اسید نوکلئیک به عنوان پایه و اساس تمام تحقیقات زیست شناسی مولکولی عمل می کند. علاوه بر این، کیفیت اسید نوکلئیک استخراج‌شده نیز یکی از عوامل کلیدی تعیین‌کننده موفقیت یا شکست آزمایش‌های پایین دست است. هنگام توسعه معرف های استخراج اسید نوکلئیک، علاوه بر اجزای شیمیایی معمولی، برخی از اسیدهای نوکلئیک مولکولی کوچک یا آنزیم ها می توانند تا حد زیادی کارایی استخراج را بهبود بخشند یا تداخل مواد غیر هدف را حذف کنند و به اجزای مهم در استخراج اسید نوکلئیک تبدیل شوند.

در مورد مواد کمکی برای رسوب اسید نوکلئیک

RNA حامل

مفهوم و عملکرد RNA حامل

RNA حامل که در زبان چینی به عنوان کمک رسوب اسید نوکلئیک نیز شناخته می شود. در فرآیند استخراج اسید نوکلئیک، لوله های سانتریفیوژ مورد استفاده برای استخراج بیشتر از پلی پروپیلن ساخته شده اند. بر روی دیواره لوله الکتریسیته ساکن وجود دارد که اسیدهای نوکلئیک را جذب می کند. استفاده از RNA حامل در فرآیند استخراج و خالص‌سازی می‌تواند به اسیدهای نوکلئیک کمک کند تا اثر الکترواستاتیک را حذف کنند، اطمینان حاصل شود که اسیدهای نوکلئیک می‌توانند به خوبی بر روی ستون تصفیه جذب شوند، کارایی شستشو را بهبود می‌بخشند و بنابراین تا حد امکان به بازیابی اسیدهای نوکلئیک در نمونه دست می‌یابند.

انواع متداول RNA حامل

به عنوان یک ماده کمکی برای رسوب اسید نوکلئیک، RNA حامل انواع مختلفی دارد، مانند نمک پتاسیم PolyA، RNA کل E. coli، RNA مخمر کل، tRNA و غیره.

مشکلات رایج در استفاده از RNA حامل

آیا می توان RNA حامل را پس از قرار گرفتن در دمای اتاق برای مدتی استفاده کرد؟ آیا تخریب RNA حامل بر استفاده از آن تأثیر می گذارد؟ آیا RNA حامل بر آزمایشات پایین دست تأثیر می گذارد؟
RNA حامل در یک محافظ RNA حل می شود. RNA حامل مایع وقتی در دمای 37 درجه سانتیگراد یا دمای اتاق برای مدت کوتاهی (در عرض 7 روز) قرار می گیرد تأثیر کمی دارد. اساساً RNA حامل قطعه ای در محدوده 500 nt تا 1000 nt است. تخریب جزئی بر استفاده معمولی تأثیر نمی گذارد. برای کاربردهای پایین دستی مانند PCR کمی فلورسنت، RNA حامل هیچ تاثیری بر مقدار Ct ندارد. برای برنامه های پایین دستی مانند NGS، می توان آن را با توجه به نیازهای واقعی اضافه کرد.

معرفی محصول RNA حامل

RNA حامل Yeasen RNA است که از مخمر مشتق شده است. هیچ آنزیم DNase یا RNase باقیمانده وجود ندارد و محتوای باقیمانده پروتئین و DNA بسیار کم است. می توان از آن در آزمایش هایی مانند استخراج اسید نوکلئیک ویروسی و استخراج DNA ردیابی استفاده کرد. اسیدهای نوکلئیک استخراج شده را می توان در آزمایشات بعدی مانند RT-PCR و RT-qPCR استفاده کرد. این محصول در فرمولاسیون پودر مایع و لیوفیلیزه برای استفاده مستقیم راحت، حمل و نقل در فواصل طولانی و ذخیره سازی موجود است.

