T7 ARN polymérase GMP de qualité (250 U / μL) -10625ES

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SKU: 10625ES10

Taille: 10 ku
Prix:
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Description

Ce produit est une ARN polymérase du bactériophage T7 issue de l'expression d'une protéine recombinante chez Escherichia coli. Il catalyse la synthèse 5'→3' d'ARN sur l'ADN double brin à partir de sa séquence promotrice T7 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') et utilise les NTP comme substrats. L'ADN à extrémités franches linéaires double brin ou à extrémités 5' saillantes peut servir de matrice pour l'ARN polymérase T7. Ainsi, les plasmides linéarisés et les produits de PCR peuvent servir de matrices pour les analyses in vitro. synthèse de l'ARN.

Remarque : G* est la première base du transcrit d’ARN.

Ce produit est fabriqué conformément aux réglementations GMP et fourni sous forme liquide.

Fonctionnalité

  • Synthétiser des transcriptions longues et des transcriptions courtes, l'ARN peut être produit à 100-200 μg avec 1 μg de matrice d'ADN
  • Rendement plus élevé et facilité d'utilisation
  • Réduire les endotoxines
  • Testé pour l'absence d'endonucléases, d'exonucléases, d'ARNases

Application

  • Préparation de sondes d'ARN radiomarquées
  • Génération d'ARN pour les études de la structure, du traitement et de la catalyse de l'ARN
  • Contrôle de l'expression via l'ARN antisens
  • Synthèse d'ARNm et d'ARNsg

Spécification

Source Exprimé en E. coli avec un gène recombinant d'ARN polymérase T7
Température optimale 37℃
Mémoire tampon de stockage 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0,1 % Triton X-100, 50 % (v/v) glycérine, pH 7,9 à 25℃
Définition de l'unité La quantité d'enzyme nécessaire pour incorporer 1 nmol de [3H] GMP dans le précipité insoluble dans l'acide en 1 heure à 37 °C et pH 8,0 est défini comme 1 unité.


Qualité

Articles COA Standard
Activité 250-300U/μL
Protéine concentration ≥ 0,5 mg/mL
Pureté ≥ 95 %
Endotoxine <20 UE/mg
Protéase résiduelle Négatif
Exonucléase résiduelle Négatif
Nickase résiduelle Négatif
RNase résiduelle Négatif
E. protéine hôte de coli <50 ppm
hôte E.coli ADN <10 fg/U
Mycoplasme ADN Négatif

Composants

Composants n° Nom 10625ES10 (10 KU) 10625ES60 (100 KU) 10625ES86 (2 500 KU) 10625ES99 (100 UM)
10625 ARN polymérase T7 de qualité GMP (250 U/μL) 40 μL 400 μL 10 ml 400 ml

Expédition et stockage

Les produits de qualité GMP de l'ARN polymérase T7 sont expédiés avec de la glace sèche et peuvent être stockés à -15℃ ~ -25℃ pendant un an.

Chiffres

Figure 1. L'ARN standard a été synthétisé in vitro à l'aide du kit de synthèse d'ARN T7.

La réaction a été incubée dans un instrument PCR à 37 °C pendant 2 h, puis purifiée par billes magnétiques (réf. 12602). Le rendement a été analysé par spectrophotomètre NanoDrop, comme illustré à la figure 1.

Figures 2. Démonstration de la transcription d'ARN de différentes longueurs par le kit T7 respectivement dans l'électrophorèse (Figures 2A), le diagramme d'électrophorèse capillaire (Figures 2B) et le chromatogramme (Figures 2C)

Figure 3. Synthèse d’ARN coiffé in vitro.

La réaction a été incubée dans un instrument PCR à 37 °C pendant 2 h, puis purifiée par billes magnétiques (réf. 12602). Le rendement a été mesuré par spectrophotomètre NanoDrop, comme illustré à la figure 3A. L'intégrité a été analysée par électrophorèse capillaire, comme illustré à la figure 3B.

Documents:

Manuels

10625_Manuel_HB221111_FR.pdf

Citations et références :

Stamatakos, CP, Nguyen, HT, Shekhani, R., Sidhu, G., Maximuck, WJ, Ellington, AD, & Marcotte, EM (2024). Optimisation à haut débit des variants du promoteur T7 pour un réglage précis de la transcription in vitro. Biochimie, 63(18), 2307–2318. https://doi.org/10.1021/acs.biochem.4c00188

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