Ultra-nettoyant UCF.Me ™ Thermostable RNase H: Coupe précise pour des expériences plus efficaces!

Idéal pour élimination de l'ARNr et coiffage de l'ARNm détection d'efficacité !

La RNase H thermostable, avec sa résistance exceptionnelle à la chaleur, surpasse la RNase H ordinaire en termes de spécificité et d'efficacité !

Introduction à la RNase H

La ribonucléase H d'E. coli (E. coli RNase H) est une enzyme qui dégrade spécifiquement le composant ARN des brins hybrides ARN-ADN. Elle joue un rôle essentiel dans des processus tels que la réplication, la réparation et la transcription de l'ADN en clivant le brin d'ARN afin de maintenir l'intégrité et la stabilité de la matrice d'ADN. Cela la rend largement utilisée dans les expériences de biologie moléculaire, notamment la synthèse d'ADNc, l'élimination d'ARNr et les études d'interférence ARN. Cependant, la ribonucléase H d'E. coli présente certaines limites :

• Cela peut provoquer un clivage non spécifique de l’ARN ou de l’ADN simple brin, réduisant ainsi la précision des résultats expérimentaux.
• Sa faible stabilité thermique l'empêche de maintenir son activité à des températures élevées, ce qui le rend inadapté aux expériences telles que la transcription inverse à haute température ou la PCR qui nécessitent des températures élevées.

Ces lacunes ont poussé les chercheurs à développer la RNase H thermostable pour élargir ses applications et améliorer l’efficacité expérimentale.

Figure 1 : Mécanisme de la RNase H

RNase H thermostable de Thermus thermophilus

La RNase H thermostable, dérivée de Thermus thermophilus, est un homologue de la RNase H d'E. coli et partage des fonctions ribonucléases similaires. Elle identifie précisément et clive efficacement les liaisons phosphodiester du brin d'ARN dans les hybrides ARN:ADN tout en préservant l'intégrité du brin d'ADN. Une analyse structurale approfondie révèle que, bien que sa distribution de stabilité globale ressemble à celle de la RNase H d'E. coli, la RNase H de T. thermophilus présente des améliorations significatives de la stabilité globale et de la stabilité locale des résidus.

Avec une température d'activité optimale supérieure à 65 °C, la RNase H thermostable offre une spécificité et une efficacité accrues à des températures de réaction plus élevées, minimisant ainsi le clivage non spécifique. Cette propriété révèle son immense potentiel dans les expériences de biologie moléculaire, notamment :

• élimination de l'ARNr
• Détection du taux de coiffage de l'ARNm
• Élimination de l'ARNm poly(A) hybridé au poly(dT)
• Élimination de l'ARNm lors de la synthèse du deuxième brin d'ADNc
• Amélioration de l'efficacité de l'amplification dans les expériences de transcription inverse à haute température, d'amplification isotherme et de PCR

Figure 2 : Comparaison de la structure tridimensionnelle de la RNase H thermostable et de la RNase H d'E. coli ^[1]

UCF.ME™RNase H thermostable (Cat14545)

La RNase H thermostable est fréquemment utilisée dans les expériences de détection de pathogènes, telles que l'élimination de l'ARNr lors du séquençage métagénomique (mNGS) et du séquençage ciblé sur les pathogènes (tNGS). La présence d'acides nucléiques résiduels de l'hôte ou de bactéries de fond dans l'enzyme peut compromettre considérablement la précision de la détection. Pour y remédier, Yeasen Biographietechnologie présente UCF.ME™ RNase H thermostable (Cat14545), développée à l'aide de son propre UCF.ME™ Technologie de procédé ultra-propre. Produit à l'UCF.ME.™ Installation d'enzymes moléculaires ultra-propres, ce produit subit un contrôle qualité rigoureux, de la sélection des matériaux et de la gestion de l'environnement à l'optimisation et aux tests des processus, garantissant un minimum de résidus d'ADN bactérien et de nucléase.Cela garantit des résultats expérimentaux précis, fiables et reproductibles.

