Avec le développement rapide de la glycoprotéomique et de la recherche sur les médicaments à base d'anticorps, la modification de la glycosylation a également suscité beaucoup d'intérêt. Le contact entre cellules et cellules, et entre cellules et agents pathogènes, se fait principalement par l'interaction des sucres et des protéines, et la glycosylation détermine les propriétés d'adhésion des glycoconjugués. Dans l'IgG, la glycosylation N-liée conservée au niveau d'Asn297 dans la région Fc est également cruciale pour son activité. De plus, certains anticorps possèdent également des N-glycanes supplémentaires qui, avec le site conservé au niveau d'Asn297 dans la région Fc, affectent la reconnaissance, la demi-vie et la réponse immunitaire de l'anticorps.
La glycosylation des protéines est une modification post-traductionnelle complexe qui implique la connexion de chaînes glycaniques à des sites spécifiques sur les protéines. Selon le type de chaîne glycanique, les glycoprotéines sont divisées en glycoprotéines N-liées, glycoprotéines O-liées, etc. De plus, la glycosylation des protéines est également affectée par le type de cellule hôte et les conditions de fermentation (telles que le milieu de culture, la valeur du pH, la température, etc.). Par conséquent, les glycoprotéines présentent généralement une hétérogénéité dans les modèles de glycosylation, y compris les sites de glycosylation, les niveaux de glycosylation et la structure spécifique des chaînes glycaniques, ce qui rend le travail d'analyse et de caractérisation structurelle des chaînes glycaniques extrêmement difficile. Pour obtenir la quantité maximale d'informations structurelles sur les chaînes glycaniques, la principale stratégie d'analyse des chaînes glycaniques consiste à libérer d'abord les chaînes glycaniques des protéines, puis à effectuer une analyse et une caractérisation détaillées. Dans cette stratégie, une méthode de déglycosylation efficace, précise et stable est cruciale.
Les méthodes enzymatiques sont actuellement largement utilisées pour la déglycosylation. Pour les glycanes liés à N, les enzymes couramment utilisées comprennent la PNGase F, Endo H et Endo S.
Présentation du produit
PNGase F est la méthode enzymatique la plus efficace pour éliminer presque tous les N-liés oligosaccharides dans les glycoprotéines, qui peuvent cliver les glycoprotéines oligosaccharidiques à haute teneur en mannose, hybrides et complexes reliées par l'asparagine, en éliminant spécifiquement les glycanes liés à N. Le site de clivage est : la liaison amide entre la N-acétylglucosamine (GlcNAc) la plus interne et le résidu d'asparagine, tout en convertissant l'asparagine sur la protéine après hydrolyse enzymatique en acide aspartique.
Lorsque le fucose α1-6 est situé au niveau du noyau de la GlcNAc, la PNGase F peut également couper ; ce n'est que lorsque le fucose α1-3 est situé au niveau du noyau de la GlcNAc (commun dans les glycoprotéines des plantes et des insectes) que la PNGase F ne peut pas couper.
Notre entreprise propose conventionnel PNGase F (Cat#20407ES)Cependant, la réaction enzymatique PNGase F classique nécessite plusieurs heures pour libérer les N-glycanes de l'anticorps et, en raison de la préférence pour la libération des glycanes, une déglycosylation incomplète peut conduire à des résultats biaisés et la distribution des glycanes obtenue peut ne pas représenter la composition correcte des anticorps thérapeutiques. Par conséquent, l'obtention d'un profil précis des N-glycanes le plus rapidement possible est cruciale pour la surveillance de la glycosylation pendant le processus de production d'anticorps et de protéines de fusion d'anticorps et d'autres agents biothérapeutiques.
PNGase F rapide (Cat#20406ES) est un réactif recombinant optimisé qui peut déglycosyler rapidement et complètement les anticorps, les immunoglobulines, les protéines de fusion et d'autres glycoprotéines en quelques minutes. Cette enzyme peut éliminer rapidement et sans préférence tous les N-glycanes et peut être directement utilisée pour la chromatographie en aval ou l'analyse par spectrométrie de masse.
Caractéristiques du produit :
Rapide: Déglycosylation complète et rapide en quelques minutes.
Haute pureté : Aucune contamination par protéase, glycosidase, pureté ≥ 95 %.
Non sélectif : Élimine rapidement et sans préférence tous les N-glycanes.
Bonne compatibilité : Utilisé directement pour la chromatographie en aval ou l'analyse par spectrométrie de masse.
Endo H est une glycosidase recombinante qui peut cliver la structure centrale du chitobiose des oligosaccharides à haute teneur en mannose et de certains oligosaccharides de type hybride dans les N-glycoprotéines, éliminant ainsi le mannose à haute teneur en N lié des glycoprotéines.
Notre société propose actuellement de la levure recombinante exprimée Endo H (Cat#20414ES).
Endo S est une glycosidase hautement spécifique qui peut cliver les sucres liés à N entre les structures centrales du chitobiose des chaînes lourdes d'IgG de type sauvage. L'activité de la glycosidase S ne dépend pas strictement du peptide, donc X peut être une protéine, un peptide, une asparagine ou un oligosaccharide libre. La glycosidase S est active indépendamment de la présence de fucose alpha1-6 de base ou de N-acétylglucosamine bissectrice sur le substrat. Cependant, elle est inactive contre les oligosaccharides qui sont sialylés et désialylés tri- ou tétra-antennés.
Notre société propose actuellement de l'Endo S recombinant exprimé par E.coli (Cat#20413ES).
Guide d'achat
| Numéro de produit | 20406ES | 20407ES | 20414ES | 20413ES |
| Nom du produit | ||||
| Source | Expression recombinante de levure | Expression recombinante de levure | Expression recombinante de levure | E.coli expression recombinante |
| Activité spécifique | Non applicable | 100000U/mL | 1000000U/mL | 8000 U/mg |
| Site de clivage | Presque tous les glycanes liés à N | Presque tous les glycanes liés à N | Glycanes à haute teneur en mannose liés à N | Clive la structure du disaccharide central de la chaîne lourde de l'IgG |
| Temps de digestion | 10 minutes | 1 à 3 heures | 1 à 3 heures | 1 h |
| Glycosylation | Approprié | Approprié | Approprié | Approprié |
| Structure des protéines | Approprié | Approprié | Approprié | Approprié |
Données de test
1. PNGase F rapide Test
1 : Marqueur protéique (Cat#20350ES) 2 : Concurrent + substrat ou anticorps 3 : Concurrent + substrat ou anticorps
4 : Yeasen Fast PNGase F + substrat ou anticorps 5 : Yeasen Fast PNGase F + substrat ou anticorps 6 : Substrat ou anticorps 7 : Yeasen Fast PNGase F 8 : Concurrent
2.Test Endo H
Figure 2. Endo H effet de clivage enzymatique (substrat)
3.Test Endo S
Informations sur le produit
| Nom du produit | Numéro de produit | Spécification |
| 20406ES20/50 | 20 T/50 T | |
| 20407ES01/02 | 15000 U / 75000 U | |
| 20414ES92/97 | 10000 U / 50000 U | |
| 20413ES80/90 | 1000 U/5 x 1000 U |