Lors de l'utilisation d'enzymes traditionnelles de haute fidélité pour la PCR, il est inévitable de rencontrer des problèmes épineux. Par exemple, la fidélité peut ne pas être suffisante, ce qui entraîne des mutations ou des suppressions dans les bases cibles même après le séquençage des fragments amplifiés. Le temps d'amplification est également relativement long ; parfois, l'amplification d'un fragment de 5 kb peut prendre près de 2 heures. XiaoYi présente désormais une PCR rapide de haute fidélité pour résoudre vos problèmes ! -- Hieff Canace™ AdvanceFast PCR Master Mix (prémélange PCR ultra-rapide et haute fidélité).
Le 2× Hieff Canace™ Master Mix PCR AdvanceFast (avec colorant) contient un indicateur d'électrophorèse pré-ajouté, permettant d'utiliser directement les produits PCR pour l'électrophorèse. Les produits amplifiés ont des extrémités franches. Ce mélange enzymatique haute fidélité offre les avantages d'être rapide, simple, très sensible, fortement spécifique et stable. Dans le système de réaction, seuls les amorces et les modèles doivent être ajoutés. De plus, le produit contient également un protecteur spécifique, qui garantit que le prémélange PCR haute fidélité conserve une activité stable même après des congélations et décongélations répétées.
Caractéristiques du produit
- Haut Fidélité: Faible inadéquation taux, avec un base inadéquation rapport de 231/300 000 dans haut GC sujet aux mutations séquences;
- Rapide Amplification Vitesse: Extension taux comme rapide comme 5 secondes par Ko;
- Large Applicabilité : Capable de revêtement gènes avec 20-80% GC contenu, tolère souris lysats et 20% sang;
- Bien Stabilité: Peut être stocké à 37°C pour 7 jours sans affectant produit performance;
- Rapide et Pratique: Simplement ajouter amorces et modèle pour amplification, vient avec chargement colorant pour direct électrophorèse.
Démonstration des performances du produit
Haute fidélité, faible taux de non-concordance
En utilisant les génomes de différentes espèces comme modèles, six fragments riches en GC, très sujets aux mutations/pertes de bases, ont été sélectionnés pour l'amplification. Les produits de PCR respectifs ont été clonés dans des vecteurs et 100 clones individuels pour chaque séquence ont été sélectionnés pour le séquençage afin de confirmer les cas de non-concordance/mutation de bases. Les résultats ont montré que le mélange maître de PCR rapide et haute fidélité (10164ES) présentait un taux supérieur de non-concordance/mutation de bases par rapport aux réactifs de marques nationales et internationales.
Le temps d'extension peut atteindre jusqu'à 5 secondes/kb
En utilisant le prémélange enzymatique rapide et haute fidélité (10164ES) et le produit T, des fragments de différentes longueurs (0,4-10 kb) ont été amplifiés à partir de 100 ng de matrice d'ADN génomique humain à un taux d'extension de 5 s/kb, avec un temps d'extension requis de 5 s/kb. Les résultats ont montré que le prémélange enzymatique rapide et haute fidélité (10164ES) peut amplifier des fragments de moins de 10 kb à un taux d'extension de 5 s/kb.
Peut amplifier des fragments de gènes avec une teneur en GC différente
Utilisation du prémélange enzymatique rapide haute fidélité (10164ES) pour amplifier des fragments de gènes avec une teneur en GC de 23 à 76 % à partir de modèles d'ADN génomique humain, avec un temps d'extension fixé à 5 s/kb. Les résultats ont montré que le produit a une bonne spécificité d'amplification et est capable d'amplifier des fragments avec différentes teneurs en GC.
Capable d'amplifier des fragments de gènes avec une teneur en GC variable
Utilisation du prémélange enzymatique rapide et haute fidélité (10164ES) pour amplifier des fragments de différentes longueurs provenant de différents échantillons, avec un temps d'extension fixé à 5-10 secondes par kilobase. Les résultats indiquent que ce produit présente une excellente spécificité d'amplification et est compatible avec l'amplification de différents fragments provenant de divers modèles.
