Description du contexte

La purification des protéines est le processus d'isolement de la protéine cible des protéines totales de l'échantillon expérimental tout en conservant l'activité biologique et l'intégrité chimique de la protéine cible. Lors de la construction des vecteurs, en plus de certains éléments d'expression nécessaires, il est également nécessaire de prendre en compte l'optimisation des codons et le choix des étiquettes. Le choix de l'étiquette appropriée est non seulement bénéfique pour la purification des protéines et la promotion de la solubilité des protéines, mais ne doit pas non plus affecter la structure et la fonction de la protéine et les applications en aval. Cette section se concentre sur l'introduction des étiquettes His et GST.

Tableau 1. Introduction à His et à la balise GST

Étiqueter	Taille kDa	Séquence	Pureté	Solubilité	Suppression des balises	Enzyme de clivage des étiquettes
Son	~0,84	HHHHHH	+	+	Non requis	Protéase TEV
TPS	26	Composé de 211 acides aminés	++	++	Requis	Protéase 3C/PSP

Purification par affinité de la protéine His Tag

La résine d'agarose HisSep Ni-NTA est basée sur un gel d'agarose hautement réticulé comme matrice, couplé chimiquement à l'acide nitrilotriacétique tétracoordonné (NTA) comme ligand, et après chélation des ions nickel (Ni²⁺), elle forme une structure octaédrique très stable avec des ions nickel au centre de l'octaèdre. Cette structure peut protéger les ions nickel des attaques de petites molécules. Par rapport à la résine Ni-IDA, elle est plus stable et peut supporter certaines concentrations d'agents réducteurs, d'agents dénaturants ou d'agents de couplage dans des conditions difficiles. Par rapport à la résine Ni-TED, elle a une plus grande capacité d'adsorption pour les protéines cibles. Elle est devenue l'une des résines indispensables pour la purification des protéines marquées à l'His en laboratoire.

Figure 1. Diagramme du principe du produit de la résine His.

Tableau 2. Yeasen Guide de sélection de produits de purification His

Numéro de produit	20502ES	20503ES	20504ES/20505ES	20561ES
Nom du produit	Résine d'agarose HisSep Ni-NTA	Résine d'agarose HisSep Ni-NTA 6FF	Colonne de chromatographie HisSep Ni-NTA 6FF, 5 ml/1 ml	Perles MagBeads HisSep Ni-NTA
Matrice	Gel d'agarose réticulé à 6 %	Gel d'agarose à 6 % hautement réticulé	Gel d'agarose à 6 % hautement réticulé	Microsphères d'agarose magnétiques
Résistance à la pression	0,1 MPa, 1 bar	0,3 MPa, 3 bar	0.3 MPa, 3 bar	N / A
Capacité	＞40 mg de protéine marquée 6×His/mL de matrice	＞40 mg de protéine marquée 6×His/mL de matrice		> 40 mg 6×His-tagged protein/mL billes magnétiques
Suggestion de purification	Matrice avec une résistance à la pression moyenne, adaptée à la méthode d'incubation, à la purification à petite échelle par colonne gravitaire	Matrice à haute résistance à la pression, peut être utilisée pour la purification industrielle de protéines à grande échelle avec un instrument de purification de protéines		Purification rapide et pratique des protéines par séparation magnétique
Tolérance	8 M d'urée, 6 M d'acide chlorhydrique, 0,5-1 mM de DTT, 1 mM d'EDTA, etc.
Application	La purification des protéines marquées His est le premier choix, avec une charge élevée, une tolérance moyenne, particulièrement adaptée au système de purification d'expression procaryote

Annexe : Caractéristiques du produit HisSep Ni-NTA MagBeads (Cat#20561ES)

1. Par rapport aux colonnes et résines pré-emballées traditionnelles, il n'est pas nécessaire de procéder à plusieurs centrifugations des échantillons ni de contrôler le débit de l'échantillon, ce qui réduit considérablement le temps de purification.
2. La purification en une étape peut atteindre une pureté de plus de 95 % de la protéine cible.
3. Rendement élevé en protéines cibles : le rendement peut atteindre 70 à 80 %.
4. Peut être réutilisé jusqu'à 5 fois.
5. Ajustement facile de la concentration et du volume de la protéine cible.
6. Faible perte de protéines et aucun risque de dénaturation ou de précipitation des protéines.

