Avec le développement rapide de pprotéine mLa technologie de purification des protéines joue un rôle de plus en plus important dans le domaine de la recherche biologique et de l'industrie biotechnologique. En tant que technique de base, elle implique l'intégration des informations de codage de la protéine cible dans les cellules hôtes par des méthodes de génie génétique, afin de les inciter à produire efficacement les protéines requises. Par la suite, une série d'étapes d'opérations in vitro sophistiquées sont réalisées pour obtenir une extraction de haute pureté des protéines. La purification des protéines permet aux scientifiques d'isoler des types uniques de protéines, ce qui est crucial pour des études approfondies sur la structure et la fonction des protéines, le développement de nouveaux médicaments, le diagnostic des maladies et la promotion de l'application de la biotechnologie. Cette technologie garantit non seulement la précision des expériences scientifiques, mais stimule également en permanence le développement des sciences de la vie.
Figure 1. Schéma de principe de la chromatographie d'affinité[1]
Dans le domaine de l'ingénierie des protéines, les étiquettes de fusion constituent un outil puissant, qui peut faciliter diverses expériences en se liant aux protéines cibles. Les fonctions des étiquettes de fusion courantes sont répertoriées dans le tableau ci-dessous pour référence. Cependant, une fois que ces étiquettes restent sur les protéines de fusion après avoir rempli leurs fonctions auxiliaires initiales, elles peuvent avoir des effets indésirables sur les expériences ultérieures, comme interférer avec les expériences immunologiques animales ou affecter l'activité biologique des protéines. Il est donc essentiel de supprimer ces étiquettes de fusion inutiles pour garantir le fonctionnement normal des protéines et la précision des expériences.
Tableau 1. Introduction aux fonctions des marqueurs de fusion courants et des méthodes de clivage enzymatique
| Balise de fusion | Taille (KDun) | Fonction | Méthodes courantes de clivage enzymatique |
| Son | 0,84 | Bénéfique pour la purification, capable de purifier les protéines solubles/du corps d'inclusion. | Protéase TEV |
| Drapeau | 1.01 | La protéine de but fusionnée avec Fdécalage l'étiquette peut être reconnue par l'anticorps contre Fdécalage, de sorte que la protéine de fusion contenant Fdécalage L'étiquette peut être détectée et identifiée par Western Blot, ELISA et d'autres méthodes. | Entérokinase |
| TPS | 26 | Améliore la solubilité des protéines, capable uniquement de purifier les protéines solubles et de protéger les protéines toxiques. | Thrombine |
| MBP | 44.4 | Améliorer la solubilité des protéines et protège les protéines toxiques. | Protéase TEV |
| NusA | 55 | Améliorer la solubilité des protéines et protège les protéines toxiques. | Thrombine |
| SUMO | 11.2 | Améliore la solubilité des protéines, favorise la protéolyse des protéines hydrolyse et améliore la stabilité des protéines. | Protéase SUMO |
Aujourd'hui, nous sommes ravis de vous présenter un produit de pointe pour l'élimination efficace et précise des étiquettes de fusion - UCF.MEMT Protéase rTEV. Grâce à sa procédure expérimentale simple et facile à mettre en œuvre, cette enzyme peut facilement cliver les marqueurs inutiles des protéines de fusion, obtenant ainsi des protéines cibles de haute pureté.
UCF.MEMT Protéase rTEV
La protéase TEV est une protéase largement utilisée pour le clivage des marqueurs de fusion de protéines recombinantes, connue pour sa spécificité de site élevée. Elle reconnaît strictement la séquence de sept acides aminés EXXYXQ↓(G/S) et effectue un clivage précis entre la glutamine et la glycine ou la sérine. La séquence de sept acides aminés la plus courante est Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly. Cette spécificité garantit la précision et l'efficacité de la procédure de traitement des protéines.
