ماهیت کمی سازی کتابخانه NGS کمی سازی اسید نوکلئیک (DNA یا RNA) است. تجزیه و تحلیل دقیق کمی سازی کتابخانه NGS برای به دست آوردن داده های توالی یابی با کیفیت بسیار مهم است. اگر غلظت کمی کتابخانه NGS زیاد باشد، بازده داده های توالی یابی ممکن است به دلیل خوشه بندی ناکافی کم باشد. با این حال، غلظت کمی پایین ممکن است باعث تداخل سیگنال بین خوشه ها برای تولید داده های با کیفیت پایین شود و حتی منجر به شکست توالی شود. علاوه بر این، با افزایش شار توالی یابی ترتیب دهنده ها، کتابخانه های متعدد NGS اغلب برای توالی یابی ترکیب می شوند. با توجه به الزامات اندازه داده های توالی، کتابخانه های NGS با مقادیر مولی متناظر بر اساس نتایج کمی مخلوط می شوند تا خروجی اندازه هر داده نمونه را تثبیت کنند. بنابراین، تعیین کمیت کتابخانه NGS کتابخانه ها بسیار مهم است.

در حال حاضر دو روش اصلی برای کمی سازی کتابخانه NGS وجود دارد، روش جذب اشعه ماوراء بنفش و روش رنگ فلورسنت. NanoDrop یک ابزار کمی سازی DNA است که بر اساس اصل جذب اشعه ماوراء بنفش طراحی شده است. کیوبیت یک ابزار کمی سازی DNA است که بر اساس اصل رنگ فلورسنت ساخته شده است. دقت کمی و هزینه این دو روش متفاوت است. روش کیوبیت عمدتاً در اینجا توصیه می شود. پس چرا کیوبیت را به شما توصیه می کنیم؟ محصولات کیوبیت عرضه شده توسط Yeasen چه ویژگی هایی دارند؟ لطفا به خواندن ادامه دهید...

1. چرا Qubit را به شما پیشنهاد می کنیم؟

2. محصولات کیوبیت عرضه شده توسط Yeasen چه ویژگی هایی دارند؟

• کیوبیت چگونه کار می کند؟
• محصول محبوب عرضه شده توسط Yeasen
• ویژگی های محصول

3. چگونه Qubit را برای نمونه های مختلف انتخاب کنیم؟

1. چرا Qubit را به شما پیشنهاد می کنیم؟

شکی نیست که کیوبیت بهتر از نانودراپ است. پس چرا کیوبیت بهتر از نانو قطره است؟ تفاوت کیوبیت و نانو قطره چیست؟ اول، همانطور که قبلا ذکر شد، آنها در اصل کمی سازی DNA متفاوت هستند، NanoDrop بر اساس جذب ماوراء بنفش طراحی شده است. اصل روش جذب فرابنفش این است که در اجزای اسید نوکلئیک بازهای پورینی و پیریمیدینی وجود دارد و این بازها دارای پیوندهای دوگانه مزدوج هستند. جذب نور قوی در 250-280 نانومتر در ناحیه UV وجود دارد و حداکثر مقدار جذب حدود 260 نانومتر است. بنابراین، جذب UV اسید نوکلئیک را می توان برای تعیین کمیت غلظت استفاده کرد. NanoDrop ساده و سریع عمل می کند، اما نمی تواند بین DNA، RNA، اسیدهای نوکلئیک تجزیه شده، نوکلئوتیدهای آزاد و سایر ناخالصی ها تمایز قائل شود. برای به دست آوردن داده های کمی کتابخانه ای دقیق مناسب نیست. اما، کمی سازی کیوبیت بهترین انتخاب برای کمی سازی دقیق کتابخانه NGS، به ویژه برای کمی سازی DNA است. بنابراین ویژگی های کمی سازی DNA کیوبیت چیست؟ لطفا جدول زیر را مشاهده کنید:

2. محصولات کیوبیت عرضه شده توسط Yeasen چه ویژگی هایی دارند؟

قبل از معرفی ویژگی های محصولات کیوبیت عرضه شده توسط Yeasen، بیایید نحوه عملکرد آن را درک کنیم.

