La purification des protéines est une technique fondamentale en biochimie et en biologie moléculaire, largement utilisée dans la recherche, le diagnostic et les applications thérapeutiques. Pour étudier une protéine spécifique, la première étape consiste à l'isoler et à la purifier à partir d'échantillons biologiques. Cependant, obtenir des protéines de haute pureté peut être un défi, étant donné la diversité des protéines et la complexité des systèmes biologiques. Comprendre les principes fondamentaux de la purification des protéines et sélectionner les bonnes techniques pour vos recherches peut considérablement améliorer l'efficacité et le rendement de votre flux de travail.
Les bases de la purification des protéines
La purification des protéines repose sur les différences de propriétés physiques et chimiques des protéines, telles que la taille, la charge, l'hydrophobicité et l'affinité pour des ligands spécifiques. En exploitant ces différences, les chercheurs peuvent séparer efficacement les protéines cibles des autres composants biologiques, minimisant ainsi la contamination.
Voici les principales techniques de purification des protéines basées sur des mécanismes de séparation distincts :
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| Filtration sur gel | Échange d'ions | Interaction hydrophobe | Affinité |
| Mécanisme de séparation | Taille | Charge de surface des protéines | Hydrophobicité | Affinité spécifique |
| Sélectivité | Moyen | Haut | Élevé-moyen | Très élevé |
| Capacité de charge | Faible | Haut | Haut | Haut |
| Vitesse de purification | Moyen-faible | Haut | Haut | Haut |
| Biocompatibilité | Très bien | Bien | Moyen-Bon | Bien |
| Rendement en protéines cible | Haut | Haut | Moyen-élevé | Haut |
Chacune de ces techniques peut être optimisée en sélectionnant les matériaux et les colonnes appropriés. La méthode idéale dépend des caractéristiques de la protéine et du niveau de pureté requis pour les applications en aval.
Optimiser votre flux de travail de purification des protéines avec Yfaciliter Produits de biologie
À Yeasen Biologie, nous proposons une large gamme de réactifs et de matériaux de haute qualité conçus pour rationaliser la purification des protéines. Que vous manipuliez des échantillons biologiques complexes ou que vous ayez besoin de protéines à haut rendement et à haute pureté, nous proposons des outils pour améliorer votre processus de purification. Voici un aperçu de certains de nos produits clés pour vous aider à optimiser vos flux de travail de purification :
Sa purification de protéines d'étiquette ((Cat#20502ES):
Dans l’expression des protéines recombinantes, la Son étiquette (généralement 6×His) est largement utilisé en raison de sa petite taille, de sa faible immunogénicité et de son impact minimal sur la fonction des protéines. Ses protéines d'étiquette peuvent être efficacement purifiées par des résines d'affinité chélatée avec des ions nickel, telles que les résines Ni-NTA. Résine d'agarose HisSep Ni-NTA (Cat#20502ES) fourni par Yfaciliter Biologie utilise un gel d'agarose hautement réticulé comme matrice, combiné au ligand acide azote-triacétique (NTA) à coordination quadruple pour former des chélates d'ions nickel stables. La structure combinée assure une liaison efficace des protéines et des performances d'élution.
Purification par affinité des anticorps anti-tag
La purification par affinité des anticorps marqueurs utilise une liaison hautement spécifique entre l'anticorps et son marqueur spécifique pour obtenir la purification de la protéine de fusion. Les marqueurs courants incluent Drapeau, HA, Myc, etc. En utilisant les milieux d'affinité d'anticorps correspondants, la protéine d'intérêt peut être efficacement isolée à partir d'échantillons complexes.
Biologie Yeasen fournit une variété de produits de purification par affinité d'anticorps marqués :
- Affinité anti-drapeau Gel (Cat#20584ES):
Préparé à partir d'un anticorps monoclonal murin IgG2b de haute qualité avec 4 % de gel d'agarose hautement réticulécouplage d'alimentation ugh, il a une capacité de chargement de protéines de fusion Flag-tag élevée, suutilisable pour l'immunoprécipitation et la purification des protéines Flag-tag. yeasen.com
- Gel d'affinité anti-HA(Cat#20586ES):
Préparé à partir d'anticorps monoclonal IgG1 murin de haute qualité et de gel Sepharose 4B par couplage d'alimentation, il possède une capacité de chargement élevée de protéines de fusion HA-tag, adaptée à l'immunoprécipitation et à la purification des protéines HA-tag.avec
- Gel d'affinité anti-myc（Cat#20587ES）:
L'anticorps monoclonal murin IgG1 de haute qualité est couplé au gel Sepharose 4B, conçu pour la purification des protéines marquées Myc, avec une spécificité élevée et une capacité de liaison élevée.