Avantages du produit :

• Activité élevée et excellente consistance d'un lot à l'autre
• Résidu d'ADN hôte extrêmement faible : < 0,02 copies/U
• Aucun résidu d'exonucléase, d'endonucléase ou d'ARNase
• Stabilité exceptionnelle : aucune perte significative d'activité enzymatique après 32 jours à 4 °C, 16 jours à 25 °C ou 7 jours à 37 °C

Présentation des performances de UCF.ME™ RNase H thermostable (Cat14545)

1. Activité élevée et cohérence des lots

Trois lots d'UCF.ME™ Des ARNases H thermostables ont été incubées avec des substrats ARN:ADN, et les variations de bande ont été analysées par électrophorèse sur gel d'agarose. Les résultats démontrent que seulement 0,05 U de cette enzyme clive efficacement l'ARN dans 20 pmol de substrats ARN:ADN, avec une excellente régularité d'un lot à l'autre, ce qui témoigne de sa stabilité et de sa fiabilité.

Figure 3 : Résultats de la détection d'activité de UCF.ME™ RNase H thermostable

Remarque : Conditions de réaction : 50 °C pendant 20 minutes ; substrat ARN : ADN – 20 pmol

2. Faible résidu d'ADNg de l'hôte : < 0,02 copies/U

Les tests de résidus d'ADNg de l'hôte (E. coli) sur plusieurs lots montrent que les trois lots d'UCF.ME™ La RNase H thermostable présente des niveaux de résidus bien inférieurs à 0,02 copie/U, garantissant une grande pureté et une fiabilité expérimentale.

Figure 4 : Résultats des résidus d'ADNg de l'hôte de UCF.ME™ RNase H thermostable

3. Aucun résidu d'exonucléase, d'endonucléase ou d'ARNase

25 U de UCF.ME ™ La RNase H thermostable a été incubée avec des substrats d'acide nucléique, et les variations de bande ont été évaluées par électrophorèse sur gel d'agarose. Aucun résidu d'exonucléase, d'endonucléase ou de RNase n'a été détecté dans les trois lots, ce qui garantit fortement l'exactitude et la fiabilité des résultats.

Figure 5 : Résultats de détection des résidus d'exonucléase, d'endonucléase et d'ARNase dans UCF.ME™ RNase H thermostable

4. Excellente stabilité

UCF.ME™ La RNase H thermostable a été soumise à des tests de stabilité : 32 jours à 4 °C, 16 jours à 25 °C et 7 jours à 37 °C. Les mesures d’activité enzymatique n’ont montré aucune baisse significative, prouvant son exceptionnelle stabilité sur une large plage de températures et son aptitude au stockage à long terme et à diverses conditions expérimentales.

Figure 6 : Résultats de stabilité accélérée de UCF.ME™ RNase H thermostable

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Source	Nom du produit	Chat Nou.
T. thermophilus	UCF.ME™ RNase H thermostable	14545ES
E.coli	RNase H	12906ES

Références

1. Hollien J, Marqusee S. Distribution structurale de la stabilité d'une enzyme thermophile [J]. Actes de l'Académie nationale des sciences, 1999, 96(24) : 13674-13678.

2. Wolf EJ, Dai N, Chan SH. Caractérisation sélective du coiffage de l'extrémité 5' de l'ARNm par enrichissement dirigé par sonde d'ADN avec des endoribonucléases spécifiques de site [J]. [2025-03-03].

3. Gu H, Sun YH, Li XZ. Nouvelles méthodes d'appauvrissement en ARNr pour le séquençage de l'ARN total et le profilage des ribosomes développées pour les espèces aviaires [J]. Poultry Science, 2021, 100(7) : 101321. DOI : 10.1016/j.psj.2021.101321.