Description
Le kit PCR direct de tissus végétaux est un kit qui peut amplifier directement différents types de feuilles de plantes par PCR, avec une grande adaptabilité et une forte stabilité. Le kit utilise un système de tampon de lyse unique, qui peut rapidement lyser une variété d'échantillons de plantes et libérer l'ADN génomique. L'ADN génomique libéré peut être utilisé directement comme modèle sans éliminer les protéines, l'ARN ou les métabolites secondaires dans la réaction PCR. De plus, le kit nécessite une petite quantité d'échantillon, des feuilles de plantes d'une taille aussi faible que 1 mm peuvent être utilisées pour les expériences.
Le mélange maître 2×Plant Master Mix fourni dans ce kit présente une forte compatibilité d'amplification et peut utiliser directement le lysat de l'échantillon comme modèle pour une amplification efficace et spécifique. Ce réactif est un mélange de réaction PCR concentré 2 fois, qui contient tous les composants utilisés pour l'amplification PCR à l'exception du modèle et des amorces, ce qui simplifie grandement le processus de fonctionnement et réduit les risques de contamination.
Le kit peut être utilisé pour l'identification de plantes transgéniques, le génotypage des plantes, etc.
Expédition
Les produits sont expédiés avec des packs de glace.
Stockage
1. Le réactif 10187-A [Tampon P1] peut être conservé à 4℃ pendant 1 an.
2. Réactif 10187-B [Tampon P2], utilisé pour neutraliser le lysat, ce qui est bénéfique pour stocker l'échantillon plus longtemps et peut être stocké à 4℃ pendant 1 an.
3. Le réactif 10187-C [2× Plant Master Mix] peut être conservé à -20℃ pendant 1 an. Évitez les congélations et décongélations répétées.
Précautions
1. Lors des expériences sur les feuilles, il est recommandé d'utiliser des tissus foliaires fraîchement collectés. S'il s'agit d'un tissu congelé à long terme, il doit être conservé à -80 °C. Il faut éviter autant que possible les congélations et décongélations répétées pour éviter la dégradation du modèle et affecter l'efficacité de la PCR. Le tissu foliaire convient aux jeunes feuilles. S'il s'agit d'une feuille mature, évitez d'utiliser le tissu de la nervure principale de la feuille.
2. Il est recommandé d'amplifier le fragment d'une longueur maximale de 1 kb pour une efficacité d'amplification optimale.
3. Lors de l'échantillonnage, utilisez une perforatrice ou un couteau pour prélever un échantillon de taille appropriée. Lorsque les échantillons sont différents, la perforatrice ou le couteau doivent être nettoyés à chaque fois avant de traiter l'échantillon.
4. Pour le tissu foliaire, il est recommandé de prendre des feuilles de 1 à 10 mm, une longueur de feuille trop petite entraînera un faible rendement d'amplification par PCR, une longueur de feuille trop importante inhibera la réaction de PCR, utilisez la méthode de craquage thermique, d'écrasement avec une pointe de pipette et d'écrasement avec un broyeur pour traiter les feuilles des plantes. Après le traitement, il doit être secoué et centrifugé. Assurez-vous de prendre le surnageant pour le test. La précipitation inhibera sérieusement la réaction de PCR.
5. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter des blouses de laboratoire et des gants jetables pour l'opération.
6. Ce produit est destiné à la recherche UNIQUEMENT !
| Problèmes courants | Causes possibles | Solutions |
| Il n’y avait aucune bande dans le contrôle positif et dans les échantillons à tester. | Le système de réaction PCR ou les conditions de réaction n’étaient pas adaptés. | Utilisez la PCR en gradient pour explorer les conditions de réaction optimales pour la PCR. |
| Un stockage inapproprié des réactifs PCR les inactive. | Le mélange PCR 2× doit être conservé à -20 ℃, éviter les congélations et décongélations répétées lors de l'utilisation. S'il est utilisé fréquemment, il peut être conservé à 4 °C pendant une courte période. | |
| Problèmes de conception de l'amorce. | Essayez de reconcevoir les amorces pour vérifier. | |
| Le contrôle positif présente une bande d’intérêt et l’échantillon à tester n’a pas de bande ou une bande faible. | Le rapport entre le tampon de lyse et le tampon de neutralisation est inapproprié et le mélange de lyse affectera la valeur du pH du système PCR. | Dans des conditions normales, le pH du mélange de lyse neutralisé doit être d'environ 7-8 (le produit de lyse et le tampon P2 doivent être neutralisés en stricte conformité avec le rapport de 5:1). |
| Le mélange de lyse de l’échantillon a été stocké de manière incorrecte ou trop longtemps, et le génome de l’ADN a été dégradé. | Le mélange de lysat peut être conservé à 4°C pendant 5 jours, essayez d'utiliser un mélange de lysat fraîchement préparé pour la PCR. | |
| La quantité de modèle ajoutée n'est pas adaptée. | Optimiser la quantité de modèle ajoutée dans la plage de < 5 % du système réactionnel. | |
| Nombre insuffisant de cycles PCR. | Augmenter de manière appropriée le nombre de cycles de PCR, de préférence 35 à 40 cycles. En raison de la complexité du modèle, il est généralement préférable d'utiliser 5 à 10 cycles de réaction PCR supplémentaires plutôt que d'utiliser un modèle d'ADN purifié. | |
| Amplification non spécifique | Température de recuit PCR trop basse, nombre de cycles, concentration d'amorce ou concentration de matrice trop élevée. | Augmentez la température de recuit PCR et diminuez le nombre de cycles PCR, la concentration d'amorce ou la concentration de modèle. |
| Incompatibilité des amorces PCR. | Repenser les amorces PCR. | |
| La température est trop élevée lors de la préparation du système de réaction PCR ou le temps placé est trop long après la préparation. | La préparation du système de réaction PCR est réalisée à basse température et la réaction d'amplification PCR est réalisée dès que possible une fois la préparation terminée. | |
| La bande cible apparaît dans le contrôle négatif | Contamination des outils d'exploitation ou des réactifs. | Tous les réactifs ou équipements de l’expérience doivent être autoclavés.Soyez prudent et doux lors de la manipulation pour éviter que la séquence cible ne soit aspirée dans le pistolet d'échantillonnage ou ne se renverse hors du tube à centrifuger. |
| Contamination croisée entre les échantillons. | Chaque échantillonneur n'est utilisé que pour un seul échantillon ; ou après avoir prélevé un échantillon, plongez la lame de l'échantillonneur dans une solution d'hypochlorite de sodium à 2 %, rincez à plusieurs reprises, puis séchez le résidu avec une serviette en papier propre. |
Paiement et sécurité
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Enquête
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FAQ
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