Description
Ce produit est une ARN polymérase du bactériophage T7 dérivée de l'expression de protéines recombinantes dans Escherichia coli. Il catalyse la synthèse 5'→3' de l'ARN sur l'ADN double brin à partir de sa séquence promotrice T7 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') et utilise les NTP comme substrats. L'ADN avec des extrémités franches linéaires double brin ou des extrémités saillantes 5' peut être utilisé comme matrice pour l'ARN polymérase T7, de sorte que les plasmides linéarisés et les produits PCR peuvent être utilisés comme matrices pour la recherche in vitro synthèse de l'ARN.
Remarque : G* est la première base du transcrit d’ARN.
Ce produit est fabriqué conformément aux réglementations GMP et fourni sous forme liquide.
Fonctionnalité
- Synthétiser des transcriptions longues et des transcriptions courtes, l'ARN peut être produit à 100-200 μg avec 1 μg de matrice d'ADN
- Rendement plus élevé et facilité d'utilisation
- Réduire les endotoxines
- Testé pour l'absence d'endonucléases, d'exonucléases, d'ARNases
Application
- Préparation de sondes d'ARN radiomarquées
- Génération d'ARN pour l'étude de la structure, du traitement et de la catalyse de l'ARN
- Contrôle de l'expression via l'ARN antisens
- Synthèse d'ARNm et d'ARNsg
Spécification
| Source | Exprimé en Escherichia coli avec un gène recombinant d'ARN polymérase T7 |
| Température optimale | 37℃ |
| Mémoire tampon de stockage | 50 mM de Tris-HCl, 1 mM d'EDTA, 10 mM de DTT, 100 mM de NaCl, 0,1 % de Triton X-100, 50 % (v/v) glycérine, pH 7,9 à 25℃ |
| Définition de l'unité | La quantité d'enzyme nécessaire pour incorporer 1 nmol de [3H] GMP dans le précipité insoluble dans l'acide en 1 heure à 37°C et pH 8,0 est défini comme 1 unité. |
Qualité
| Articles du COA | Standard |
| Activité | 250-300U/μL |
| Protéine concentration | ≥ 0,5 mg/ml |
| Pureté | ≥ 95 % |
| Endotoxine | < 20 UE/mg |
| Protéase résiduelle | Négatif |
| Exonucléase résiduelle | Négatif |
| Nickase résiduelle | Négatif |
| RNase résiduelle | Négatif |
| E. protéine hôte de coli | < 50 ppm |
| Hôte E.coli ADN | <10 fg/U |
| Mycoplasme ADN | Négatif |
Composants
| Composants N° | Nom | 10625ES10 (10 KU) | 10625ES60 (100 KU) | 10625ES86 (2 500 KU) | 10625ES99 (100 UM) |
| 10625 | ARN polymérase T7 de qualité GMP (250 U/μL) | 40 μL | 400 μL | 10 ml | 400 ml |
Expédition et stockage
Les produits de qualité GMP de l'ARN polymérase T7 sont expédiés avec de la glace sèche et peuvent être stockés à -15℃ ~ -25℃ pendant un an.
Chiffres
Figure 1. L'ARN standard a été synthétisé in vitro à l'aide du kit de synthèse d'ARN T7.
La réaction a été incubée dans un instrument PCR à 37 °C pendant 2 heures, puis purifiée par des billes magnétiques (Cat. n° 12602). Le résultat du rendement a été analysé par spectrophotomètre NanoDrop comme indiqué dans la figure 1.
Figures 2. Démonstration de la transcription de différentes longueurs d'ARN par le kit T7 respectivement dans l'électrophorétogramme (Figures 2A), le diagramme d'électrophorèse capillaire (Figures 2B) et le chromatogramme (Figures 2C)
Figure 3. Synthèse d’ARN coiffé in vitro.
La réaction a été incubée dans un instrument PCR à 37 °C pendant 2 h, puis purifiée par des billes magnétiques (réf. 12602). Le résultat du rendement a été analysé par spectrophotomètre NanoDrop comme indiqué sur la figure 3A. Le résultat de l'intégrité a été analysé par électrophorèse capillaire comme indiqué sur la figure 3B.
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FAQ
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