Description
Description du produit
2×Hieff Canace™ Plus PCR Master Mix (avec colorant) est une solution pré-mélangée 2× prête à l'emploi contenant Hieff Canace™ Plus une ADN polymérase haute fidélité, des dNTP et un système tampon optimisé. Le mélange comprend deux anticorps monoclonaux qui inhibent l'activité polymérase et l'activité exonucléase 3'→5' à température ambiante, permettant une PCR Hot Start hautement spécifique. L'ajout de facteurs d'élongation permet une amplification de longs fragments, avec des fragments cibles jusqu'à 13 kb. Cette enzyme présente une activité ADN polymérase 5'→3' et une activité exonucléase 3'→5', avec une fidélité 83 fois supérieure à celle de l'ADN polymérase Taq et 9 fois supérieure à celle de l'ADN polymérase Pfu ordinaire. Elle convient à l'amplification de modèles complexes, produisant des produits PCR à extrémités franches.
2×Hieff Canace™ Le Plus PCR Master Mix (avec colorant) offre des avantages tels que la simplicité, une sensibilité élevée, une forte spécificité et une excellente stabilité. Le système de réaction ne nécessite que l'ajout d'amorces et de matrice, et un protocole PCR en deux étapes peut être utilisé pour simplifier la procédure et gagner du temps. Le produit comprend un colorant de suivi d'électrophorèse, permettant le chargement direct des produits PCR pour l'analyse sur gel. De plus, il contient un agent protecteur spécial qui assure une activité stable même après des cycles répétés de congélation-décongélation.
Caractéristiques
| Cat.Nou. | 10154ES01 / 10154ES03 / 10154ES08 / 10154ES60 |
| Taille | 100 μL / 1 mL / 5×1 mL / 100×1 mL |
Stockage
Ce produit doit être conservé entre -25 et -15 ℃ pendant 1 années.
Instructions
1. Systèmes de réaction PCR recommandés.
| Composants | Volume（μL） | Final concentration |
| 2× Hieff Canace™ Plus Mélange PCR Master Mix (avec colorant)* | 25 | 1× |
| Modèle*** | x | - |
| Avant Prime（10 μmol/L）** | 2 | 0.4 μmol/L |
| Rinverse Prime（10 μmol/L）** | 2 | 0,4 μmol/L |
| ddH2O | Jusqu'à 50 | - |
*La concentration finale 1× du mélange contient 1 U/50 μL de polymérase, 2 mmol/L de Mg2+, et 200 μmol/L de dNTP.
**La concentration finale recommandée des amorces dans la réaction PCR est de 0,2 à 1 μmol/L, 0,4 μmol/L étant préféré.
***Quantités de modèles recommandées pour un système de réaction de 25 μL :
| Type de modèle | Taille du fragment (1 Ko à 10 Ko) |
| ADN génomique | 50 ng-200 ng |
| ADN plasmidique ou viral | 10 pg-20 ng |
| ADNc | 1 à 2,5 μL (ne dépassant pas 1/10 du volume total de PCR) |
2. Programme de réaction.
1)Protocole en deux étapes (préféré) :
| Faire du vélo étape | Temp. | Temps | Cycles |
| Dénaturation initiale | 98℃ | 3 min | 1 |
| Dénaturation | 98°C | 10 secondes | 30-35 |
| Extension | 68°C | 30 sec/ko | |
| Final etextension | 72°C | 5 min | 1 |
2)Protocole en trois étapes (conventionnel) :
| Faire du vélo étape | Temp. | Temps | Cycles |
| Dénaturation initiale* | 98℃ | 3 min | 1 |
| Dénaturation | 98°C | 10 secondes | 30-35 |
| Recuit** | 60°C | 20 seconde | |
| Extension*** | 72°C | 30 sec/ko | |
| Final etextension | 72°C | 5 min | 1 |
*Dénaturation initiale : recommandée à 98 °C pendant 3 min (5 à 10 min pour les modèles à GC élevé).
**Recuisson : Recommandé à 60°C pendant 20 secondes (réglable entre 10 et 30 secondes). Un recuit prolongé peut provoquer des bavures sur les gels.
***Extension : recommandée à 72°C pendant 30 sec/ko (jusqu'à 60 sec/ko pour les modèles complexes).
3)Protocole de recuit à gradient (recommandé pour les cibles difficiles) :
| Faire du vélo étape | Temp. | Temps | Cycles |
| Dénaturation initiale | 98℃ | 3 min | 1 |
| Dénaturation | 98°C | 10 secondes | 15 (diminution de 1°C par cycle) |
| Recuit à gradient | 70-55°C | 20 seconde | |
| Extension | 72°C | 30 sec/ko | |
| Dénaturation | 98°C | 10 secondes | 20 |
| Recuit | 55°C | 20 secondes | |
| Extension | 72°C | 30 sec/ko | |
| Final etextension | 72°C | 5 min | 1 |
4)Caractéristiques des différents protocoles PCR :
| Type de protocole | Vitesse | Spécificité | Rendement de la PCR | Taux de détection |
| En deux étapes | Le plus rapide | Haut | Moyen | Haut |
| En trois étapes | Moyen | Moyen | Le plus élevé | Moyen |
| Recuit à gradient | Lent | Haut | Moyen | Haut |
Remarques
1.Ce produit est destiné à la recherche uniquement.
2. Veuillez travailler avec des blouses de laboratoire et des gants jetables，pour votre sécurité.
Paiement et sécurité
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