1. Matériau enzymatique de base - ADN polymérase Taq

Avec l'expansion des domaines de test d'application et l'augmentation de la demande du marché, l'ADN polymérase Taq de type sauvage ne peut plus répondre pleinement aux exigences. La plateforme de modification enzymatique ZymeEditor™ de Yeasen a modifié de manière complète et directionnelle l'ADN polymérase Taq pour répondre à divers besoins d'application, en lançant une série d'ADN polymérases Taq à démarrage à chaud adaptées aux applications pré-mélangées, résistantes aux inhibiteurs, ultra-propres et autres.

• Stabilité supérieure : Formulée dans une solution prémélangée complète contenant des amorces et des sondes, après traitement à 37°C pendant 7 jours, il n'y a aucun changement dans la détection à faible concentration.

Figure 1 : En utilisant l'acide nucléique du VHB comme modèle, une solution complète de prémélange qPCR a été préparée avec 10726ES, et tous les composants, à l'exception du modèle, ont été testés pour une stabilité accélérée à 37 °C pendant 7 jours. Les résultats ont montré qu'il n'y avait pas de changements significatifs dans les valeurs Ct et les valeurs de fluorescence à des concentrations élevées, moyennes et faibles, indiquant que la solution de prémélange préparée avec 10726ES a des performances stables.

• Faible résidu d'ADN génomique de l'hôte : l'ADN génomique résiduel d'E. coli est inférieur à 0,5 copie pour 100 U.

Figure 2 : Plage linéaire d'ADN génomique d'E. coli : 30 fg/μL à 300 pg/μL, avec un coefficient de corrélation R2 de 0,9999. (B) L'ADN génomique résiduel d'E. coli dans trois lots d'ADN polymérase Hieff UCF.ME® Sensitive Taq est inférieur à 0,5 copie pour 100 U.

2. Matériau enzymatique de base - Transcriptase inverse

En tant que composant clé de la réaction RT-qPCR, la transcriptase inverse doit posséder une vitesse de transcription inverse plus rapide, un rendement de synthèse plus élevé et une meilleure résistance à la chaleur. Pour obtenir une transcriptase inverse plus adaptée à la RT-qPCR, Yeasen Biotech a développé la série Hifair® de transcriptases inverses basées sur M-MLV par modification génétique.Ces enzymes présentent une activité RNaseH plus faible, une stabilité thermique plus élevée et des capacités de synthèse continue plus fortes.

• Il peut résister à une température de réaction de 58℃ et convient à la transcription inverse de modèles d'ARN complexes

Figure 3 : La transcriptase inverse Hifair® V et la transcriptase inverse T* de marque importée ont été incubées à 55 °C et 58 °C pendant 30 minutes pour détecter l'activité enzymatique résiduelle. Les résultats montrent que la transcriptase inverse Hifair® V conserve une activité de 70 % après incubation à 58 °C pendant 30 minutes, dépassant ainsi considérablement la marque importée.

• Taux de détection supérieur en RT-qPCR par rapport aux autres marques, avec une plage de détection de 1 pg à 1 μg

Figure 4 : En utilisant l'ARN total des cellules 293T à des concentrations allant de 1 pg à 1 μg (7 gradients) comme modèle, la transcription inverse a été réalisée en utilisant le mélange de digestion RT-gDNA en une étape Hifair® V SuperMix pour qPCR (Cat#11142), V* et T*. L'ADNc résultant a ensuite été soumis à qPCR pour une analyse quantitative. Les résultats indiquent que la sensibilité de 11142ES peut atteindre 1 pg, avec un taux de détection supérieur à celui des produits concurrents.

3. Autres enzymes et inhibiteurs enzymatiques : inhibiteur de RNase, enzyme UDG

Yeasen Biotech propose une variété d'enzymes et d'inhibiteurs d'enzymes validés pour les applications industrielles de diagnostic in vitro, notamment des inhibiteurs de RNase et des enzymes UDG, offrant ainsi une large sélection de solutions de matières premières de haute qualité pour le développement et la production d'une large gamme de produits de diagnostic in vitro. Ces produits apparentés aux enzymes sont largement utilisés dans la protection des produits cibles de détection moléculaire.

