La transcription inverse est le processus de conversion de l'ARN en ADN complémentaire (ADNc), qui est médié par l'enzyme transcriptase inverse. En présence d'amorces de recuit, la transcriptase inverse se lie d'abord à la matrice d'ARN. L'activité ADN polymérase dépendante de l'ARN de la transcriptase inverse synthétise l'ADNc en incorporant des dNTP du mélange réactionnel. Ce processus aboutit à la formation d'un brin hybride ADNc:ARN, connu sous le nom de synthèse d'ADNc du premier brin.

La transcriptase inverse du virus de la leucémie murine de Moloney (M-MLV) est l'une des transcriptases inverses couramment utilisées dans les procédures de laboratoire de biologie moléculaire. Pour obtenir une efficacité de transcription inverse plus élevée, une meilleure stabilité thermique et un taux accru de synthèse d'ADNc, la transcriptase inverse d'origine est souvent génétiquement modifiée. Actuellement, les réactifs de transcription inverse disponibles sur le marché nécessitent généralement des temps de réaction allant de 15 à 30 minutes, ce qui est relativement long. Lorsque le nombre d'échantillons de réaction est important, le temps total dépensé peut augmenter considérablement. Les produits de la série de transcription inverse de 5 minutes de YESSEN existants peuvent terminer le processus de transcription inverse en seulement 5 minutes, ce qui permet de gagner du temps et d'être très efficace.

Pproduit Ppositionnement

Nom du produit

Chat#

Prémélange de transcription inverse rapide, efficace et à haut rendement

Hifair™ AdvanceFast SuperMix de synthèse d'ADNc du premier brin pour qPCR

11156ES

Prémélange de transcription inverse rapide, efficace et à haut rendement (avec élimination de l'ADN génomique)

Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix pour qPCR (digesteur d'ADN plus)

11155ES

Préparation rapide en une seule étape de l'élimination de l'ADN génomique et du prémélange de transcription inverse

Hifair™ AdvanceFast SuperMix de digestion RT-gDNA en une étape pour qPCR

11151ES

Kit de sélection d'amorces flexibles pour transcription inverse rapide (avec suppression de l'ADN génomique)

Hifair™ Kit de synthèse d'ADNc AdvanceFast 1er brin (sans colorant)

11150ES

Kit de sélection d'amorces flexibles pour transcription inverse rapide (avec élimination de l'ADN génomique et colorant de suivi)

Hifair™ Kit de synthèse d'ADNc du premier brin AdvanceFast

11149ES

Recommandation de boutique numéro un

Prémélange de transcription inverse rapide, efficace et à haut rendement (avec élimination de l'ADN génomique) (Cat #11155ES)

Rendement élevé de la transcription inverse à partir de différents modèles

Échantillon

293T Cellule

Arabidopsis thaliana

Souris

Foie de poisson

11155ES

23,4↓

19,6↓

24,9↓

21.1↓

Marque A

24,9

21.3

27,5

21.3

Marque B

26.1

20,5

27.1

23.1

Marque C

25,7

19,8

27.3

21,9

Marque D

24.3

21.3

28.1

24,5

Figure. La transcription inverse a été réalisée à l'aide de modèles d'ARN provenant de cellules 293T humaines, d'Arabidopsis thaliana, de foie de souris et de foie de poisson. Les marques A, B, C et D sont toutes des réactifs de transcription inverse à digestion en deux étapes avec des temps de transcription inverse variables de 15 à 20 minutes. Les résultats des tests montrent que le kit de transcription inverse de 5 minutes Hifair 11155ES excelle avec des rendements plus élevés par rapport aux autres marques, et les valeurs Ct sont plus faibles.

Recommandation de boutique numéro 2

Prémélange de digestion et de transcription inverse en une seule étape en 5 minutes (réf. 11151ES)

Rendement élevé de la transcription inverse

Figure. En utilisant l'ARN des cellules 293T humaines comme modèle, trois gènes ont été testés respectivement. Les marques A, B et C sont toutes des réactifs d'élimination de l'ADN génomique et de transcription inverse en une seule étape. Les résultats du test montrent qu'avec un apport de 1 μg et 10 ng d'ARN total, le rendement de la transcription inverse avec le kit 11151ES est supérieur à celui des autres marques, avec des valeurs Ct plus faibles.