- Billes immunomagnétiques anti-drapeau（Cat#20565ES）:
Cette bille immunomagnétique est couplée à des microsphères d'agarose magnétiques à l'aide d'un anticorps monoclonal IgG2b dérivé de souris de haute qualité, qui peut purifier rapidement les protéines marquées Flag sous l'action de champs magnétiques et convient à la purification de petits échantillons.
Purification par affinité des anticorps (Cat#36401ES) :
Purification par affinité des anticorps est une méthode d'utilisation de la liaison spécifique d'un anticorps à son antigène pour la purification des protéines. La résine d'agarose de purification de protéine A recombinante résistante aux alcalis (Cat#36401ES) est couramment utilisée comme milieu de purification par affinité d'anticorps et est largement utilisée pour la purification et l'enrichissement des anticorps.
Protéinase
Dans les études sur les protéines, les protéases sont utilisées pour cliver les marqueurs de fusion, rétablissant ainsi l'état naturel de la protéine cible. L'intégration de ces protéases dans votre flux de travail de purification des protéines peut améliorer la qualité et la fonctionnalité de vos protéines cibles, facilitant ainsi les projets de recherche et développement avancés.
- Entérokinase recombinante (Cat#20401ES) :
L'entérokinase, également connue sous le nom d'entéropeptidase, est une sérine protéase qui se divise spécifiquement après la séquence d'acides aminés DDDDK. L'entérokinase recombinante de Yeasen est exprimée dans Escherichia coli et est exempt de marqueurs, ce qui garantit qu'il n'interfère pas avec les applications en aval. Cette enzyme est idéale pour éliminer les marqueurs de fusion des protéines recombinantes, facilitant ainsi la production de protéines natives pour les études structurelles et fonctionnelles.
- lPNGase F (Cat#20407ES) :
La PNGase F est une amidase qui effectue un clivage spécifique entre les résidus GlcNAc et Asn les plus profonds des glycoprotéines N-liées. La PNGase F de Yeasen est fournie à une concentration de 100 000 U/mL, offrant une activité élevée pour les réactions de déglycosylation. Cette enzyme est essentielle pour étudier les structures et les fonctions des glycoprotéines, car elle élimine les glycanes N-liés sans affecter le squelette peptidique.
- Trypsine recombinante (MS-SAFE) (Cat#20416ES) :
La trypsine est une sérine protéase qui coupe les liaisons peptidiques du côté carboxyle des résidus de lysine et d'arginine. La trypsine recombinante de Yeasen est MS-SAFE, ce qui signifie qu'elle convient aux applications de spectrométrie de masse en raison de sa grande pureté et de son activité autolytique minimale. Cette enzyme est idéale pour les études protéomiques, notamment la digestion des protéines pour l'analyse par spectrométrie de masse.
| Purification Méthode | Type de réactif | Type de produit | Produits recommandés |
| Filtration sur gel | Dextran Gel Chromatographie | Remplisseurs de dessalage Colonnes pré-remplies de dessalage Colonnes de dessalage par gravité Colonnes de centrifugation
| Colonne de dessalage G25 M（N° de référence 20590ES） Colonne de dessalage par rotation, 0,5 ml （Cat#20599ES） Colonne de dessalage par gravité, 8.3 ml (Numéro de référence 20741ES） |
| Agarose Gel Chromatographie | Remplissage Colonnes pré-emballées | Remplissage de gel d'agarose haute résolution pour chromatographie Geldex 200 PG (10-600 kDa) (Cat#20598ES) Colonne de chromatographie Geldex 200 PG （Cat#20593ES） | |
| Échange d'ions | Échange anionique Chromatographie | Remplissage Colonnes pré-emballées | Q Agarose HP (Q Strong Anion Exchange Chromatography Packing HP) (Cat#20460ES) Colonne pré-remplie d'échange d'anions forts Q HP, 5 ml (réf. cat. 20462ES) |
| Chromatographie d'échange cationique | SP Agarose HP (HP SP pour chromatographie d'échange de cations forts) (Cat#20463ES) Colonne pré-remplie d'échange de cations forts SP HP, 5 ml (réf. 20465ES) | ||
| Chromatographie d'interaction hydrophobe | Faiblement hydrophobe Chromatographie | Remplissage Colonnes pré-emballées | Milieu de chromatographie hydrophobe faible en butyle à haute résolution (Cat#20484ES) Colonne préchargée pour chromatographie faiblement hydrophobe en butyle HP, 5 ml (réf. 20485ES) |
