Pour offrir davantage d'options de traitement aux patients diabétiques, de nouveaux médicaments contre le diabète sont apparus au début du 21e siècle, tels que les analogues du peptide de type glucagon-1 (GLP-1). Le sémaglutide, l'un des médicaments représentatifs des analogues du GLP-1, a été prouvé dans de nombreuses études cliniques comme étant capable de contrôler efficacement la glycémie lorsqu'il est associé à différents médicaments hypoglycémiants oraux et peut aider les patients à perdre du poids, à réduire la pression systolique et à améliorer la fonction des cellules bêta pancréatiques. Ses trois formulations (injection hypoglycémiante Ozempic, médicament hypoglycémiant oral Rybelsus et injection de perte de poids Wegovy) ont dépassé les 20 milliards de dollars de ventes en 2023. En raison de ses performances exceptionnelles dans réduction de la glycémie et perte de poids, l'industrie s'attend à ce que le Semaglutide maintienne une forte dynamique de ventes pendant un certain temps, attirant de nombreuses entreprises pour concourir pour la mise en page !

La structure de la chaîne principale du sémaglutide est un polypeptide intermédiaire de 29 acides aminés Arg34GLP-1(9-37) ou un polypeptide intermédiaire de 27 acides aminés Arg34GLP-1(11-37). La production et la fabrication de ce polypeptide intermédiaire comprennent principalement des méthodes de synthèse chimique et de biopréparation. Par rapport à la synthèse chimique, la biopréparation a surmonté le goulot d'étranglement de la capacité et est plus adaptée à la production continue à grande échelle, ce qui peut réduire davantage les coûts de production et apporter des avantages économiques plus importants.

Tableau 1. Exemples de méthodes de biopréparation pour les polypeptides intermédiaires de sémaglutide

	Méthode de biopréparation (exemple 1)	Méthode de biopréparation (exemple 2)
Synthèse des gènes	Synthétiser une séquence de protéine de fusion, comprenant un peptide de fusion, un site de clivage de l'entérokinase et la séquence de la molécule principale cible	Synthétiser une séquence d'expression en tandem avec la séquence du gène GLP-1(9-37)
Ingénierie de la construction bactérienne	Introduire dans E. coli pour construire des bactéries génétiquement modifiées	Introduire dans E. coli pour construire des bactéries génétiquement modifiées
Expression des protéines de fusion	En optimisant la séquence du peptide de fusion, en modifiant le point isoélectrique et l'hydrophilie de la protéine, etc., l'expression de la protéine de fusion est efficacement augmentée	Après induction de fermentation à haute densité, une protéine de corps d'inclusion d'expression en tandem exprimant GLP-1 (9-37) est obtenue, et le repliement donne une protéine soluble
Acquisition de peptides intermédiaires	Une fois que la protéine de fusion subit un clivage par l'entérokinase, une purification et d'autres étapes, le polypeptide intermédiaire sémaglutide Arg34GLP-1(9-37) peut être obtenu	La protéine soluble peut être obtenue après avoir subi un clivage enzymatique en deux étapes avec l'enzyme Kex2 et la carboxypeptidase B, et des étapes de purification, pour obtenir le polypeptide intermédiaire sémaglutide GLP-1(9-37)

L'enzyme entérokinase ou Kex2 combinée à la carboxypeptidase B est une enzyme clé pour la chaîne peptidique principale du sémaglutide (méthode de biopréparation), et l'effet de coupe enzymatique et le coût sont cruciaux pour la production.Yisheng Biology s'engage à fournir des matières premières enzymatiques stables aux sociétés pharmaceutiques, en proposant des enzymes de haute qualité et des normes de contrôle qualité complètes pour aider les clients à améliorer la capacité de production et la stabilité des lots, à réduire les coûts et à entrer rapidement dans le marché. le marché.

Yeasen solution globale pour le sémaglutide

1.Entérokinase recombinante

Entérokinase recombinante (rEK) est une sous-unité de chaîne légère d'entérokinase intestinale bovine de haute pureté, qui a la même activité enzymatique de coupe spécifique que l'entérokinase extraite naturellement, avec un site de coupe Asp-Asp-Asp-Asp-Lys, capable d'éliminer la protéine de fusion située à l'extrémité N de la protéine pour éliminer les étiquettes de fusion inutiles, et est une protéase couramment choisie pour la fusion N-terminale. Elle présente un faible niveau de coupe irrégulière sur d'autres résidus.