نام محصول	محصول شماره	مشخصات	شرایط نگهداری و ماندگاری
RNA حامل، 6μg/μL	19701ES	1 میلی لیتر / 5 میلی لیتر / 100 میلی لیتر	در دمای 25- تا 15- درجه سانتی گراد نگهداری می شود. ماندگاری 2 سال است.
پودر RNA حامل، 216 میکروگرم در لوله	19703ES	1 لوله / 100 لوله / 1000 لوله	در دمای اتاق نگهداری می شود. ماندگاری 2 سال است.
پودر RNA حامل، 310 میکروگرم در لوله	19704ES	1 لوله / 100 لوله / 1000 لوله	در دمای اتاق نگهداری می شود. ماندگاری 2 سال است.

محلول خطی آکریل آمید

مفهوم و عملکرد محلول آکریل آمید خطی

آکریل آمید خطی، با نام انگلیسی Linear Acrylamide (Linear Polyacrylamide، به اختصار LPA)، یک رسوب دهنده است که به رسوب اسیدهای نوکلئیک در طول فرآیند خالص سازی اسید نوکلئیک کمک می کند.

ویژگی های محلول آکریل آمید خطی

این یک ناقل خنثی و منشا غیر بیولوژیکی است. بنابراین، حاوی اسید نوکلئیک یا آلودگی نوکلئاز بالقوه نیست.

با قرائت های A260/A280 تداخلی نخواهد داشت و فعالیت های پلیمراز و اندونوکلئازهای محدود کننده را مهار نمی کند.

با سایر کاربردهای زیست شناسی مولکولی بعدی مانند PCR و هضم آنزیمی سازگار است.

می تواند به رسوب DNA و RNA در سطح پیکوگرام یا بالاتر (از جمله الیگو) کمک کند. طول قطعه قابل بازیافت بالای 20 نوکلئوتید است و هر دو اسید نوکلئیک تک رشته ای و دو رشته ای قابل استفاده هستند.

معرفی محصول

نام محصول	محصول شماره	مشخصات	شرایط نگهداری و ماندگاری
محلول خطی آکریل آمید (5 میلی گرم در میلی لیتر)	10408ES	1 میلی لیتر	ذخیره شده در 4 درجه سانتی گراد ماندگاری 3 است سال

آنزیم کمکی استخراج اسید نوکلئیک

RNase A

مفهوم و عملکرد RNase A

ریبونوکلئاز A (RNase A)، به عنوان اندوریبونوکلئاز، به طور خاص باقیمانده های سیتوزین (C) یا اوراسیل (U) را روی RNA تک رشته ای تجزیه می کند. رایج ترین کاربرد ریبونوکلئاز A (RNase A) حذف RNA در حین تهیه DNA پلاسمید یا DNA ژنومی است. علاوه بر این، این محصول می تواند در آزمایشات زیست شناسی مولکولی مانند سنجش حفاظت RNase و تجزیه و تحلیل توالی RNA نیز استفاده شود.

ویژگی های RNase A

RNase A از پانکراس گاوی مشتق شده است. هیچ آلودگی به دئوکسی ریبونوکلئاز اندو و اگزونوکلئاز وجود ندارد. می توان آن را به طور مستقیم و بدون پیش گرم کردن استفاده کرد و در محیط های با دمای بالا مقاوم است.

معرفی محصول

نام محصول	محصول شماره	مشخصات	شرایط نگهداری و ماندگاری
RNase A (100 میلی گرم بر میلی لیتر)	10406ES	1 میلی لیتر	در دمای 20- درجه سانتی گراد نگهداری می شود. ماندگاری 2 سال است.
RNase A (10 میلی گرم در میلی لیتر)	10405ES	1 میلی لیتر	در دمای اتاق نگهداری می شود.ماندگاری 1 است سال
ریبونوکلئاز A (RNase A)، از پانکراس گاو	10407ES	100 میلی گرم / 1 گرم	در دمای اتاق نگهداری می شود. ماندگاری 2 سال است.

