Hifair™ Le kit de synthèse d'ADNc AdvanceFast 1st Strand (sans colorant) est un kit de transcription inverse rapide développé sur la base du Hifair™ Kit de synthèse d'ADNc 1er brin III (sans colorant), adapté aux expériences d'amplification PCR et de RT-qPCR. Comparé au Hifair™ Kit de synthèse d'ADNc III 1er brin (sans colorant), il offre des taux de détection stables, une spécificité et une garantie de rendement, avec un temps total de transcription inverse potentiellement réduit à moins de 6 minutes, réduisant ainsi considérablement la durée expérimentale.

Le kit comprend un mélange de digestion d'ADN génomique, qui peut éliminer la contamination de l'ADN génomique restant dans la matrice d'ARN, garantissant ainsi des résultats ultérieurs plus fiables. Le kit fournit deux types d'amorces de synthèse d'ADNc : les amorces aléatoires N6 et les amorces oligo (dT)₁₈Les utilisateurs peuvent choisir entre les amorces aléatoires N6, Oligo (dT)₁₈, ou des amorces spécifiques de gènes comme amorces de transcription inverse en fonction de leurs besoins. Le produit d'ADNc monocaténaire synthétisé peut être directement utilisé pour les réactions de PCR ou de qPCR ultérieures.

Caractéristiques

Composants

Stockage

Ce produit doit être conservé entre -25 et -15 ℃ pendant 1 année.

Instructions

1. Si l’expérience nécessite l’élimination de l’ADN génomique résiduel

1) Digestion de l'ADNg

Dans un tube à centrifuger sans RNase, préparez le mélange suivant et pipettez doucement pour bien mélanger. Incubez à 42 ℃ pendant 2 minutes.

* Il est recommandé que la quantité d'ARN total ne dépasse pas 2 μg. Si le niveau d'expression du gène cible est faible, la quantité d'ARN total peut être augmentée jusqu'à un maximum de 5 μg.

2) Préparation du système de réaction de transcription inverse (système de 20 μL)

* La quantité d'amorces peut être ajustée en fonction de la quantité de modèle introduite. Si le produit de transcription inverse est utilisé pour des expériences de qPCR, des amorces aléatoires peuvent être ajoutées au système en fonction de la quantité recommandée.

** Il est recommandé d'ajouter d'abord 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (sans colorant), de bien mélanger, puis d'ajouter l'amorce de transcription inverse pour garantir que l'amorce n'est pas affectée par gDNA Digester.

3) Paramètres de la procédure de transcription inverse

* Pour les modèles à teneur élevée en GC ou les modèles complexes, la température de transcription inverse peut être augmentée à 60℃.

** Ce produit peut synthétiser des séquences d'ADNc inférieures à 14 kb. Si vous avez besoin de produits d'ADNc plus longs, vous pouvez prolonger de manière appropriée le temps de transcription inverse.

2. Si l’expérience ne nécessite pas la suppression de l’ADN génomique

1) Préparation du système de réaction de transcription inverse (système de 20 μL)

* Il est recommandé que la quantité d'ARN total ne dépasse pas 2 μg. Si le niveau d'expression du gène cible est faible, la quantité d'ARN total peut être augmentée jusqu'à un maximum de 5 μg.

** La quantité d'amorces peut être ajustée en fonction de la quantité de modèle introduite. Si le produit de transcription inverse est utilisé pour des expériences de qPCR, des amorces aléatoires peuvent être ajoutées au système en fonction de la quantité recommandée.

2) Paramètres de la procédure de transcription inverse

* Pour les modèles à teneur élevée en GC ou les modèles complexes, la température de transcription inverse peut être augmentée à 60℃.

** Ce produit peut synthétiser des séquences d'ADNc inférieures à 14 kb. Si vous avez besoin de produits d'ADNc plus longs, vous pouvez prolonger de manière appropriée le temps de transcription inverse.

Remarques

1. Toutes les opérations doivent être effectuées sur de la glace et de manière à éviter la contamination par la RNase.
2. Ce produit est destiné à la recherche uniquement.
3. Veuillez travailler avec des blouses de laboratoire et des gants jetables, pour votre sécurité.

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