Yisheng propose actuellement des entérokinases recombinantes provenant de différentes sources, de différentes qualités, et avec ou sans étiquettes His, parmi lesquelles les clients peuvent choisir.

Recombinant Yeasen Bovine L'entérokinase, His, exprimée dans la levure est une entérokinase bovine de haute pureté, de haute activité et hautement spécifique exprimée par la sécrétion de Pichia pastoris. Elle peut cliver efficacement les protéines de fusion dans une large plage de pH (4,5-9,5) et une large plage de températures, et conserve une activité partielle sous divers détergents et dénaturants. Ce produit possède une étiquette His, qui peut être facilement retirée grâce au Ni²⁺ colonne d'affinité après la réaction de coupe, simplifiant grandement le processus de purification ultérieur.

Caractéristiques

Haute spécificité : Une protéase spécifique qui coupe l'extrémité carboxyle de la lysine contenant quatre acides aspartiques : Asp-Asp-Asp-Asp-Lys ;

Haute pureté : Pas d’autres protéases, pas de coupure non spécifique ;

Aucune origine animale : Production recombinante, aucune contamination virale exogène, aucune utilisation de matières premières d’origine animale dans le processus de production ;

Qualité stable : La production par lots peut assurer une production par lots stable et continue ; aucune différence d'un lot à l'autre, qualité stable ;

Capacité suffisante : Le fermenteur de 500 L peut obtenir environ 50 MU d'entérokinase. Yeasen dispose de fermenteurs de systèmes différents de 5 à 1 500 L pour répondre aux différentes exigences des clients à différentes étapes pour les exigences de lots de produits ;

Fourniture de produits de différentes qualités : Les produits de qualité R&D (20395ES), de qualité GMP (20396ES) sont conformes au système de gestion de la qualité ISO 13485.

Données de test

Test d’activité des entérokinases :

Figure 1. L'effet de coupure enzymatique de Yeasen entérokinase (20395ES) est cohérent avec Concurrent N

Remarque : Le substrat positif (20391ES) est une protéine de fusion composée de deux séquences protéiques spécifiques reliées par DDDDK (site de reconnaissance et de coupure de l'entérokinase), avec un poids moléculaire global d'environ 64,6 kDa, qui peut être spécifiquement coupée en deux fragments protéiques indépendants par l'entérokinase, avec des poids moléculaires d'environ 27,9 kDa et 36,6 kDa, respectivement. Ce produit, en tant que substrat d'entérokinase, peut être utilisé pour la détection semi-quantitative ou qualitative de l'activité enzymatique de l'entérokinase recombinante ou naturelle.

Test de pureté de l'entérokinase :

Remarque : la valeur théorique de l'entérokinase est de 22,7 kDa. En raison de l'effet de glycosylation après expression dans Pichia pastoris, l'électrophorèse sur gel SDS montre que le poids moléculaire de la protéine cible est d'environ 40 kDa. En général, les bandes glycosylées auront une bande légèrement diffuse orientée vers le haut (comme indiqué sur la figure de droite). Notre société peut également fournir l'enzyme de déglycosylation Endo H (Cat#20414) aux clients pour la déglycosylation et l'analyse du gel afin de mesurer la pureté (comme indiqué sur la figure de gauche).

Test de spécificité de coupure de l'entérokinase :

Figure 3. Yeasen L'entérokinase (20395ES) présente une coupure non spécifique inférieure à celle du concurrent d'importation N

Remarque : Dans les mêmes conditions, Yeasen L'entérokinase (20395ES) et l'entérokinase concurrente d'importation N ont été utilisées pour les tests de coupure enzymatique. Les résultats montrent qu'après purification, les impuretés de coupure non spécifiques produites par Yeasen les concentrations d'entérokinase (20395ES) sont significativement inférieures à celles du concurrent d'importation N.

Test de stabilité accéléré et répété de l'entérokinase par congélation-décongélation :

Figure 4. Yeasen Le test de stabilité accéléré et répété de l'entérokinase (20395ES) montre que l'activité enzymatique n'a pas changé de manière significative.