دئوکسی ریبونوکلئاز I (DNase I)

1. مفهوم و عملکرد DNase I

دئوکسی ریبونوکلئاز I (DNase I)، اندونوکلئازی که در سلول ها و بافت های مختلف یافت می شود، پیوند فسفودی استر مجاور پیریمیدین ها را هدف قرار داده و می شکند و پلی نوکلئوتیدهایی با گروه فسفات در انتهای 5 و یک گروه هیدروکسیل در انتهای 3 تولید می کند. متوسط حداقل محصول هضم یک پلیمر تترا نوکلئوتیدی است. DNase می تواند اشکال مختلف DNA مانند DNA تک رشته ای، DNA دو رشته ای و حتی کروماتین را کاتالیز کند (که سرعت برش آن تحت تأثیر هیستون ها قرار دارد). در آزمایش‌های زیست‌شناسی مولکولی، اغلب برای حذف DNA از پروتئین‌ها یا وارد کردن شکاف‌هایی به DNA برای وارد کردن بازهای نشان‌دار در DNA استفاده می‌شود.

2. ویژگی های DNase I

محدوده کاری بهینه DNase I PH 7-8 است و فعالیت آن به Ca بستگی دارد²⁺ و می تواند توسط یون های فلزی دو ظرفیتی مانند Co فعال شود²⁺، منگنز²⁺، روی²⁺و غیره 5 میلی مولار کلسیم²⁺ می تواند آنزیم را از هیدرولیز شدن محافظت کند. در حضور Mg²⁺، این آنزیم می تواند به طور تصادفی هر محل را در هر رشته DNA شناسایی و برش دهد. در حالی که در حضور من²⁺، می تواند هر دو رشته DNA را به طور همزمان تشخیص دهد و تقریباً در یک مکان قطع کند.

3. معرفی محصول

نام محصول	محصول شماره	مشخصات	شرایط نگهداری و ماندگاری
دئوکسی ریبونوکلئاز I (DNase I) از پانکراس گاو	10607ES	15 KU/10×15KU	در دمای 20- درجه سانتی گراد نگهداری می شود. ماندگاری 2 سال است.
دئوکسی ریبونوکلئاز I (DNase I) از پانکراس گاو	10608ES	25 میلی گرم / 100 میلی گرم / 1 گرم	در دمای 20- درجه سانتی گراد نگهداری می شود. ماندگاری 2 سال است.

پروتئیناز K

1. مفهوم و عملکرد پروتئیناز K

پروتئیناز K (پروتئیناز K) یک پروتئاز سرین با طیف گسترده ای از فعالیت های برش است. وزن مولکولی نسبی آن حدود 29.3 کیلو دالتون است و می تواند پیوندهای پپتیدی کربوکسیل پایانی اسیدهای آمینه آلیفاتیک و اسیدهای آمینه آروماتیک را بشکند. پروتئیناز K طیف گسترده ای از کاربردها را دارد و می تواند در آزمایش هایی مانند تهیه DNA کروموزومی برای الکتروفورز ژل میدان پالسی، وسترن بلات و حذف نوکلئازها در آماده سازی DNA و RNA استفاده شود. عوامل دناتوره کننده مانند SDS (1%) می توانند فعالیت آن را افزایش دهند.

2. ویژگی های پروتئیناز K

از یک سویه مخمر نوترکیب ژنتیکی مشتق شده است.

بدون RNase و DNase.

فعال و پایدار در اوره و SDS.

فعال در محدوده وسیع pH (pH 4.0 - 12.0) و محدوده pH بهینه pH 7.5 - 9.0 است.