Remarque : 1. ADN génomique de souris 1 kb ; 2. ADN génomique de souris 2 kb ; 3. ADN génomique de souris 6 kb ; 4. ADN génomique de maïs 1 kb ; 5. ADN génomique de riz 2 kb-A ; 6. ADN génomique de riz 2 kb-B ; 7. ADNc de cellules 293 humaines 1 kb ; 8. ADNc de cellules 293 humaines 2 kb ; 9. ADNc de cellules 293 humaines 3 kb ; 10. ADNc de cellules 293 humaines 12 kb ; 11. Bouillon d'E. coli 8 kb ; 12. Bouillon d'E. coli 16 kb ; 13. ADN génomique de riz 10 kb-A ; 14. ADN génomique de riz 10 kb-B ; 15. ADN génomique de riz 10 kb-C ; 16. ADN génomique du riz 20 kb-A ; 17. ADN génomique du riz 20 kb-B ; 18. Amplification directe du sang humain 3 kb.
Taux de détection élevé de l'amplification du modèle dans différentes espèces
En utilisant le prémélange enzymatique rapide et haute fidélité (10164ES), différents fragments de contenu GC allant de 0,5 à 10 kb dans Arabidopsis, colza et pomme de terre ont été amplifiés, avec un temps d'extension de 5 s/kb. Les résultats ont montré que le prémélange enzymatique rapide et haute fidélité (10164ES) peut assurer une amplification réussie.
À l'aide du prémélange enzymatique rapide et haute fidélité (10164ES), des séquences aléatoires (sélectionnées au hasard) d'Arabidopsis, de colza, de mouches à fruits, de Caenorhabditis elegans et de poisson zèbre, avec des tailles de fragments allant de 0,5 à 10 kb et couvrant 20 à 80 % de la teneur en GC, ont été amplifiées. Le temps d'extension a été fixé à 5 s/kb. Les résultats ont montré que le prémélange enzymatique rapide et haute fidélité (10164ES) a un taux de détection élevé.
Bonne stabilité
En utilisant le prémélange enzymatique rapide haute fidélité (10164ES) qui a été accéléré par la chaleur et stocké à 37 °C pendant 3 jours et 7 jours, respectivement, pour amplifier des fragments d'ADN de 3 kb et 5 kb à partir de 100 ng d'ADN génomique humain, avec un temps d'extension fixé à 5 s/kb. Les résultats montrent que le produit a une bonne stabilité.
Commentaires sur les essais clients
Animal ADNg-120pb-50%GC
Évaluation du client : Le processus de PCR est rapide, les bandes sont appropriées et peuvent être chargées directement dans l'électrophorèse sur gel d'agarose. Les bandes de la marque N sont biaisées vers le haut, ce qui peut être dû à l'influence de son propre tampon, et comme aucun tampon de chargement n'a été ajouté, ce produit peut remplacer l'enzyme haute fidélité dans mon protocole expérimental actuel.
Usine ADNc-729pb-45,13%GC
Évaluation du client : Par rapport à la marque T, les bandes de clonage sont plus claires et plus uniformes, et l'ensemble du processus de PCR est plus rapide. Il n'est pas nécessaire d'ajouter de colorant supplémentaire lors de l'exécution du gel, ce qui est très pratique et permet de gagner du temps.
Microbien ADNg-1158, 1953 pb-58,8 %, 52,9 % GC
Évaluation client : Par rapport à la marque V, l'effet est comparable, mais personnellement, je le trouve encore meilleur.
Usine ADNc-2000pb-40%GC
Évaluation du client : L'effet est très bon et la bande est claire.
Guide de sélection PCR haute fidélité
| Positionnement du produit | Nom du produit | Chat# |
| 5s/kb, assure fidélité et rapidité (Avec Colorant) | 10164ES | |
| 5s/kb, assure fidélité et rapidité (sans colorant) | 2× Hieff Canace™ Mélange maître PCR AdvanceFast | 10163ES |
| 83×Taq, taux de détection élevé (avec colorant) | 2×Hieff Canace™ Plus PCR Master Mix (avec colorant) | 10154ES |
| 83×Taq enzyme unique + tampon séparé | 10153ES |