Remarque : l'entérokinase Yeasen (20395ES) a sélectionné au hasard 2 lots, répété la congélation-décongélation 10 fois, 20 fois, l'activité enzymatique n'a pas changé de manière significative par rapport à l'activité enzymatique initiale.

Stocké à 25°C pendant 7, 16, 32 jours, à 37°C pendant 7, 14 jours, l'activité enzymatique n'a pas changé de manière significative par rapport à l'activité enzymatique initiale.

2. Enzyme Kex2 recombinante, carboxypeptidase B

Tableau 2. Guide de sélection des produits Yeasen Recombinant Kex2 Enzyme, Carboxypeptidase B

Numéro de produit	20418ES	20417ES
Produit Nom	Protéase Kex2 recombinante, exprimée dans la levure	CPB recombinant, exprimé dans E.coli
Qualité du produit	Qualité GMP	Qualité GMP
Source	Expression recombinante de Pichia pastoris	Expression recombinante d'E. coli
Activité	≥10,0 unités/mg pro	≥170 Unités USP/mg pro
Site de clivage	Reconnaît et clive spécifiquement les liaisons peptidiques au niveau du terminal acide carboxylique des acides aminés dibasiques tels que Arg-Arg, Lys-Arg	Hydrolyse spécifiquement les protéines du côté amino-terminal des acides aminés basiques (lysine, arginine, histidine) au niveau du C-terminus
Application du produit	1. Processus de clivage enzymatique dans la production de médicaments peptidiques. 2. Digestion enzymatique des protéines et cartographie des peptides, séquençage, etc.	1. Production d’insuline recombinante et de ses analogues. 2.Détermination des acides aminés à l'extrémité C-terminale des protéines. 3. Élimination des étiquettes histidines à l’extrémité C des protéines. 4. Production d’autres substances peptidiques recombinantes. 5. Synthèse enzymatique de certains composés spéciaux.

Enzyme Kex2 combinée à la carboxypeptidase B : exigences du processus d'expression en tandem, rendement élevé de l'intermédiaire sémaglutide après découpage enzymatique

Yfaciliter Base de production d'enzymes de qualité GMP

Base de production d'enzymes moléculaires ultra-propres certifiée ISO - UCF.ME, équipée d'équipements de purification et d'analyse physicochimique AKTA de qualité industrielle, d'unités de fermentation haute densité de 100 litres, d'ateliers de nettoyage standard de 10 000 litres et de lignes de production automatisées. Elle possède des systèmes de fermentation et de purification de diverses spécifications, notamment 5 L, 10 L, 30 L, 100 L, 500 L et 1 500 L, avec la capacité d'augmenter la production de 5 L à 1 500 L dans le domaine de l'industrialisation des enzymes moléculaires, répondant pleinement aux besoins en matières premières enzymatiques de base des clients en aval à différentes étapes telles que la recherche et le développement, l'échelle pilote et la production à grande échelle.

Yeasen dispose d'une solide équipe de R&D et d'une base de production d'enzymes avancée, améliorant continuellement la qualité et la capacité des enzymes clés pour la production de sémaglutide (entérokinase recombinante) grâce à une innovation et une optimisation technologiques continues, offrant des prix graduels pour différentes spécifications afin de répondre aux divers besoins des clients à différentes étapes de production.

Informations sur les produits promotionnels

Nom du produit	Numéro de produit	Spécification	Prix ​​catalogue ($)	Promotionnel Prix ​​($)
Entérokinase bovine recombinante, His, exprimée dans la levure	20395ES60/76/90/ 92/94	100 U/500 U/ 5000 Tu/ 100 KU/ 1 UM (1000 KU)	45/115/ 825/ 12000/ 360000	45/115/ 585/ 5600/ 19600

Informations sur les produits associés

Nom du produit	Numéro de produit	Spécification
Protéine de contrôle du clivage (entérokinase)	20391ES03/11	1 mg/4 mg
Protéase Kex2 recombinante, exprimée dans la levure	20418ES60	100 μg
CPB recombinant, exprimé dans E.coli	20417ES03/10	1 mg/10 mg
Endo H	20414ES92/97	10 000 U/50 000 U