Description
Le kit Hieff® Blood Advanced Direct PCR est un kit qui peut amplifier directement des échantillons de sang total sans purification de l'ADN ni prétraitement de l'échantillon, et est compatible avec le sang frais, le sang réfrigéré (congelé) et les taches de sang séchées commerciales contenant des anticoagulants conventionnels tels que l'EDTA, l'héparine, le citrate, etc. Le kit contient une combinaison d'ADN polymérase génétiquement modifiée avec une haute fidélité et une résistance aux inhibiteurs de PCR, un tampon PCR Hieff® Blood Advanced 2× avec un facteur d'élongation élevé, un facteur d'amélioration de l'amplification et un système tampon optimisé pour amplifier efficacement 8 kb de fragments génomiques dans des conditions d'extension rapide, et définir un temps d'extension de 3 à 5 s/kb pour les fragments inférieurs à 2 kb, réduisant ainsi considérablement le temps d'identification et de test des échantillons de sang.
Caractéristiques
| Fidélité (vs. Taq) | 1 × |
| Démarrage à chaud | Oui |
| Surplomb | 3'-A |
| Polymérase | ADN polymérase Taq (Cat. : 10726) |
Composants
| Non. | Nom | 10188ES20 | 10188ES60 |
| 10188-A | 2× Hieff® Tampon PCR avancé pour sang | 500 μL | 2,5 ml |
| 10188-B | Chef® Mélange avancé d'ADN polymérase haute fidélité | 20 μL | 100 μL |
| 10188-C | Mélange d'amorces de contrôle positif (10 μM chacune) | 100 μL | 200 μL |
| 10188-D | Tampon de chargement d'ADN 10× | 1 ml | 1 ml |
Instructions
Systèmes de réaction PCR recommandés.
| Composants | Volume (μL) |
| ddH2O | jusqu'à 50 μL |
| 2× Hieff® Tampon PCR avancé pour sang | 25 μL |
| Amorce directe (10 μM) | 2 μL |
| Amorce inverse (10 μM) | 2 μL |
| Chef® Mélange avancé d'ADN polymérase haute fidélité | 1 μL |
| Échantillon de sang | X |
2. Une concentration finale de 0,4 μM par amorce est recommandée, une concentration trop élevée entraînera une amplification non spécifique.
3. La concentration optimale du modèle de sang total varie de 0,5 % à 20 %, et l'utilisation recommandée est de 10 % comme condition d'essai initiale, c'est-à-dire que 5 μL de sang total sont ajoutés comme modèle au système de réaction de 50 μL, en prenant soin d'éviter d'aspirer des caillots sanguins. Pour les taches de sang séchées stockées sur des cartes filtrantes Whatman®, des morceaux de papier ronds d'environ 1 mm2 avec des taches de sang peuvent être prélevés et amplifiés directement dans la réaction PCR sans prétraitement.
Programme de réaction
| Faire du vélo étape | Temp. | Temps | Cycles |
| Dénaturation initiale | 95℃ | 5 minutes | 1 |
| Dénaturation | 95℃ | 15 secondes | 30-35 |
| Recuit | 60℃ | 15 secondes | |
| Extension | 72℃ | 3 à 10 secondes/Ko | |
| Final extension | 72℃ | 5 minutes | 1 |
La température de recuit est une valeur Tm générique ou 1 à 2 °C en dessous de la valeur Tm de l'amorce. Si le produit d'amplification est moins spécifique, un gradient de température de recuit peut être établi pour trouver les conditions de recuit optimales.
Un temps d'extension de 10 s/kb peut amplifier la plupart des fragments cibles inférieurs à 8 kb, et un temps d'extension de 3 à 5 s/kb peut amplifier la plupart des fragments inférieurs à 2 kb. Si l'efficacité de l'amplification est faible, le temps peut être prolongé de manière appropriée jusqu'à 20-30 s/kb, et ne doit pas dépasser 60 s/kb.
Expédition et stockage
Les produits doivent être conservés à -15℃ ~ -25℃ pour 1 an
Chiffres
Remarques
1. Il est recommandé d'utiliser le modèle sanguin à hauteur de 10 % du volume total de réaction, c'est-à-dire que 5 μL de sang total sont ajoutés au système de réaction de 50 μL comme modèle, en prenant soin d'éviter d'aspirer des caillots sanguins.
2. Un temps d'extension de 10 s/kb peut amplifier la plupart des fragments cibles inférieurs à 8 KB, et 3 à 5 s/kb peuvent amplifier la plupart des fragments inférieurs à 2 KB. Si l'efficacité d'amplification est faible, le temps peut être étendu à 30 s/kb.
3. Après la réaction PCR, il est recommandé de centrifuger le produit de réaction à 4 000 tr/min (1 000 × g) pendant 1 à 3 min pour précipiter les fragments de cellules sanguines et de prélever le surnageant pour une analyse en aval.
4. Ce produit ne peut pas être utilisé directement pour un diagnostic médical.
5. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter une blouse de laboratoire et des gants jetables.
Paiement et sécurité
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Enquête
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FAQ
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