Hieff Canace^MT Uracil+ ADN polymérase haute fidélité est une nouvelle génération de ADN haute fidélité Polymérase basée sur l'ADN polymérase Pfu. Le Hieff Canace^MT L'ADN polymérase haute fidélité Uracil+ permet des réactions PCR rapides et précises pour des modèles complexes. Sa fidélité est considérablement améliorée et elle évite complètement l'échec d'amplification causé par l'utilisation d'amorces/modèles/dNTP contenant des dUTP. Le produit est équipé d'un tampon enzymatique optimisé et de l'ajout de composants améliorant la PCR, ce qui rend l'enzyme hautement efficace et adaptable à une large gamme de modèles, adaptée à l'amplification de modèles complexes.

Composants du produit

Expédition et stockage

Les composants sont expédiés avec des packs de glace et peuvent être stockés à -20°C pendant 1 an.

Application du produit

Amplification de bibliothèque haute fidélité à l'aide d'amorces/modèles/dNTP contenant des dUTP.

Précautions

1. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter des blouses de laboratoire et des gants jetables pour l'opération.

2. À des fins de recherche uniquement !

Instructions

Hieff Canace^MT L'ADN polymérase haute fidélité Uracil+ est utilisée d'une manière légèrement différente des enzymes haute fidélité classiques. Veuillez lire attentivement les instructions avant utilisation.

1. Système de réaction recommandé

Toutes les opérations doivent être effectuées sur la glace. 2×Canace^MT Le tampon PCR Uracil+ doit être bien mélangé après décongélation. Avant la configuration du système, préchauffez l'instrument PCR. Après l'ajout des composants, mélangez bien l'échantillon à l'aide d'une pipette et faites-le descendre au fond du tube, puis placez-le dans l'instrument PCR préchauffé pour l'amplification. Après utilisation, remettez tous les composants à -20 °C pour les stocker.

Tableau 1. Réaction d'amplification par PCR

[Notes]:

1) Réactifs : Décongeler suffisamment chaque composant avant utilisation ;

2) Modèles : L’utilisation de modèles d’ADN purifiés de haute qualité peut améliorer considérablement l’efficacité et le taux de réussite de l’amplification ;

3) dNTP : la concentration finale recommandée en dNTP est de 200 μM. Les dNTP fournis dans le kit ne contiennent pas de dUTP. Si des circonstances particulières nécessitent la préparation de modèles contenant du dUTP, du dUTP supplémentaire peut être ajouté jusqu'à une concentration finale de 400 μM.

4) Concentration de polymérase : 1 U/50 μL est recommandée. Elle peut être optimisée entre 0,5 et 2 U/50 μL, sans dépasser 2 U/50 μL. Afin d'empêcher la polymérase de dégrader les amorces en raison de l'activité exonuclide 3'→5', il est suggéré d'ajouter la polymérase au système réactionnel à la dernière étape.

5) Concentration finale en Mg2+ : La concentration finale du système est de 2 mM. Veuillez demander à notre société de vous fournir un tampon avec une faible concentration en Mg2+ ou sans Mg2+ si vous avez des besoins particuliers.

2. Procédure de réaction recommandée

Tableau 2. Procédure de réaction d'amplification PCR

[Notes] :

1) Température et durée de dénaturation initiale : 98 ℃ est recommandé. Le temps recommandé est de 30 secondes pour les modèles simples tels que l'ADN plasmidique, 1 minute pour les bibliothèques, 3 minutes pour les modèles complexes tels que l'ADNc et l'ADN génomique, et 5 à 10 minutes pour les modèles à teneur élevée en GC.

2) Température et durée de recuit : 60 ℃ est recommandé, ou un gradient de température peut être défini pour trouver la température optimale pour le recuit de l'amorce en fonction des besoins. Le temps de recuit recommandé est de 20 secondes et peut être ajusté dans les 10 à 30 secondes. Un temps de recuit trop long peut entraîner une dispersion des produits amplifiés sur le gel.

3) Température et durée d'extension : 72 ℃ est recommandé. Le temps d'extension est ajusté en fonction des besoins réels.