| Fortement hydrophobe Chromatographie | Milieu de chromatographie fortement hydrophobe à base de phényle à haute résolution (Cat#20486ES) Colonne de chromatographie préchargée fortement hydrophobe Phenyl HP, 5 ml (réf. 20487ES) | ||
| Purification par affinité | Son-tag Purification des protéines | Résine Colonnes pré-emballées Perles magnétiques de purification
| Résine de purification d'agarose protéique His-tag (Cat#20502ES) Colonne préchargée de purification de protéines His-tag, 5 ml (réf. cat. 20504ES) Billes magnétiques de purification de protéines His-tag (Cat#20561ES) |
| TPS-étiqueter Purification des protéines | Résine Colonnes pré-emballées Perles magnétiques de purification
| Résine d'agarose au glutathion (pour la purification des protéines marquées GST) (Cat#20507ES) Colonne préchargée de purification de protéines marquées GST, 5 ml (réf. 20510ES) Billes magnétiques de purification de protéines marquées GST (Cat#20562ES) | |
| MBP-étiqueter Purification des protéines | Résine Colonnes pré-emballées
| Résine de purification hautement réticulée de protéines marquées MBP (Cat#20515ES) Colonne préchargée de purification de protéines marquées MBP, 5 ml (réf. 20517ES) | |
| Streptocoque(Ⅱ) Étiqueter Purification des protéines | Résine Colonnes pré-emballées
| Résine de purification d'agarose protéique marquée Strep(II) (Cat#20495ES) | |
| Bioti-étiqueter Purification des protéines | Résine Colonnes pré-emballées Billes immunomagnétiques | Résine de purification d'agarose à base de streptavidine (Cat#20512ES) Colonne préchargée de purification moléculaire de biotine, 5 ml (réf. 20514ES) Billes immunomagnétiques de streptavidine (SAV) (Cat#47503ES) | |
| Purification par affinité des anticorps de marquage | Gel Billes immunomagnétiques | Gel purifiant d'affinité anti-drapeau (Cat#20584ES) Gel purifiant d'affinité anti-HA (Cat#20586ES) Gel purifiant d'affinité anti-myc (Cat#20587ES) Billes immunomagnétiques anti-drapeau (Cat#20565ES) | |
| Purification par affinité des anticorps | Résine Colonnes pré-emballées Billes immunomagnétiques | Résine de purification de protéine A recombinante à base d'agarose (Cat#36401ES) Résine de purification d'agarose à base de protéine G (Cat#36405ES) Résine de purification d'agarose protéine A/G (Cat#36403ES) Billes immunomagnétiques de protéines A/G (Cat#36417ES) | |
| Autre purification par affinité d'anticorps | Résine Colonnes pré-emballées
| Résine de purification à haute efficacité pour l'élimination des endotoxines (Cat#20518ES) Milieu de purification par affinité à l'héparine (Cat#20493ES) | |
| 其他产品 | Protéases | Enzymes de clivage des étiquettes Glycosidases Enzymes de qualité spectrométrie de masse | E.Entérokinase recombinante exprimée par E. coli (sans étiquette) (Cat#20401ES) Thrombine bovine (haute viabilité, > 2000 UI/mg) (Cat#20402ES) Protéase rTEV Protéase recombinante du virus de la gravure du tabac (Cat#20403ES) PNGase F, N-Glycosidase F (100 000 U/mL) (Cat#20407ES) Trypsine recombinante (MS-SAFE) Trypsine recombinante (qualité spectrométrie de masse) (Cat#20416ES) |
| Consommables pour chromatographie | Colonnes vides à écoulement gravitaire tapez Colonnes vides Colonnes YXK Sacs de dialyse | Colonne vide pour chromatographie par gravité de 12 ml (réf. 20523ES) Colonne vide de type C de 5 ml (connectée à Akata, à une seringue ou à une pompe péristaltique) (Cat#20526ES) Colonne vide de chromatographie YXK16/70 (Cat#20443ES) Sac de dialyse de 27 mm (MWCO 50 kDa) (Cat#20534ES) |
Conclusion : Adaptez votre flux de travail à vos besoins
L'optimisation de votre flux de travail de purification des protéines est essentielle pour obtenir des protéines de haute pureté et à haut rendement pour votre recherche ou votre application. En comprenant les principes de purification et en sélectionnant les bons outils, vous pouvez rationaliser votre processus et éviter les pièges courants. Yeasen Biology fournit des réactifs et des consommables de la plus haute qualité pour toutes les étapes de la purification des protéines, garantissant que vos protéines sont pures, fonctionnelles et prêtes à être analysées.
Pour en savoir plus sur la façon dont nos produits peuvent améliorer votre processus de purification des protéines, visitez nos pages produits ou contactez notre équipe pour des recommandations personnalisées.
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