Figure. En utilisant l'ARN d'Arabidopsis thaliana comme modèle, les marques A, B et C sont toutes des réactifs d'élimination d'ADN génomique et de transcription inverse en une seule étape. Les résultats des tests montrent qu'avec un apport de 1 μg et 10 ng d'ARN total, le rendement de la transcription inverse avec le kit 11151ES est supérieur à celui des autres marques, avec des valeurs Ct plus faibles.

Excellente sensibilité

Figure. En utilisant l'ARN des cellules 293T humaines comme modèle, les gènes avec une teneur en GC de 30 %, 50 %, 60 % et 70 % ont été amplifiés. Des apports d'ARN totaux de 100 pg, 1 ng, 10 ng, 100 ng et 1 μg ont été utilisés pour la transcription inverse suivie d'une détection quantitative par fluorescence. Les résultats montrent que 11151ES peut s'adapter à la transcription inverse pour des apports d'ARN allant de 100 pg à 1 μg.

Recommandation de la boutique Ttrois

Kit de transcription inverse rapide de 5 minutes (Numéro de chat 11149/11150ES)

Haute sensibilité, avec une limite de détection minimale jusqu'à 10 pg

Figure. En utilisant l'ARN total des cellules 293T comme modèle, une transcription inverse a été réalisée avec 11149ES et l'ADNc résultant a été soumis à une analyse quantitative par qPCR. Les résultats montrent que 11149ES peut effectuer avec succès la transcription inverse d'entrées d'ARN allant de 10 pg à 1 μg, garantissant des résultats quantitatifs précis.

Bonnes performances d'amplification, avec la plus longue amplification d'un fragment de 14 kb

Chiffre.En utilisant l'ARN total des cellules 293T comme modèle, une transcription inverse a été réalisée avec 11149ES et l'ADNc résultant a été soumis à une détection par PCR. Les résultats indiquent que 11149ES est capable de synthétiser des fragments d'ADNc d'une longueur comprise entre 1 kb et 14 kb, la PCR ultérieure présentant certains scénarios applicables. Si une transcription inverse directe de fragments de plus de 10 kb est nécessaire, il est recommandé d'étendre le temps de transcription inverse à 20-30 minutes pour garantir l'acquisition des fragments finaux.

Comparaison de l'efficacité de la transcription inverse

Quantité d'ARN injectée

Valeur Ct

11149ES

Marque A

1 μg

15.2

15,5

100 ng

18.0

18,5

10 ng

21

21,7

1 ng

24,5

25.1

100 pages

29.1

29,7

10 pages

32,7

34.3

Figure. En utilisant l'ARN total des cellules 293T comme modèle, la transcription inverse a été réalisée avec 11149ES et la marque A, 11149ES n'ayant pas subi l'étape d'élimination de l'ADNg. L'ADNc résultant a été soumis à une analyse quantitative par qPCR. Les résultats montrent que le temps de transcription inverse pour la marque A était de 13 minutes, tandis que pour 11149ES, il était de 5 minutes. L'analyse quantitative de différents produits révèle que les valeurs Ct pour 11149ES sont inférieures ou similaires à celles de la marque concurrente, ce qui indique que l'efficacité de la transcription inverse en 5 minutes de 11149ES est supérieure ou approximativement équivalente à celle de la marque A.

Quantité d'ARN injectée

Valeur Ct

11149ES

Marque B

1 μg

16.2

17.4

100 ng

19.0

20,5

10 ng

22

23,8

1 ng

26

27,9

100 pages

31.4

33.2

10 pages

32,9

35,6

Chiffre.En utilisant l'ARN total des cellules 293T comme modèle, une transcription inverse a été réalisée avec 11149ES et la marque B, 11149ES n'ayant pas subi l'étape d'élimination de l'ADNg. L'ADNc résultant a été soumis à une analyse quantitative par qPCR. Les résultats montrent que le temps de transcription inverse pour la marque B était de 20 minutes, tandis que pour 11149ES, il était de 5 minutes. L'analyse quantitative de différentes quantités de substrat révèle que les valeurs Ct pour 11149ES sont inférieures ou similaires à celles de la marque B, indiquant que l'efficacité de la transcription inverse en 5 minutes de 11149ES est supérieure ou approximativement équivalente à celle de la marque B.

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Enquête