Figure 2. Schéma du mécanisme d'action de la protéase TEV[2]
UCF.MEMT La protéase rTEV est une protéase recombinante génétiquement modifiée et finement purifiée. Elle conserve non seulement toute l'activité fonctionnelle de l'enzyme TEV naturelle, mais présente également une excellente stabilité et spécificité sur une plage de températures plus large. Le résidu d'ADNg de l'hôte de tson produit est très faible, garantissant une efficacité de coupe plus élevée des étiquettes de fusion de protéines dans les applications pratiques et réduisant efficacement le risque d'introduction de résidus de substances exogènes. UCF.MEMT La protéase rTEV présente une activité optimale dans des conditions de pH 7,0 et 30°C. Cependant, elle maintient son activité même dans une large gamme de conditions avec un pH de 6,0 à 8,5 et une température de 4 à 30°C, pour répondre aux différentes exigences de traitement des protéines. Il convient de mentionner que UCF.MEMT La protéase rTEV possède une étiquette 6×His à son extrémité N-terminale, qui peut être efficacement éliminée par la résine Ni-NTA, permettant ainsi une purification précise de la protéine cible.
Affichage des performances
1. Efficacité de clivage élevée : l'étiquette protéique est clivée plus complètement
En utilisant la protéine de fusion (3 μg) contenant l'UCF.MEMT Site de clivage de la protéase rTEV comme substrat, UCF.MEMT La protéase rTEV a été ajoutée à 10, 5 et 3 U respectivement et la réaction a été réalisée à 30 °C pendant 1 h. L'effet de clivage a été détecté par électrophorèse sur gel d'agarose. Les résultats ont montré que YfaciliterUCF.ME deMT La protéase rTEV pouvait cliver le substrat efficacement lorsque la quantité d'entrée était supérieure à 3 U, avec une efficacité de clivage de > 90 %.
Figure 3. Vérification de l'activité de clivage de l'UCF.MEMT Protéase rTEV
2. Faible résidu d'ADNg de l'hôte : Réduit efficacement le risque d'introduction de résidus de substances exogènes
En testant l'hôte (Escherichia coli) Résidus d'ADN génomique dans différents lots d'UCF.MEMT Protéase rTEV, les résultats ont montré que le résidu d'ADNg de l'hôte de UCF.MEMT La protéase rTEV était bien inférieure à < 1 copie/U.
Figure 4. Résultats du résidu d'ADNg de l'hôte dans UCF.MEMT Protéase rTEV
3. Conditions d'application larges : capable de répondre à différentes exigences de traitement des protéines.
En vérifiant l'activité de clivage de UCF.MEMT Protéase rTEV dans différentes conditions, les résultats ont montré que UCF.MEMT La protéase rTEV avait une forte activité dans des conditions de 4 à 30 °C, ce qui pouvait répondre aux différentes exigences d'application des clients.
| Temps de réaction (h) | Activité de clivage sous différentes températures (%) | |||
| 4℃ | 16℃ | 21℃ | 30℃ | |
| 1 | 34 | 58 | 56 | 85 |
| 2 | 58 | 80 | 78 | 90 |
| 3 | 71 | 99 | 99 | 99 |
| 3.5 | 84 | 99 | 99 | 99 |
YfaciliterProduits de protéines de coupe à fusion recommandés par 's
| Produit Nom | Produit Nombre | |
| Véhicule électrique Protéase | UCF.MEMT Protéase rTEV | 20427ES |
| Entérokinase | Entérokinase recombinante | 20395ES |
| Protéase SUMO | Protéase SUMO | 20410ES |
| Protéase 3C | Protéase 3C | 20409ES |
Références :
[1] Parikh I , Cuatrecasas P .Chromatographie d'affinité[J].Vox Sanguinis, 1972, 23(1-2):141-146.DOI:10.1159/000466530.
[2] Paththamperuma C, Page R C. Essai de désactivation de la fluorescence pour l'activité de la protéase TEV[J]. Analytical biochemistry, 2022, 659 : 114954.