Milieu de purification par affinité des protéines de marquage GST

La chromatographie d'affinité de la protéine marquée GST utilise l'affinité covalente entre la protéine de fusion GST et le glutathion fixe (GSH) via des liaisons soufre, et purifie selon le principe de l'élution par échange de GSH. Dans cette purification, un glutathion est combiné au bras du gel via une liaison soufre, puis la force d'action spécifique entre le glutathion et la glutathion S-transférase (c'est-à-dire la protéine marquée GST) est utilisée pour faire en sorte que la protéine de fusion marquée GST se combine avec le glutathion du bras sur le gel, séparant ainsi la protéine marquée des autres protéines. Le glutathion a généralement une forme oxydée GSSG et une forme réduite GSH. Lorsque nous utilisons l'élution GSH, le GSH entrera en compétition avec le glutathion du gel pour se combiner à la protéine de fusion, éluant ainsi la protéine cible.

La résine d'agarose au glutathion GSTSep est une résine de purification de protéines de marquage GST, fabriquée structurellement en combinant chimiquement de manière covalente du glutathion réduit avec un gel d'agarose à 6 % comme matrice via un bras à 12 atomes. Cette conception a considérablement amélioré l'efficacité de purification de la résine, lui permettant de transporter plus de 20 mg de protéine de fusion GST par millilitre de milieu. Le produit présente une bonne spécificité et un bon rapport coût-efficacité, et peut être utilisé pour purifier diverses glutathion S-transférases, protéines dépendantes du glutathion et dérivés recombinants du glutathion en une seule étape.

Tableau 3. Yeasen Guide de sélection des produits de purification GST

Numéro de produit	20507ES	20508ES	20509ES/20510ES	20562ES
Nom du produit	Résine d'agarose glutathion GSTSep	Résine d'agarose glutathion GSTSep 4FF	Colonne de chromatographie Glutathion 4FF GSTSep, 1 mL / 5 mL	Glutathion GSTSep Perles MagBeads
Matrice	Gel d'agarose réticulé à 6 %	Gel d'agarose à 4 % hautement réticulé	Gel d'agarose à 4 % hautement réticulé	Microsphères d'agarose magnétiques
Résistance à la pression	0,1 MPa, 1 bar	0,3 MPa, 3 bar	0,3 MPa, 3 bar	N / A
Capacité	> 20 mg de protéine GST (40 kDa)/mL de matrice	>10 mg de protéine GST (40 kDa)/mL de matrice		5 à 10 mg de protéine de fusion avec marqueur GST/mL de billes magnétiques
Application	Charge élevée, matrice avec une résistance à la pression moyenne, adaptée à la méthode d'incubation, à la purification à petite échelle par colonne gravitaire, recommandée pour les clients à l'échelle du laboratoire	Application Faible charge, résistance élevée à la pression de la matrice, peut être utilisé pour la purification industrielle de protéines à grande échelle avec un instrument de purification de protéines, plus facile à mettre à l'échelle		Purification des protéines à faible charge, rapide et pratique grâce à la séparation magnétique

Annexe : Caractéristiques du produit GSTSep Glutathione MagBeads (Cat#20562ES)

1. Purifiez directement les protéines cibles de haute pureté à partir d'échantillons biologiques par séparation magnétique en une seule étape, simplifiant considérablement le processus de purification et améliorant l'efficacité de la purification, adapté à la purification pratique des protéines de fusion GST dans la recherche scientifique et les domaines industriels.
2. En utilisant cette bille magnétique pour les expériences de GST Pull-down, étant donné que la séparation magnétique ne nécessite pas de centrifugation multiple ni de longs temps d'incubation, l'opération est plus simple, plus rapide et plus automatisée par rapport aux méthodes de chromatographie traditionnelles.

Informations sur le produit

Positionnement du produit	Nom du produit	Numéro de produit	Spécification
Purification des protéines de His Tag	Agarose HisSep Ni-NTA Résine	20502ES10/50/60	10 mL/50 mL/100 mL
	Agarose HisSep Ni-NTA Résine 6FF	20503ES10/50/60	10 mL/50 mL/100 mL
	Colonne de chromatographie HisSep Ni-NTA 6FF, 5 ml	20504ES08/25	5 ml/5 x 5 ml
	Colonne de chromatographie HisSep Ni-NTA 6FF, 1 ml	20505ES03/08	1 mL/5 x 1 mL
	Perles MagBeads HisSep Ni-NTA	20561ES08/25	5 ml/25 ml
Purification des protéines par marquage GST	Résine d'agarose glutathion GSTSep	20507ES10/50/60	10 mL/50 mL/100 mL
	Résine d'agarose glutathion GSTSep 4FF	20508ES10/50/60	10 mL/50 mL/100 mL
	Colonne de chromatographie Glutathion 4FF GSTSep, 1 ml	20509ES03/08	1 mL/5 x 1 mL
	Colonne de chromatographie Glutathion 4FF GSTSep, 5 ml	20510ES08/25	5 ml/5 x 5 ml
	Perles MagBeads au glutathion GSTSep	20561ES08/25	5 ml/25 ml