Description
Ce kit peut directement et rapidement réaliser une amplification PCR de tissus de souris (tels que la queue de souris, l'oreille de souris, l'orteil de souris, les muscles, etc.) et présente une forte compatibilité avec les échantillons. Équipé d'un puissant tampon de lyse, ce kit peut rapidement lyser des échantillons et libérer l'ADN génomique. Le lysat peut être directement ajouté au système de réaction PCR sans purification, et l'opération est pratique. De plus, ce kit nécessite un faible apport d'échantillon, et 5 mg de tissu de souris ou 1 à 5 mm de queue de souris peuvent être utilisés pour les expériences.
Le mélange PCR direct pour souris 2× fourni par ce kit est une solution de réaction PCR à démarrage à chaud avec une concentration de 2 fois. Il contient tous les composants utilisés pour l'amplification PCR à l'exception du modèle et des amorces, ce qui simplifie grandement le processus d'opération et réduit les risques de contamination. Le kit peut être utilisé pour l'identification des transgènes, le génotypage de souris, etc.
Caractéristiques
- Moins d'échantillon requis : 5 mg de tissu de souris ou 1 à 5 mm de queue de souris
- Préparation pratique du modèle : pas besoin de broyer, pas besoin de raffiner et de purifier l'ADN, flux plus élevé, économie de temps et d'argent
- Système PCR optimisé : avec une spécificité plus élevée et une tolérance plus forte de l'inhibiteur de réaction PCR
Applications
- Identification des souris transgéniques
- Génotypage des souris
- Analyse de l'inactivation des gènes de la souris
Caractéristiques
| Spécification du produit | Trousse |
| Démarrage à chaud | Démarrage à chaud intégré |
| Conditions de transport | Blocs de glace |
| Type de produit | Kit PCR directe |
| Appliquer à (application) | Queue de souris, oreille de souris, orteil de rat, viscères, peau, etc. |
Composants
| Composants N° | Nom | 10185ES50 | 10185ES70 |
| 10185-A | Tampon ML | 5×1 mL | 20×1 mL |
| 10185-B | Tampon MT | 0,6 ml | 2 x 1,25 ml |
| 10185-C | Mélange PCR direct pour souris 2× | 500 μL | 2×1 mL |
- a) Le tampon ML est un tampon de lyse contenant de puissants dénaturants protéiques, veuillez porter des gants.
- b) Le tampon MT est un tampon d'arrêt utilisé pour arrêter la fonction de lyse du tampon ML.
- c) Mélange PCR direct pour souris 2× : contient de l'ADN polymérase Taq à démarrage à chaud, un mélange dNTP, du MgCl2, un tampon de réaction, un activateur de réaction PCR, un optimiseur, un stabilisateur, un colorant indicateur d'électrophorèse, etc.
Stockage
- Composant A : Le produit doit Conserver à une température comprise entre 2°C et 8°C pendant un an. En cas d'utilisation répétée pendant une longue période, éviter toute contamination croisée.
- Composant B/C : Le produit devrait être stocké à-25℃ ~ -15℃ pendant un an. Veuillez éviter les cycles de gel-dégel répétés.
Chiffres
1. Résultat de l'amplification du gène cible (dans un rayon de 1 kb)
Figure 1.Convient pour l'amplification du gène cible dans un rayon de 1 kb.
2. La démonstration de la vitesse d'extension
Figure 2. Gène de 500 pb, la vitesse d’extension peut atteindre 1 sec/kb.
Cité dans « TFPI est un récepteur cryptique colique pour TcdB du clade 2 hypervirulent C. difficile. Cell . 2022 Mar 17;185(6):980-994.e15. doi: 10.1016/j.cell.2022.02.010. »
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI est un récepteur cryptique colique pour TcdB du clade hypervirulent 2 C. difficile. Cell. 2022;185(6):980-994.e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010(IF:41.584)
[2] Zhao J, Chen J, Li YY, Xia LL, Wu YG. La tyrosine kinase de Bruton régule l'inflammation induite par les macrophages dans le rein diabétique via l'activation de l'inflammasome NLRP3. Int J Mol Med. 2021 ; 48(3) : 177. doi : 10.3892/ijmm.2021.5010(IF : 4.101)
| Problème courant | Raison possible | Solution |
| Il n’y avait aucune bande dans le contrôle positif et dans les échantillons à tester. | Le système de réaction PCR ou les conditions de réaction n’étaient pas adaptés. | Utilisez la PCR en gradient pour explorer les conditions de réaction optimales pour la PCR. |
| Un stockage inapproprié des réactifs PCR entraîne une perte d'activité. | Le mélange PCR direct pour souris 2× doit être conservé à -20 °C et éviter les congélations et décongélations répétées pendant l'utilisation. S'il est utilisé fréquemment, il peut être conservé à 4 °C pendant une courte période. | |
| Problèmes de conception de l'amorce. | Essayez de reconcevoir les amorces pour vérifier. | |
| Le contrôle positif présente une bande d’intérêt et l’échantillon à tester n’a pas de bande ou une bande faible. | Un stockage inapproprié ou prolongé peut entraîner une perte d’activité du réactif. | Utiliser des réactifs frais. |
| Ajouter du lysat tissulaire en excès. | Augmentez le système de réaction ou réduisez la quantité de lysat. | |
| L'échantillon de mélange de lyse a été stocké de manière incorrecte ou trop longtemps, et le génome d'ADN a été dégradé. | Le mélange de lysat peut être conservé à 4°C pendant 2 à 3 jours.Essayez d’utiliser un mélange de lysat fraîchement préparé pour la PCR. | |
| La quantité de modèle ajoutée n'est pas adaptée. | La quantité de modèle ajoutée a été optimisée dans la plage de 1 à 10 % du système réactionnel. | |
| Nombre insuffisant de cycles PCR. | Augmenter le nombre de cycles de PCR, de préférence 35 à 40 cycles. En raison de la complexité du modèle, les réactions de PCR doivent être réalisées avec 5 à 10 cycles de plus qu'avec un modèle d'ADN purifié. | |
| Amplification non spécifique | Température de recuit PCR trop basse, nombre de cycles, concentration d'amorce ou concentration de matrice trop élevée. | Augmenter la température de recuit PCR et diminuer le nombre de cycles PCR, la concentration d'amorce ou la concentration de modèle. |
| Incompatibilités d'amorces PCR. | Repenser les amorces PCR. | |
| La température est trop élevée lors de la préparation du système de réaction PCR ou le temps est trop long après la fin de la préparation. | La préparation du système de réaction PCR est réalisée à basse température et la réaction d'amplification PCR est réalisée dès que possible une fois la préparation terminée. | |
| La bande cible apparaît dans le contrôle négatif | Contamination des outils d'exploitation ou des réactifs. | Tous les réactifs ou équipements utilisés dans l'expérience doivent être autoclavés. Soyez prudent et délicat lors de la manipulation pour éviter que la séquence cible ne soit aspirée dans le pistolet à échantillon ou ne se renverse hors du tube à centrifuger. |
| Contamination croisée entre les échantillons. | Chaque échantillonneur n'est utilisé que pour un seul échantillon ; ou après avoir prélevé un échantillon, plongez le bord de l'échantillonneur dans une solution d'hypochlorite de sodium à 2 %, rincez à plusieurs reprises, puis séchez le résidu avec une serviette en papier propre. |
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