La ligase d'ADN Quick T4 est un produit enzymatique unique qui peut être utilisé pour la ligature de fragments d'ADN et d'adaptateurs dans le processus de construction de bibliothèques NGS. Ce produit a été vérifié par séquençage à haut débit et présente une excellente qualité. Pour les clients qui n'ont pas besoin d'ajustement du système expérimental, il est recommandé d'acheter le module de ligature d'ADN Fast-Pace Hieff NGSTM (Cat#12607).

Composants du produit

Expédition et stockage

Le produit est expédié avec des packs de glace et peut être conservé à -20°C pendant deux ans.

Définition de l'unité

Dans un système de réaction de ligature de 20 μL, lorsque 6 μg de λDNA-Hind Ⅲ réagissent à 16℃ pendant 30 minutes, la quantité d'enzyme requise pour donner plus de 50 % de ligature des fragments d'ADN a été définie comme une unité (U).

Précautions

1. Si une petite quantité de précipitation se produit lorsque le tampon fond, veuillez le retourner et bien mélanger avant utilisation ;

2. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter des blouses de laboratoire et des gants jetables pour l'opération.

3. Ce produit est destiné à la recherche UNIQUEMENT !

Instructions

1. Les kits de construction de bibliothèques d'ADN courants ne sont généralement pas purifiés après la réparation des extrémités et le traitement A-Tailing, et effectuent directement la ligature de l'adaptateur. Veuillez vous référer à la préparation suivante pour le système de réaction. Vortexer soigneusement, essorer brièvement et incuber pendant 15 min à 20°C.

[Remarque] : *50 % de PEG 6000 n'est pas fourni dans le kit, vous devez le préparer vous-même.

**Reportez-vous au tableau suivant pour connaître le nombre d'adaptateurs.

***La quantité de Quick T4 DNA Ligase utilisée peut être ajoutée de 1 à 5 μL selon les besoins.

2. La qualité et la concentration des adaptateurs utilisés affectent directement l'efficacité de la ligature et le rendement de la bibliothèque. Une utilisation excessive d'adaptateurs peut produire davantage de dimères d'adaptateurs, tandis qu'une utilisation plus faible peut affecter l'efficacité de la ligature et le rendement de la bibliothèque. Le tableau suivant répertorie la quantité recommandée d'adaptateurs utilisés dans différentes situations d'ADN d'entrée à l'aide de ce kit.

[Remarque] : Mole d'ADN d'entrée (pmol) ≈ ADN d'entrée (ng)/ [0,66 × longueur moyenne de l'ADN d'entrée (pb)].

Exemple de calcul de ligature d'adaptateur : quelle quantité d'adaptateur faut-il ajouter lorsque l'ADN d'entrée est de 100 ng et que la longueur est de 300 pb ?

Étape 1 : Calculer le nombre de moles d'ADN d'entrée. Formule : Mole d'ADN d'entrée (pmol) ≈ ADN d'entrée (ng)/[0,66 × longueur moyenne de l'ADN d'entrée (pb)] ; Mole d'ADN d'entrée (pmol) = 100 ÷ (0,66 × 300) = 0,5 pmol ;

Étape 2 : Selon le tableau ci-dessus, calculez le nombre de moles d'adaptateur ajoutées. Lorsque l'ADN d'entrée est de 100 ng, le rapport molaire adaptateurs : ADN d'entrée est de 100:1, et le nombre de moles d'adaptateurs ajoutés = 100 × 0,5 pmol = 50 pmol ;

Étape 3 : Calculer le volume d'ajout de l'adaptateur. Concentration de l'adaptateur = 15 μmol/L (si vous utilisez l'adaptateur d'une autre société, vous devez déterminer sa concentration conformément à ses instructions) ; Volume de l'adaptateur ajouté = moles de l'adaptateur ajouté (50 pmol) ÷ concentration de l'adaptateur (15 μmol/L) = 3,34 μL (Remarque : 15 μmol/L = 15 pmol/μL) ;

En résumé, le volume auquel l'adaptateur peut être ajouté est de 3,4 μL. (Remarque : le volume d'ajout maximal de l'adaptateur ne dépasse pas 5 μL).