2.1 کیوبیت چگونه کار می کند؟

اصل کیوبیت استفاده از رنگ های فلورسنت برای اتصال به مولکول های DNA برای انتشار فلورسانس و سپس اندازه گیری شدت فلورسانس برای به دست آوردن غلظت اسید نوکلئیک است. رنگ های فلورسنت تنها پس از اتصال به دو رشته DNA فلورسانس می شوند و فلورسانس حاصل با غلظت DNA متناسب است.

2.2 محصول محبوب عرضه شده توسط Yeasen

را کیت سنجش 1×dsDNA HS برای Qubit® (Cat#: 12642ES)، که بر اساس dsDNA HS Assay Kit برای کیت Qubit® (Cat#: 12640ES)، یک محلول آماده برای استفاده Qubit premix برای رقیق کردن رنگ های غلیظ در کیت اصلی به یک محلول کاری است. هنگام کار، فقط باید مایع کار را با نمونه مورد آزمایش مخلوط کنید تا غلظت نمونه توسط فلورومتر Qubit® تعیین شود، که استفاده راحت تر است.

2.3 ویژگی های محصول

کارکرد ساده و آسان: مایع پیش مخلوط آماده برای استفاده، بدون نیاز به تهیه مایع کار، عملیات ساده، صرفه جویی در زمان بیشتر.

شکل 1. فرآیندهای کیت سنجش dsDNA HS برای کیوبیت

حساسیت فوق العاده بالا: رقت شیب 64 برابر کمیت دقیق، 0.2-100 نانوگرم dsDNA رابطه خطی خوبی دارد.

ویژگی فوق العاده: dsDNA تشخیص خاص، دارای تحمل عالی به برخی از آلاینده های معمولی است.

سرعت اتصال سریع رنگ: اشباع را می توان در عرض 2 دقیقه به دست آورد، بنابراین نیازی به انتظار برای خواندن سریع نتایج کمی نیست.

پایداری بالا: سیگنال فلورسانس به مدت 3 ساعت به طول انجامید و دقت کمی بعد از 20 روز در دمای اتاق تحت تأثیر قرار نگرفت.

شکل 1. تست پایداری محصول. نتایج نشان می دهد که باقی می ماند پس از نگهداری در دمای اتاق به مدت 2 هفته پایدار است (انحراف بین مقدار اندازه گیری شده و مقدار نظری <10٪ بود.

توجه: دو غلظت dsDNA انتخاب شد، و Thermo#Q33230 در دمای 4 درجه سانتیگراد، Yeasen#12642 در دمای 4 درجه سانتیگراد و Yeasen#12642 ذخیره شده در دمای اتاق (حدود 25 درجه سانتیگراد) برای تعیین مقادیر غلظت در زمان‌های مختلف استفاده شد و نرخ انحراف به عنوان اولین اندازه گیری (0) محاسبه شد.

شکل 2. تست پایداری محصول. پایداری فوق العاده، ارتباط بالای نتایج آزمون در دوره اعتبار

3. چگونه Qubit را برای نمونه های مختلف انتخاب کنیم؟

کیوبیت، کمی سازی سریع! استفاده از کیوبیت برای کمی سازی کتابخانه مزایای زیادی دارد. فرآیند تشخیص آن سریع و موثر است.نتایج توالی‌یابی را می‌توان در عرض چند ثانیه برای یک نمونه به دست آورد و غلظت را می‌توان مستقیماً خروجی داد، که بسیار بصری است. در عین حال، می‌تواند با اکثر ابزار برچسب آنزیمی برای کمی‌سازی نمونه دسته‌ای سازگار باشد، که اولین انتخاب برای کمی‌سازی کتابخانه مرسوم و کمی‌سازی dsDNA است.