ARNase inhibiteur：Yeasen exprime et purifie des inhibiteurs de RNase recombinants de souris/porcine sous une forme soluble dans E. coli, qui peuvent inhiber de manière générale divers types de RNases (RNase A, B, C) sans supprimer l'activité des polymérases. Ces inhibiteurs ont été validés pour une utilisation généralisée dans de multiples applications telles que la RT-PCR/qPCR, l'ARN-seq, le clonage d'ADNc et la construction de bibliothèques. En plus des inhibiteurs de RNase conventionnels, Yeasen a également développé des inhibiteurs de RNase traités avec la technologie à très faible résidu UCF.ME®, qui ont des résidus hôtes plus faibles et sont adaptés aux applications avec des exigences plus strictes pour les bactéries de fond, aidant à la résolution de l'interférence bactérienne de fond dans la détection des agents pathogènes et améliorant la précision de la détection.

Uracile ADN glycosylase (enzyme UDG/UNG) :L'enzyme UDG (Uracile-ADN glycosylase), lorsqu'elle est utilisée en conjonction avec la dUTP, peut établir un système de prévention de la contamination par PCR. L'enzyme UDG thermolabile et à faible teneur en UDG de Yisheng peut éviter l'activité résiduelle des enzymes UDG conventionnelles après inactivation, ce qui peut entraîner la dégradation des produits d'amplification contenant de la dU à température ambiante. Elle évite également les faux positifs dans les résultats de PCR causés par les bactéries de fond présentes dans les enzymes moléculaires. Ceci est essentiel pour identifier avec précision les agents pathogènes infectieux et aider au diagnostic clinique des infections et des maladies infectieuses.

Anticorps ADN polymérase Taq :L'amplification non spécifique est l'un des principaux problèmes affectant considérablement les performances de la PCR, et la technologie de démarrage à chaud peut réduire efficacement l'amplification non spécifique. L'enzyme de démarrage à chaud modifiée avec des anticorps présente une efficacité d'étanchéité élevée et d'excellentes performances, étant stable à température ambiante avec un taux de libération rapide de l'activité enzymatique.L'enzyme Taq à double anticorps à démarrage à chaud développée par Yisheng Biotech scelle non seulement l'activité polymérase 5'→3' de l'enzyme Taq, mais scelle également simultanément l'activité exonucléase 5'→3'. Cette double approche empêche efficacement l'amplification non spécifique causée par un mauvais appariement ou des dimères d'amorces et empêche également la génération de signaux non spécifiques dus à la dégradation des sondes ou des amorces, améliorant ainsi doublement la stabilité des réactifs.

4、Mélange maître qPCR universel haute performance à un tube

Yeasen Biotech propose des réactifs qPCR de haute qualité, dotés d'une polymérase Taq à démarrage à chaud haute performance associée à un système tampon optimisé. L'entreprise propose une gamme de produits, notamment des mélanges maîtres universels, des mélanges maîtres tout-en-un, des mélanges maîtres de génotypage et des mélanges maîtres lyophilisés. Ces réactifs se caractérisent par leur facilité d'utilisation, leur haute sensibilité et leur forte stabilité, qui accélèrent le développement de vos produits de diagnostic moléculaire.

• bonne polyvalence:Il convient à plusieurs types d'amorces et de sondes multiples (plus de 40 types de cibles différents ont été vérifiés) et présente d'excellentes performances d'amplification ;
• l Stabilité du prémélange super complet : stable à 37℃ pendant 14 jours, 4℃ pendant 28 jours, congélation et décongélation répétées 50 fois ;

• Haute sensibilité et bonne spécificité : la sensibilité peut détecter 0,25 copie/μL et la spécificité de 48 trous n'a pas de pic négatif ;
• Programme de soutien rapide :compatible avec le programme rapide, 30 minutes peuvent produire des résultats ;
• Système antipollution dUP/UDG : Le système antipollution dUTP/UDG est introduit pour prévenir efficacement la pollution par aérosols ;
• Application multi-plateforme et multi-système : Bio-Rad CFX96, ABI Q5, 7500, Slan, Tianlong, etc.

Figure 5 : Sur la base de l'étude de stabilité du réactif pré-mélangé tout-en-un, le 16710ES a été traité de trois manières différentes (4 °C, 37 °C et cycles de congélation-décongélation). Les groupes expérimentaux ont été traités à 4 °C et 37 °C pendant 7 jours, respectivement, et soumis à 50 cycles de congélation-décongélation, tandis que le groupe témoin (stocké à -20 °C) a été évalué pour la stabilité sous quatre systèmes d'amplification multiplex (les groupes 1, 2 et 4 sont des systèmes d'amplification quadruplex et le groupe 3 est un système d'amplification triplex). Les résultats ont démontré que l'écart des valeurs Ct (ΔCt) entre les groupes expérimentaux et témoins était de ± 0,5, et l'écart de la valeur de fluorescence était de 15 %, prouvant que le réactif pré-mélangé tout-en-un de Yeasen possède une excellente stabilité dans l'amplification multiplex.