3.معرفی محصول

نام محصول	محصول شماره	مشخصات	شرایط نگهداری و ماندگاری
پروتئیناز K	10401ES	100 میلی گرم / 1 گرم / 5 گرم / 100 گرم	در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری می شود. ماندگاری 3 است سال
محلول پروتئیناز K (20 میلی گرم در میلی لیتر)	10412ES	1 میلی لیتر / 10 میلی لیتر / 25 میلی لیتر / 500 میلی لیتر	در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری می شود. ماندگاری 2 است سال
محلول پروتئیناز K (20 میلی گرم در میلی لیتر)	10410ES	1 میلی لیتر / 10 میلی لیتر / 25 میلی لیتر / 500 میلی لیتر	در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری می شود. ماندگاری 2 است سال

تثبیت کننده RNA

محلول تثبیت کننده RNA برای بافت های حیوانی و گیاهی

1. عملکرد محلول تثبیت کننده RNA برای بافت های حیوانی و گیاهی

RNase ها به طور گسترده در محیط وجود دارند و به احتمال زیاد RNA را در نمونه های تازه جمع آوری شده از بافت های حیوانی و گیاهی، خون، مایعات بدن و غیره تجزیه می کنند. تثبیت کننده بافت RNA ایمن برای بافت های حیوانی و گیاهی (RNAsafe Tissue Stabilizer) به طور ویژه برای تثبیت و محافظت از RNA در نمونه های جمع آوری شده ساخته شده است. به عنوان یک محلول غیر سمی، می تواند به سرعت به بافت ها نفوذ کند و RNase های درون زا را غیرفعال کند.

2. ویژگی های محلول تثبیت کننده RNA برای بافت های حیوانی و گیاهی

کار بسیار آسان: فقط بافت های تازه را به بلوک های بافتی با اندازه مناسب (≤0.5 سانتی متر) برش دهید و آنها را در 5 تا 10 برابر حجم RNAsafe غوطه ور کنید.

دوره تثبیت طولانی: بافت ها/سلول های نفوذ شده با RNAsafe را می توان در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 1 روز، در دمای اتاق به مدت 1 هفته، در دمای 4 درجه سانتی گراد به مدت 4 هفته و برای نگهداری طولانی مدت در دمای 20- درجه سانتی گراد / 80- درجه سانتی گراد نگهداری کرد.

سازگاری گسترده پایین دست: تقریباً با تمام روش‌های جداسازی RNA، مانند معرف استخراج RNA توتال HieffTM (شماره کاتالوگ: 10606ES60)، و تقریباً تمام کیت‌های استخراج RNA تجاری، از جمله روش استخراج ستون گریز از مرکز و روش خالص‌سازی مهره مغناطیسی، سازگار است.

کاربرد گسترده مواد: می توان از آن برای حفظ بافت های مختلف حیوانی و گیاهی (مانند مغز، قلب، کبد، پانکراس، کلیه، طحال، بیضه، ماهیچه، ساقه و برگ گیاهان و غیره) و همچنین برای مخمر، سلول های کشت بافت و غیره استفاده کرد.

3. معرفی محصول

نام محصول	محصول شماره	مشخصات	شرایط نگهداری و ماندگاری
تثبیت کننده بافت RNAsafe RNAsafe	10604ES60	100 میلی لیتر	در دمای اتاق نگهداری می شود. ماندگاری 5 سال

محصولات مرتبط

نام محصول	محصول شماره	مشخصات	شرایط نگهداری و ماندگاری
لیزوزیم	10402ES	5/50 g	در دمای 20- درجه سانتی گراد نگهداری می شود. ماندگاری 3 است سال
لیتیکاز (10 U/μL)	10403ES	1500/3000/10000 U	ذخیره شده در -20 درجه سانتی گراد
حلزون	10404ES	5/10 g	در دمای 8-2 درجه سانتی گراد نگهداری می شود. ماندگاری 2 است سال
RNAsafe-ICE	10605ES	100 میلی لیتر	در دمای اتاق نگهداری می شود. ماندگاری 2 سال

مقاله قبلی مقاله بعدی