتیکی درون سلول های انسانی، پروتئین های آنتی ژن را بیان و سنتز می کنند. این فرآیند با هدف پیشگیری و درمان بیماری ها، سیستم ایمنی بدن را از طریق پروتئین های آنتی ژن تحریک و فعال می کند. داروهای mRNA مزایایی مانند ایمنی، کارایی و چرخه کوتاه دارند. آنها می توانند به طور همزمان ایمنی هومورال و سلولی را القا کنند و در موارد مختلف از جمله تومورها، بیماری های عفونی، بیماری های نادر، بیماری های قلبی عروقی و موارد دیگر استفاده شده اند.
کل فرآیند تولید داروی mRNA را می توان به طور کلی به چند مرحله تقسیم کرد:
تعیین و طراحی توالی - mRNA رونویسی در شرایط آزمایشگاهی - آماده سازی کپسولاسیون
را متعارف مراحل رونویسی mRNA در شرایط آزمایشگاهی (IVT) عبارتند از:
استخراج و خطی سازی DNA پلاسمید-خالص سازی DNA پلاسمید- رونویسی در شرایط آزمایشگاهی (پوشش رونویسی همزمان) - خالص سازی - محلول ذخیره mRNA
را یک گلدان فرآیند رونویسی in vitro mRNA (IVT) شامل موارد زیر است:
استخراج و خطی سازی DNA پلاسمید-رونویسی در شرایط آزمایشگاهی (پوشش رونویسی همزمان) - خالص سازی - محلول ذخیره mRNA
در حال حاضر، اکثر فرآیندهای موجود شامل یک مرحله خالص سازی برای DNA پلاسمید پس از برش آنزیمی قبل از مرحله IVT است. Yeasen Biotechlogy، بر اساس یک مرکز توسعه برنامه کاربردی mRNA بالغ، فرآیند "Onepot mRNA رونویسی" را توسعه داده است. در این فرآیند، DNA پلاسمید دایره ای پس از برش آنزیمی خالص نمی شود. در عوض، مستقیماً برای رونویسی در شرایط آزمایشگاهی استفاده می‌شود که منجر به یک محلول ذخیره mRNA با کیفیت بالا می‌شود. کل این فرآیند، در حالی که کیفیت محصول و فرآیند را تضمین می کند، مدت زمان فرآیند موجود را کوتاه می کند.
مزایای فرآیند:
- بهینه سازی فرآیند، کاهش مراحل IVT برای عملیات ساده تر.
- هزینه مواد کمتر، حذف نیاز به تصفیه پس از برش و بازرسی کیفیت.
- حفظ کیفیت و بازده mRNA
داده ها:
1. بازده و صداقت:
با استفاده از 1 میکروگرم از پلاسمیدهای خطی 2K، 4K و 9K، فرآیند onepot می تواند 150-200 میکروگرم mRNA تولید کند.
| طول | بازده | صداقت |
| 2K | 200 میکروگرم | 94.00 % |
| 4K | 185 میکروگرم | 92.20 % |
| 9K | 150 میکروگرم | 87.50 % |
آزمایش یکپارچگی با استفاده از الکتروفورز مویرگی (CE) برای ارزیابی یکپارچگی قطعات با طول‌های 2K، 4K و 9K انجام شد. یکپارچگی قطعات 2K و 4K بیش از 92٪ و یکپارچگی قطعات 9K بیش از 87٪ بود.
2. تشخیص کارایی درپوش mRNA
LC-MS برای ارزیابی راندمان دربندی توالی 2K استفاده شد، که راندمان دربندی 99.5٪ را نشان داد.
تصویر بالا: کروماتوگرام HPLC UV
تصویر پایین: طیف وزن مولکولی پیچیده
3. تشخیص کارایی پلی دنیلاسیون mRNA
از LC-MS برای تشخیص کارایی پلی آدنیلاسیون نمونه ها استفاده شد که نتایج به طور معمول توزیع شده بود.
تصویر بالا: کروماتوگرافی مایع کروماتوگرافی TIC
تصویر پایین: طیف وزن مولکولی پیچیده
4.بیان mRNA سنجش
انتقال سلول های 293T با محصولات mRNA سنتز شده با استفاده از هر دو متعارف فرآیند (پلاسمیدهای خطی شده سمت چپ wتطهیر) و فرآیند یک گلدانی (پلاسمیدهای راست، خطی شده بدون خالص سازی) هیچ تفاوتی در بیان پروتئین فلورسانس پس از 24 ساعت کشت نشان نداد.
اطلاعات سفارش