Ces dernières années, avec le développement rapide des techniques de biologie moléculaire, Les méthodes de diagnostic basées sur les acides nucléiques sont largement établies et largement appliquées dans les tests de laboratoire des maladies humaines. Par rapport aux autres techniques d'amplification des acides nucléiques, l'amplification isotherme offre les avantages d'être rapide, efficace et spécifique, et ne nécessite pas d'équipement spécialisé. Par conséquent, depuis son apparition, elle a été considérée par de nombreux chercheurs comme une méthode de détection qui pourrait potentiellement rivaliser avec la PCR.

Par conséquent, on pense que le développement et l’application d’instruments et de kits de diagnostic basés sur la technologie d’amplification isotherme représenteront une nouvelle direction pour les tests au point de service (POCT) dans le diagnostic moléculaire.

Introduction aux principes des technologies d'amplification isotherme courantes

1. Amplification isotherme à médiation par boucle

Technologie (LAMP)

Principe:L'amplification isotherme médiée par boucle (LAMP) utilise l'ADN polymérase Bst, qui a une activité de déplacement de brin. Elle conçoit quatre types d'amorces spécifiques ciblant six régions du gène cible, permettant une amplification efficace, rapide et spécifique de la séquence cible dans des conditions isothermes. L'amplification peut être réalisée à une température constante de 60 à 65 °C et, en 15 à 60 minutes, une amplification d'acide nucléique de 10⁹ à 10¹⁰ des temps peuvent être atteints.

Avantages et applications :En raison de sa réaction rapide, sa grande spécificité, son équipement simple et facile à utiliser et ses résultats faciles à interpréter, l'amplification isotherme a été appliquée à la détection de bactéries pathogènes, parasites, virus, maladies et produits génétiquement modifiés. On s'attend également à ce qu'il soit largement utilisé dans le diagnostic clinique des maladies infectieuses, la surveillance environnementale, la sécurité alimentaire et d'autres domaines. Il est devenu une méthode idéale adaptée aux tests moléculaires au point de service (POC) plates-formes.

Classification:Les méthodes de détection LAMP sont classées en plusieurs types, notamment la turbidimétrie, les méthodes d'indicateur de pH, les méthodes de colorant fluorescent (tels que NHB, calcéine, SYBR Green, Syto, etc.) et les méthodes de sonde fluorescente.

2. Technologie d'amplification par recombinase polymérase (RPA)

Principe:L'enzyme recombinase, lorsqu'elle est liée aux amorces, forme un complexe protéine-ADN capable de rechercher des séquences homologues dans l'ADN double brin. Une fois que les amorces ont localisé les séquences homologues, une réaction d'échange de brins se produit, conduisant à la formation et au démarrage de la synthèse d'ADN, qui amplifie de manière exponentielle la région cible sur la matrice. Le brin d'ADN déplacé se lie à la protéine de liaison simple brin (SSB) pour empêcher tout déplacement supplémentaire. Dans ce système, un événement de synthèse est initié par deux amorces opposées, s'appuyant principalement sur les activités de la recombinase, de l'enzyme Bsu et de la protéine SSB. La technologie permet de détecter rapidement la cible d'intérêt en 10 à 30 minutes à des températures allant de 37 à 42 °C.

Avantages et applications :RPA se vante haute sensibilité, forte spécificité, faible dépendance à l'équipement spécialisé, et la capacité d'intégrer divers formats de détection. Il est particulièrement adapté aux tests au point de service au niveau local et sur le terrain. Le RPA peut être largement appliqué dans les diagnostics in vitro, les maladies animales, la sécurité alimentaire, la biosécurité, l'agriculture et d'autres domaines.

Classification:Les méthodes de détection RPA sont classées en plusieurs types, notamment l'électrophorèse sur gel, la méthode de la sonde EXO, la méthode de la sonde Fpg, la bandelette à flux latéral (LF-RPA) et l'analyse de floculation, entre autres.

Présentation des performances du produit

01 Réactifs de coloration sensible au pH RT-LAMP

Le colorant sensible au pH RT-LAMP utilise un colorant visuel comme indicateur sensible, dans des conditions isothermes de 60 à 65 ℃, pour réaliser une amplification d'acide nucléique d'ARN en une étape à l'aide d'un bain-marie à température constante ou d'une machine PCR standard. En seulement 30 minutes, le changement de couleur après la réaction peut être utilisé pour déterminer si une infection pathogène est présente, avec des résultats plus intuitifs (le positif est jaune orangé, le négatif est magenta). Cette méthode convient aux tests rapides de grandes populations.

Produits recommandés :

Kit de colorant sensible au pH RT-LAMP (13906ES)
Kit de lyophilisation à colorant sensible au pH RT-LAMP version chromogène (13920ES)

Présentation des performances :

1.Guide de sélection du mélange RT-LAMP/RPA

Classification des produits	Mélange RT-LAMP			Mélange RPA
Nom du produit	Kit de test de colorant RT-LAMP (UDG plus)	Kit de colorants sensibles au pH RT-LAMP	Kit lyophilisable à colorant sensible au pH RT-LAMP version chromogène	Amplificateur à fusible rapide
Numéro d'article du produit	13762ES	13906ES	13920ES	16702ES
Catégorie de produit	Colorant fluorescent	Colorant sensible au pH	Colorant sensible au pH	Sonde
Composants du produit	2 composants Tampon, mélange d'enzymes	3 composants Tampon, enzyme RT, enzyme Bst	4 composants Tampon, enzyme RT, enzyme Bst, lyoprotecteur	4 composants Tampon, mélange d'enzymes, acétate de magnésium
Lyophilisation prise en charge	Non	Oui, sans lyoprotecteur	Oui, contenant du lyoprotecteur	Non

2.Guide de sélection des enzymes LAMP/RT-LAMP

Classification des produits	Enzyme BST		Transcriptase inverse		Enzyme UDG
Nom du produit	Bst Plus	Bst Plus lyophilisé	Ⅲ Transcriptase inverse	III Transcriptase inverse, Sans glycérol	UDG	UDG, sans glycérol
Numéro d'article du produit	14402ES	14405ES	11111ES	11297ES	14455ES	14001ES
Activité enzymatique	40 U/μL	60 U/μL	200 U/μL	600 U/μL	1 U/μL	1 U/μL
Composants du produit	3 composants	2 composants	2 composants	monocomposant	célibataire- composant	monocomposant
Lyophilisation prise en charge	Non	Oui	Non	Oui	Non	Oui

3. Guide de sélection des enzymes RPA

Classification des produits	Bsu	T4 X	T4 Y	SSB	CK	EXO
Nom du produit	Bsu	T4 UVS X	T4 UvsY	gp 32	Créatine kinase	Exonucléase III
Numéro d'article du produit	11078ES	11079ES	11080ES	11081ES	14502ES	14525ES
Activité enzymatique	5 U/μL	2 μg/μL	2 μg/μL	5 μg/μL	2 μg/μL	100 U/μL
Composants du produit	monocomposant	monocomposant	monocomposant	monocomposant	monocomposant	2 composants
Lyophilisation prise en charge	Non	Non	Non	Non	Non	Non