5. Mélange maître RT-qPCR universel haute performance

Les réactifs RT-qPCR en une étape intègrent les performances supérieures de la transcriptase inverse et des enzymes à démarrage à chaud, complétées par un système de tamponnage optimisé, permettant une détection rapide et sensible des modèles de copie à un seul chiffre. Validés par divers marchés clients, notamment les maladies respiratoires, les épidémies animales et les systèmes de recherche, ces réactifs peuvent répondre aux besoins de diverses directions d'application.

• bonne polyvalence：Il convient à l'amplification qPCR et à la détection d'acides nucléiques de micro-organismes pathogènes, de génomes humains, de plantes et d'autres espèces；
• Haute sensibilité:Le système tampon soigneusement optimisé améliore la sensibilité de détection des modèles à faible concentration jusqu'à 250 copies/mL.
• Système antipollution dUP/UDG：Le système antipollution dUTP/UDG thermolabile est introduit pour dégrader efficacement la pollution par aérosol des produits, réduire les faux positifs et garantir des résultats authentiques；
• Programme de soutien rapide : compatible avec le programme rapide, 40 minutes peuvent produire des résultats ;
• Super stabilité : Stable à 37℃ pendant 14 jours, congélation et décongélation répétées 10 fois.

Évaluation de la sensibilité de détection

Figure 6 : En utilisant le prémélange RT-qPCR de Yeasen (16630ES) et un produit comparable du fournisseur A, la détection de quatre cibles pathogènes a été réalisée simultanément (virus parainfluenza humain HPIV2, virus parainfluenza humain HPIV4, virus respiratoire syncytial HRVA et rhinovirus RSVA). Les résultats ont indiqué que la sensibilité de détection du 16630ES était supérieure à celle du fournisseur A.

Recommandation de produit

产品类型	产品名称	货号
Série d'enzymes PCR	ADN polymérase Hieff UNICON® Hotstart E-Taq, 5 U/μL	10726ES
	Transcriptase inverse Hifair® V (200 U/μL)	11300ES
	Uracile ADN glycosylase (UDG/UNG), thermolabile, 1 U/μL	10303ES
	Inhibiteur de RNase murine (40 U/µL)	10603ES
	Mélange dNTP (25 mM chacun)	10125ES
Série d'enzymes PCR ultra-propres à très faible résidu hôte	ADN polymérase Taq sensible au démarrage à chaud Hieff UCF.ME® (5 U/μL)	14314ES
	Transcriptase inverse Hifair UCF.ME® V (200 U/μL)	14608ES
	UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), thermolabile, 1 U/μL	14466ES
	Université de Californie à Flint.Inhibiteur de RNase murine ME® (40 U/µL)	14672ES
Série monoenzyme PCR Lyo-Ready	ADN polymérase Hieff UNICON® HotStart E-Taq, sans glycérol (5U/μL)	14316ES
	Transcriptase inverse Hifair® V, sans glycérol (600 U/μL)	11301ES
	Uracile ADN glycosylase (UDG), thermolabile (1 U/μL, sans glycérol)	10707ES
	Inhibiteur de RNase murine (200 U/µL, sans glycérol)	10703ES
Mélange maître RT-qPCR	Kit de sonde RT-qPCR multiplex en une étape Hifair® C203P1 (UDG Plus)	16630ES
	Kit de sonde RT-qPCR Hifair® V Multiplex en une étape (UDG Plus)	11899ES
	Kit RT-qPCR Hifair® Lyo Multiplex en une étape	11831ES
Mélange maître qPCR	Mélange Hieff Unicon® Universal TaqMan Pro U+ qPCR (un tube)	16710ES
	Mélange maître qPCR multiplex Hieff Unicon® Universal TaqMan (UDG plus)	13891ES
	Mélange maître Hieff Unicon® Superpro Ⅰ TaqMan qPCR (UDG plus)	11827ES
	Mélange maître Hieff Unicon® Purepro Ⅰ TaqMan qPCR (UDG plus)	11853ES
	Mélange maître qPCR multiplex Hieff Unicon® Universal TaqMan (UDG plus)	11893ES