Description
Il s'agit d'une variante modifiée de l'ARN polymérase T7 (ARNdb faible), dérivée de l'ARN polymérase T7 sauvage et produite chez Escherichia coli. Elle réduit significativement la production d'ARN double brin (ARNdb) tout en intégrant efficacement les analogues de la coiffe. présentant une transcription in vitro (IVT) hautement efficace comparable à l'ARN polymérase T7 de type sauvage. Il catalyse la synthèse 5'→3' de l'ARN sur l'ADN double brin à partir de sa séquence promotrice T7 (5'-TAATACGACTCACTATAG*-3') et utilise les NTP comme substrats.
Remarque : G* est la première base du transcrit d’ARN.
Fonctionnalité
- Niveau d'ARNdb inférieur à environ 1/100 000
- Compatible avec Trilink CleanCap AG, LZCap
- Rendements élevés comparables à ceux du WT
- Entrée de capitalisation inférieure
- Sans origine animale (AOF)
Veuillez trouver des informations sur le développement de cette enzyme.
Composants
| Composants n° | Nom | 10629ES10 | 10629ES60 | 10629ES72 | 10629ES86 |
|
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| (10 KU) | (100 KU) | (250 KU) | (2 500 KU) |
| 10629 | ARN polymérase CleaScrip™ T7 (qualité GMP, faible teneur en ARNdb, 250 U/μL) | 40 μL | 400 μL | 1 mL | 10 ml |
Caractéristiques
| Source | Recombinant E. coli avec le gène de l'ARN polymérase T7 |
| Température optimale | 37℃ |
| Mémoire tampon de stockage | 50 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM DTT, 100 mM NaCl, 0,1 % Triton X-100, 50 % (v/v) glycérine, pH 7,9 à 25℃ |
| Définition de l'unité | La quantité d'enzyme nécessaire pour incorporer 1 nmol de [3H] GMP dans le précipité insoluble dans l'acide en 1 heure à 37 °C et pH 8,0 est défini comme 1 unité. |
| Mg2+ recommandé | Acétate de magnésium 30 mM |
CQ Standard
| jeéléments | Spécification/Norme |
| Enzyme activité | 250-300U/μL |
| Pureté des protéines | ≥ 95 % |
| Endotoxine | <20 UE/mg |
| Protéase | Négatif |
| exonucléase | Négatif |
| Nickase | Négatif |
| RNase | Négatif |
| Protéine hôte d'E.coli | <50 ppm |
| Ehôte .coli ADN | <10 fg/U |
| Examen des mycoplasmes | Négatif |
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Chiffres
Figure 2. Évaluation de l'immunogénicité des produits IVT dans la PR murineW264.7 cellules (figures 2A et 2B). Les taux d'ARNm et de protéines de l'IFN-β étaient réduits dans la PR.W264.7 cellules transfectées avec de l'ARNm produit par des mutants par rapport au type sauvage, indiquant que l'ARNm synthétisé par l'ARNm T7 de type sauvage a provoqué la réponse immunitaire la plus forte, tandis que l'ARNm des mutants a montré une réponse significativement réduite.
Figure 3. La teneur en ARNdb de l'ARNm synthétisé avec l'ARN polymérase CleaScript™ T7 est inférieure à celle de l'ARNm synthétisé avec l'enzyme de type sauvage après traitement à la cellulose.
Expédition et stockage
Le les produits sont expédiés avec de la glace sèche et peuvent être stockés à -15℃ ~ -25℃ pendant un an.
Publication:
L'ARN polymérase T7 modifiée réduit la formation d'ARNdb en diminuant les activités de la transférase terminale et de l'ARN polymérase dépendante de l'ARN, The FEBS Journal, 3 mars 2025
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